1、高效液相色谱的基础知识 1高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 高效
2、液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法与经典液相色谱法 如对氨基酸分离，用经典色谱法，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。高效液相色谱法经典液相色谱法 速度高速极慢灵敏度高灵敏度低自动化高自动化低进料方式高压输液设备重力加料效率高效低高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理 其工作过程如下：高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护 泵的使用和维护泵的使用和维护1.防止任何固体微粒进入泵体，输液泵的滤器应经常清洗或更换。2.流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓
3、冲液的流动相不应保留在泵内。泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。3.泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。4.流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无法正常工作 高效液相色谱仪的注意事项高效液相色谱仪的注意事项柱的使用和维护1、使用前注意适用范围，如pH值范围、不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。2、使用符合要求的流动相；3、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。4、注意不能用纯水保存柱子，而应该用有
4、机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。5、不要高压冲洗柱子；高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护 流动相的脱气流动相的脱气 HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。紫外灯的保养紫外灯的保养 在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。高效液相色谱仪的注意事项高效液相色谱仪的注意事项一、流动相一、流动相 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水酸碱液及缓冲液需经过滤后使用。二、样品二、样品 采用过滤或离心方法处理样品，确保中不含固体颗粒。高效液相色谱仪的注意事项高效液相色谱仪的注意事项三、操作过程三、操作过程1、先以所用流动相冲洗系统一定时
5、间。正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；2、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护。3、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯；粘度计使用说明书 CAP2000+粘度计使用说明书（上）粘度计使用说明书（上）1.打开电源开关，若仪器已关闭电源有一段时间(如一个晚上)，应先预热30分钟2.装上锥转子。3.设置转子编号。4.设置温度 5.设置转速 6.压下手柄，使锥转子接近加热板，并且使手柄位于最低位置。等待约 10分钟，使锥转子与加样板温度接近。7.提起手柄，把样品加至加热板上，样品量请参
6、考附录 A。轻轻地压下手柄，样品CAP2000+粘度计使用说明书（下）粘度计使用说明书（下）样品应完全覆盖锥转子底部表面，并且溢出其边沿 1.0mm。8.等待约 1至 3分钟，使锥转子、加热板及样品的温度到达设置温度。9.设置运行时间及保持时间。10.若使用打印机，使仪器与打印机连机。11.按下 RUN键开始测量。12.读取及打印测量结果。13.提起手柄，取下锥转子，并且清洁干净。14.清洁加热板。粘度计使用图解粘度计使用图解1未接通电之前未接通电之前2接通电源接通电源3打开电源开关打开电源开关4系统初始化系统初始化8设置运行参数设置运行参数7加热完成加热完成5初始化完成初始化完成6压下转子加
