1、核酸提取服务简介及应用核酸提取服务简介及应用核酸简介与提取意义核酸简介与提取意义核酸分为核酸分为RNA和和DNA两大类是重要的生物大分子，两大类是重要的生物大分子，是生命现象的分子基础。是生命现象的分子基础。DNA的遗传信息决定生命的主要性状，而mRNA在信息传递中起很重要的作用。其它如rRNA和tRNA以及microRNA同样在蛋白质的生物合成中发挥不可替代的重要功能。RNA和和DNA的提取是对于的提取是对于RNA和和DNA研究的最研究的最基础的步骤基础的步骤。核酸提取即采用不同方法从组织或血液中提取合适纯度与总量的RNA（含总RNA、mRNA、miRNA）与DNA。核酸提取服务的适用范围n
2、各类核酸相关实验的配套服务 如基因芯片公司、二代测序公司的样本前期准备，包括总RNA、总mRNA、miRNA和染色体的高质量抽提服务外包n样本库的建立 如医院或研究机构建立病人样本库、微生物样本库、植物样本库，建库中需要提取RNA或DNA作为样本的一种保存形式n大量样本的核酸代抽提 如医院或医药研发企业在涉及大量样本的荧光定量、芯片试验等工作中的核酸抽提外包核酸提取结果示意（以总RNA为例）nOD 值检测：紫外分光光度计进行测量 OD260/OD280 5S，表 示抽提的总RNA合格可以进行后续的实验步骤。总RNA电泳图核酸提取市场分析核酸提取市场分析n由于核酸提取是进行各种核酸实验的基本步骤
3、，所以目前市场而由于核酸提取是进行各种核酸实验的基本步骤，所以目前市场而言单独提取核酸的服务不像荧光定量实验那样普遍。核酸提取服言单独提取核酸的服务不像荧光定量实验那样普遍。核酸提取服务主要针对于芯片实验，高通量测序建库实验，荧光定量务主要针对于芯片实验，高通量测序建库实验，荧光定量PCR实实验，样本库建立等，可以作为这些工作的配套服务。验，样本库建立等，可以作为这些工作的配套服务。n目标客户：芯片服务企业（如上海生物芯片）、二代测序服务企目标客户：芯片服务企业（如上海生物芯片）、二代测序服务企业、进行大量基因表达筛选试验的医药研发企业或科研客户、希业、进行大量基因表达筛选试验的医药研发企业或
4、科研客户、希望进行高质量建样本库的医院或研究所客户、进行大量样本的基望进行高质量建样本库的医院或研究所客户、进行大量样本的基因组多态性研究的医院或研究所客户因组多态性研究的医院或研究所客户n国外的知名企业如国外的知名企业如Lifetech不单独进行核酸提取服务，而国内的不单独进行核酸提取服务，而国内的大型企业如生物芯片上海国家工程研究中心提取的服务价格较高。大型企业如生物芯片上海国家工程研究中心提取的服务价格较高。欣景生物科技的优势n1、高性价比的高水平服务。、高性价比的高水平服务。实验有一整套严格的实验质量标准和操作流程，所有试剂均采用国际中高档品牌。所得到的RNA与DNA可以满足各种高端核
5、酸实验，并已为欧美企业进行服务。价格具有很强竞争优势。n2、服务水平稳定。、服务水平稳定。在核酸提取领域有着丰富的经验，团队的主要技术人员都有六年乃至十年的核酸提取经验，熟悉各类组织或血液的RNA及DNA的提取，操作稳定，质控与交货时间都有严格保障。n3、服务灵活性强。、服务灵活性强。在保证提取质量的前提下，可以针对客户不同的需求制定不同的实验操作方案，满足其实验与成本需要，包括客户指定试剂品牌、指定保存方式、附带逆转录服务等等。我们服务所提供的结果n（一）实验结果报告RNA或DNA抽提数据、电泳图；有需求者可以提供安捷伦2100电泳结果。n（二）实验流程报告（完整实验记录）n（三）适合储存及
6、运输的RNA或DNA产物，具体保存形式可根据客户需求而定n（四）实验说明（所用仪器、试剂、耗材）我们所采用的设备1nEppendorf5810 离心机价格：12 万 RMB我们所采用的设备2nBiorad电泳与凝胶成像系统 价格：9 万 RMB我们所采用的设备3n安捷伦2100分析仪价格：20 万元RMB。我们所采用的设备4n Thermo系列超低温冰箱价格：7万元 RMB。核酸提取的实验步骤：核酸提取的实验步骤：n1、收到样品后进行清点，清点结束后填写存储清单并发给对方进行、收到样品后进行清点，清点结束后填写存储清单并发给对方进行确认。确认。n2、在收到样品起的一周内随机挑选样品进行摸索抽提
