1、 临床基因扩增检验操作规范临床基因扩增检验操作规范 1ppt课件2ppt课件一、临床基因扩增检验实验室的一、临床基因扩增检验实验室的 规范化设置及其各室的功能规范化设置及其各室的功能3ppt课件 .四个隔开的工作区域中每一区域都须有四个隔开的工作区域中每一区域都须有 专用专用的仪器设备。的仪器设备。.明确的明确的标记标记，如加样器或试剂等。，如加样器或试剂等。单一方向单一方向顺序，从试剂贮存和准备区、顺序，从试剂贮存和准备区、标本标本 制备区、扩增反应混合物配制和扩增区（简制备区、扩增反应混合物配制和扩增区（简 称扩增区）至产物分析区。称扩增区）至产物分析区。使用使用不同颜色不同颜色或有明显区
2、别标志的工作服。或有明显区别标志的工作服。实验室的实验室的清洁清洁应按试剂贮存和准备区至扩增应按试剂贮存和准备区至扩增 产物分析区的方向进行。产物分析区的方向进行。各自各自的清洁用具。的清洁用具。4ppt课件5ppt课件（一）试剂贮存和准备区（一）试剂贮存和准备区 。6ppt课件 。7ppt课件（二）标本制备区（二）标本制备区 8ppt课件 9ppt课件（三）扩增区（三）扩增区 。10ppt课件 11ppt课件（四）扩增产物分析区（四）扩增产物分析区12ppt课件 13ppt课件二、各阶段操作要求二、各阶段操作要求 14ppt课件（一）标本的采集（一）标本的采集 15ppt课件（二）标本的稳定
3、化处理（二）标本的稳定化处理16ppt课件（三）标本的运送（三）标本的运送 17ppt课件（四）标本的贮存（四）标本的贮存 18ppt课件（五）标本的处理（核酸提取）（五）标本的处理（核酸提取）19ppt课件20ppt课件（六）靶核酸的逆转录（六）靶核酸的逆转录（RT）和扩增）和扩增 21ppt课件22ppt课件（七）扩增产物的分析（七）扩增产物的分析23ppt课件实时荧光定量PCR24ppt课件TaqMan荧光定量荧光定量PCR原理原理探针两端分别用荧光基团和淬灭基团标记，因为距离相近，基团相互作用，不产生荧光；探针与模板杂交在引物区间内，当扩增进行时，Taq DNA聚合酶的5-3外切酶活性
4、降解探针，荧光基团和淬灭基团分开，受激产生荧光信号；荧光信号强度与扩增产物量成正比；25ppt课件26ppt课件27ppt课件三、三、PCR污染与对策污染与对策28ppt课件（一）污染的预防（二）污染源的追踪（三）污染源的处理29ppt课件（一）污染的预防（一）污染的预防30ppt课件3、改进实验操作：4、检查结果的可重复性。31ppt课件32ppt课件1、阳、阴性对照、阳、阴性对照 33ppt课件2、常见的环境污染源有、常见的环境污染源有 34ppt课件追踪可疑的环境污染源追踪可疑的环境污染源35ppt课件36ppt课件1.环境污染处理法环境污染处理法37ppt课件2.反应液的污染处理法反应
5、液的污染处理法38ppt课件39ppt课件40ppt课件 T A T A T A T A T A PCR A U A U A U UNG A A A 加热加热 A A A PCR41ppt课件42ppt课件43ppt课件44ppt课件45ppt课件46ppt课件（二）实验室布局不合理引起的污染问题（二）实验室布局不合理引起的污染问题 47ppt课件（三）（三）PCR操作中存在问题分析操作中存在问题分析48ppt课件1.阳性变阴性阳性变阴性(49ppt课件50ppt课件 51ppt课件52ppt课件53ppt课件54ppt课件55ppt课件56ppt课件 57ppt课件 58ppt课件 59ppt课件 60ppt课件61ppt课件