7、热压下转子加热粘度计使用图解粘度计使用图解9 9放置样品放置样品1010压下转子压下转子1111放下护罩放下护罩1212点击开始点击开始 （RUNRUN）键）键1616清洁加热清洁加热板板1515提起手柄提起手柄1414读取数据读取数据1313运行中运行中粘度计使用图解粘度计使用图解1717断开电源断开电源1818关机完成关机完成1919拔下插销拔下插销 PH值的测定 PH的测定方法的测定方法 测定溶液测定溶液PHPH值的方法：值的方法：（1 1）酸碱指示剂用于粗测溶液）酸碱指示剂用于粗测溶液PHPH值范围；值范围；（2 2）PHPH试纸用以精略地测定溶液酸碱性的强弱；试纸用以精略地测定溶液酸
8、碱性的强弱；（3 3）PHPH计用以精确地测定溶液的计用以精确地测定溶液的PHPH值。值。PH的测定的测定 酸碱指示剂一般是弱的有机酸或弱的有机碱，它们酸碱指示剂一般是弱的有机酸或弱的有机碱，它们的颜色变化是在一定的的颜色变化是在一定的pHpH值范围内。我们把指示剂值范围内。我们把指示剂发生颜色变化的发生颜色变化的pHpH值范围叫做指示剂的变色范围。值范围叫做指示剂的变色范围。指示剂指示剂酸酸 碱碱 指指 示示 剂剂 变变 色色 范范 围围甲基橙甲基橙 4.4黄色黄色石蕊石蕊 8蓝色蓝色酚酞酚酞 10红色红色PH试纸的使用试纸的使用 用用PHPH试纸测定溶液的试纸测定溶液的PHPH值值,一般先
9、把一小块放在表一般先把一小块放在表面皿或玻璃片上，用沾有待测液的玻璃棒点试纸面皿或玻璃片上，用沾有待测液的玻璃棒点试纸的中部，不能把试纸放在待测液中，也不能用水的中部，不能把试纸放在待测液中，也不能用水湿润再测定湿润再测定PHPH值。值。PH计计-电位法电位法方法原理 用pH计测定溶液pH时，常用玻璃电极为指示电极，甘汞电极为参比电极。当pH玻璃电极和甘汞电极插入溶液时，构成一电池反应，两者之间产生一个电位差，由于参比电极的电位是固定的，因而该电位差的大小决定于试液中的氢离子活度，氢离子活度的负对数即为pH，可在pH 计上直接读出pH值。仪器及设备仪器及设备 pHSJ-3F计计操作步骤操作步骤
10、1.待测液的制备 2.测量前校正测量前校正：把电极插入缓冲溶液中，使标准溶液的pH值与仪器标度上的pH值相一致。然后移出电极，用水冲洗、滤纸吸干后插入另一标准缓冲溶液中，检查仪器的读数。最后移出电极、用水冲洗、滤纸吸干后待用。操作步骤操作步骤 3.测定：把玻璃电极的球泡浸入待测样品的下部悬浊液中，并轻微摇动，然后将饱和甘汞电极插在上部清液中，待读数稳定后，记录待测液 pH值。4.测量中校正测量中校正：每个样品测完后，立即用水冲洗电极，并用干滤纸将水吸干再测定下一个样品。在精确的测定中，每测定56个样品后，需要将饱和甘汞电极的顶端在饱和氯化钾溶液中浸泡一下，然后用pH标准缓冲溶液重新校正仪器。结
11、果计算结果计算一般的pH 计可直接读出pH值，不需要换算。仪器仪器:最大泡压法表面张力仪最大泡压法表面张力仪1套；移液管套；移液管(50mL，1支、支、1mL，1支支)；烧杯；烧杯(500mL，1个个)；吸耳球；吸耳球1个；个；U型压力型压力试剂：试剂：正丁醇正丁醇(A.R.)蒸馏水试剂：蒸馏水试剂：正丁醇正丁醇(A.R.)蒸馏水蒸馏水 激光粒度仪激光粒度仪激光粒度仪激光粒度仪 动态光散射原理动态光散射原理 由于由于任何悬浮于液体的颗粒都会不停的作布朗运动，其运动的强度与环境有关，同时也与颗粒本身的大小有关。并且并且相同条件下，大颗粒的布朗运动缓慢，小颗粒的布朗运动剧烈。Pecora 证明了证
12、明了实时波动的散射光可以在频域中产生一个分布，这个带宽就包含着颗粒运动的信息。因为相关曲线的准确度是决定仪器是否准确的根本因素。而相关曲线是由仪器的相关器得出的。光散光散射粒度仪的性能是由相关器决定的射粒度仪的性能是由相关器决定的。美国布鲁克海文公司FOQELS（高浓度激光粒度分析仪）采用BI-9000数字相关器，该相关器是目前世目前世界上公认的、功能最强大界上公认的、功能最强大的相关器。自动粒度分析仪，使用于小粒子的浓缩悬浮液体自动粒度分析仪，使用于小粒子的浓缩悬浮液体或者大分子溶液。一般情况下讲或者大分子溶液。一般情况下讲,尺寸在尺寸在2 2纳米到纳米到3 3微微米米的均可测量的均可测量,