7、并向对方发送、在收到样品起的一周内随机挑选样品进行摸索抽提并向对方发送摸索抽提实验的抽提报告。摸索抽提实验的抽提报告。报告中（报告中（1）若是总）若是总RNA抽提有抽提有OD值和电泳图。值和电泳图。（2）若是）若是DNA抽提或者是抽提或者是microRNA抽提有抽提有OD值。值。3、摸索实验完成，若是抽提正常则继续进行正式的抽提实验实验结、摸索实验完成，若是抽提正常则继续进行正式的抽提实验实验结束后发给对方正式的抽提报告，若抽提结果不正常则需等待对方收束后发给对方正式的抽提报告，若抽提结果不正常则需等待对方收到摸索报告后的答复。到摸索报告后的答复。附：核酸提取的方法和应用。核酸的提取流程 1、
8、样本前处理 2、样本的提取和纯化。RNA分布不同丰度不同丰度组织名称组织名称样品样品量量总总RNARNA含量含量高丰度高丰度肝脏肝脏1mg1mg2-4g2-4g脾脏脾脏1mg1mg心脏心脏1mg1mg中丰度中丰度大脑大脑1mg1mg0.05-2g0.05-2g胚胎胚胎1mg1mg肾脏肾脏1mg1mg肺肺1mg1mg低丰度低丰度膀胱膀胱1mg1mg0-0.05g0-0.05g骨骨1mg1mg脂肪脂肪1mg1mg高丰度高丰度成纤细胞成纤细胞10105 50.5-1g0.5-1g人白细胞人白细胞10105 5中丰度中丰度酵母酵母10105 50.5-1.5g0.5-1.5g拟南芥叶片拟南芥叶片1mg
9、1mg0.2-0.5g0.2-0.5g低丰度低丰度烟草叶片烟草叶片1mg1mg0.05-0.1g0.05-0.1g玉米叶片玉米叶片1mg1mg核酸类样品的保存及运输核酸类样品的保存及运输n1、提取、提取RNA类的样品的运输及保存。类的样品的运输及保存。（1）由于由于RNA容易被容易被RNA酶降解所以在前期的处理中需要格外注酶降解所以在前期的处理中需要格外注意。大部分的细胞和组织可需要在液氮和干冰状态下运输。其中组织可意。大部分的细胞和组织可需要在液氮和干冰状态下运输。其中组织可以放入到专用的储存液体如以放入到专用的储存液体如RNAlater中在干冰状态下运输。中在干冰状态下运输。（2）对于）对
10、于RNA酶含量丰富的组织如胰腺等只能在干冰状态下运输。酶含量丰富的组织如胰腺等只能在干冰状态下运输。（3）样品在运输前需要在液氮条件下充分遇冷。）样品在运输前需要在液氮条件下充分遇冷。（4）抽提）抽提RNA类样品都必须在超低温冰箱（零下八十摄氏度）或者类样品都必须在超低温冰箱（零下八十摄氏度）或者液氮条件下保存。液氮条件下保存。2、提取、提取DNA类的运输及保存。类的运输及保存。此类样品一般也都是在干冰或者液氮条件下此类样品一般也都是在干冰或者液氮条件下运输。运输。此类样品也都是在超低温冰箱（零下此类样品也都是在超低温冰箱（零下80度）度）或者或者 液氮条件下保存，如果抽提好的液氮条件下保存，
11、如果抽提好的DNA样本，可样本，可以在以在-20度保存度保存 1、沉淀法 无论是RNA还是DNA都可以使用成熟的提取试剂（RNA使用Trizol,DNA使用DNAzol)进行简单的抽提然后再使用异丙醇进行沉淀。这种方法操作简单抽提的RNA或DNA可以用于后续的荧光定量PCR、mRNA纯化、芯片杂交实验(需要进行消化基因组）等。2、介质吸附 RNA和DNA还可以使用成熟的提取试剂附加专用的吸附柱进行快速提取。此类方法快速，得到的RNA和DNA纯度较高尤其是RNA可以除去基因组污染。得到的RNA和后续的荧光定量PCR、mRNA纯化、芯片杂交实验(RNA无需消化基因组）等。核酸提取基本方法核酸提取基
12、本方法根据根据吸附方吸附方法的不同分为法的不同分为细胞细胞基因组基因组DNA水相有机相RNA氯仿氯仿纯化纯化pH5.7离心离心加入裂解液加入裂解液实验流程图实验流程图细胞选择细胞选择 贴壁细胞贴壁细胞 悬浮细胞悬浮细胞操操 作作 流流 程程样品前处理、细胞裂解样品前处理、细胞裂解试剂试剂试剂盒试剂盒抽提抽提沉淀沉淀加入吸附柱加入吸附柱洗涤洗涤溶解溶解RNARNA/DNA/DNA沉淀沉淀获得获得RNARNA/DNA/DNA产物产物加去蛋白液加去蛋白液漂洗漂洗核酸洗脱收集核酸洗脱收集核酸抽提质量检测n1、OD 值检测：v 紫外分光光度计进行测量（选择正确的稀释倍数，确保OD260 值在0.21.0之间，通常离心柱法稀释10倍左右；v OD260/OD280 5S，表示抽提的总，表示抽提的总RNA合格可合格可以进行后续的实验步骤。（具体电泳图像在下一张幻灯片中。）以进行后续的实验步骤。（具体电泳图像在下一张幻灯片中。）总RNA电泳图图例。