13、Start,Clear 和和Runs开始，清除，运行按钮特定为你的采样收集数据。开始，清除，运行按钮特定为你的采样收集数据。Batch#序列号：键入样品的序列号序列号：键入样品的序列号 Runs运行：键入希望本样品成功运行的次数运行：键入希望本样品成功运行的次数Run Duration运行时期运行时期 以上参数可以随意设置。以上参数可以随意设置。使用于计算的参数在输入时应该使用于计算的参数在输入时应该注意注意：Temp.温度：键入控制样品的温度温度：键入控制样品的温度 Suspension 悬浮液：键入悬浮样品的介质悬浮液：键入悬浮样品的介质 Viscosity粘性：介质的粘度粘性：介质的粘度
14、 Copy to Clipboard拷贝到剪贴板拷贝到剪贴板 III.4 图形这个按钮允许你转换到带有数据显示的图形的界面或者没有图形只有数据的界面。一旦图形被激活，可以选择浏览图形。最简单的可用的表示法是对数正态分布，Effective Diameter和Polydispersity（有效直径和多分散性）用来生成粒度分散的对数正态分布 水分的测定 几种常见的测定方法几种常见的测定方法红外线干燥法红外线干燥法直接测定法直接测定法干燥法干燥法直接干燥法直接干燥法减压干燥法减压干燥法蒸馏法蒸馏法间接测定法：比重、折射率、电导、介电常数间接测定法：比重、折射率、电导、介电常数化学法化学法：卡尔卡尔费
15、休法费休法重量法重量法常压测定步骤常压测定步骤洗涤称量瓶，烘干、冷却至室温。洗涤称量瓶，烘干、冷却至室温。称瓶重称瓶重W0（称瓶重样品重）（称瓶重样品重）W1 95-105下烘干，约下烘干，约2-4小时。小时。取出，置于干燥器中冷却至室温。取出，置于干燥器中冷却至室温。称量干燥后的重量，称量干燥后的重量，W2。再烘干，冷却，称量，检查是否烘至恒重。再烘干，冷却，称量，检查是否烘至恒重。计算（失重计算（失重/样品重）样品重）%100%0121WWWW）水分（W0：称量瓶重，：称量瓶重，g；W1：干燥前试样与称量瓶重，：干燥前试样与称量瓶重，g；W2：干燥后试样与称量瓶重，：干燥后试样与称量瓶重，
16、g。蒸馏式水分测定仪蒸馏式水分测定仪甲苯或二甲苯甲苯或二甲苯:取甲苯或二甲苯先以水饱和后取甲苯或二甲苯先以水饱和后,分去水层分去水层,进行蒸馏进行蒸馏,收集馏收集馏出液备用出液备用.有机溶剂的选择：有机溶剂的选择：甲苯（沸点甲苯（沸点111 C111 C）二甲苯（沸点二甲苯（沸点140 C140 C）正戊醇（沸点正戊醇（沸点137.8 C137.8 C）对热不稳定的食品，一般不对热不稳定的食品，一般不采用二甲苯，因为它的沸点采用二甲苯，因为它的沸点高，常选用低沸点的苯、甲高，常选用低沸点的苯、甲苯或甲苯二甲苯的混合液。苯或甲苯二甲苯的混合液。对含糖分可分解放出水分的对含糖分可分解放出水分的样品
17、，如脱水洋葱、脱水大样品，如脱水洋葱、脱水大蒜，宜选用苯。蒜，宜选用苯。说明及注意事项说明及注意事项 1、有机溶剂一般用甲苯，其沸点微110.7。对于对于在高温易分解样品在高温易分解样品则用苯作蒸馏溶剂(苯沸点80.2，水苯其沸点则为69.25)，但蒸馏的时馏的时间需延长间需延长。2、蒸馏温度不宜太高蒸馏温度不宜太高,易使冷凝管上端的水气难以回收.3、仪器必须干净仪器必须干净,避免接收管和冷凝管壁附着水滴.卡尔卡尔费休法费休法 费休法或K-F法，是在1935年由卡尔费休提出的测定水分的容量方法，属于碘量法，对于测定水分最为专一，也是测定水分最为准确的化学方法。费休法的滴定总反应式：（I2+SO
18、2+3C5H5N+CH3OH）+H2O 2 C5H5N HI+C5H5N HSO4CH3 实际操作中各试剂用量摩尔比实际操作中各试剂用量摩尔比为为 I2：SO2：C5H5N=1：3：10 V（V1-V0）T 0.001 100水分（质量分数水分（质量分数%）=m（V1-V0）T 0.001 100式中：式中：T卡尔卡尔费休试剂对水的滴定度，费休试剂对水的滴定度，mg/ml；V1滴定样品所消耗的卡尔滴定样品所消耗的卡尔费休试剂体积，费休试剂体积，ml；V0滴定空白所消耗的卡尔滴定空白所消耗的卡尔费休试剂体积，费休试剂体积，ml；m样品质量，样品质量，g；：样品的密度：样品的密度 (1)适用范围适用范围 痕量水分痕量水分（低至（低至ppm级）的标准分析方法，用以校正其他级）的标准分析方法，用以校正其他测定方法。测定方法。(2)主要仪器主要仪器 KF1型水分测定仪（上海化工研究院制）或型水分测定仪（上海化工研究院制）或SDY84型型水分滴定仪（上海医械专机厂制）水分滴定仪（上海医械专机厂制）THETHE ENDEND
