1、微生物人类健康2011 钟江一、微生物疾病的诊断病症观察显微镜检查生物化学检验微生物培养免疫学技术分子生物学方法微生物人类健康2011 钟江1、病症观察了解症状分析感染部位推测感染病原微生物人类健康2011 钟江病症观察：各种皮疹的比较莱姆病麻疹单纯疱疹病毒水痘微生物人类健康2011 钟江2、显微镜检查取样观察病原的形态特征，确定病原的性质，了解感染的情况观察免疫细胞的数量，了解体内炎症情况阴道分泌物涂片，显示奈氏淋球菌感染阴道分泌物涂片，显示奈氏淋球菌感染微生物人类健康2011 钟江3、微生物培养从样品中分离微生物，进行培养，了解微生物的：营养需要、代谢特征，宿主上、中：微生物对糖的利用下：
2、微生物对柠檬酸的利用微生物人类健康2011 钟江用于快速诊断的培养基试剂盒微生物人类健康2011 钟江4、生物化学检验有些感染会造成生理代谢变化，产生特征性的物质，可以作为诊断的工具举例：肝炎病毒感染造成血液中转氨酶水平上升，可用于诊断自动生化分析仪微生物人类健康2011 钟江5、免疫学技术利用抗原-抗体反应的特异性来诊断特定的病原感染。对于显微镜下难以看见的病毒等微生物的感染尤其有用。主要针对蛋白质进行检测微生物人类健康2011 钟江准备抗体抗原抗原（细菌、病毒（细菌、病毒或其组成部分）或其组成部分）分离纯化分离纯化注射采血采血分离抗体分离抗体标记抗体标记抗体微生物人类健康2011 钟江标记
3、抗体标记物：酶：加入合适的试剂后可显色荧光分子：可发出荧光放射性同位素：产生射线微生物人类健康2011 钟江检测病原体采样采样(血、组织）血、组织）抗原包被抗原包被加入抗体加入抗体洗去多余洗去多余抗体抗体定量定量读数读数显色显色微生物人类健康2011 钟江免疫荧光技术用产生荧光的分子代替酶微生物人类健康2011 钟江免疫学技术应用举例举例：乙肝病毒感染主要指标有（二对半）：表面抗原，表面抗原的抗体，e抗原，e抗原的抗体，核心抗原的抗体微生物人类健康2011 钟江乙肝病毒感染的免疫学检测情况之一：表面抗原的抗体阳性，余皆为阴性免疫接种产生效果情况之二（大三阳）：（大三阳）：表面抗原，e抗原，核心
4、抗原的抗体病毒活跃复制情况之三（小三阳）：（小三阳）：表面抗原，e抗体，核心抗原的抗体病毒复制不活跃，传染性较小情况之四：表面抗原，表面抗原抗体，核心抗原抗体阳性病毒急性感染已结束微生物人类健康2011 钟江其他免疫学方法凝血试验溶血试验.微生物人类健康2011 钟江6、分子生物学方法核酸杂交生物芯片PCR核酸序列分析微生物人类健康2011 钟江核酸杂交利用核苷酸间的特异性配对进行检测将DNA点在膜上将双链DNA变性为单链DNA加入根据特殊检测要求设计的标记探针斑点杂交微生物人类健康2011 钟江DNA转移杂交（Southern Blot）电泳将DNA片段分开将DNA从胶转移到膜在膜上进行杂交
5、、显色得到有关基因位置的信息吸水纸微生物人类健康2011 钟江生物芯片高度密集的核酸杂交借助微量精密操作技术高效率地检测不同基因的表达一般过程：将不同的基因探针点在介质（玻璃，高分子材料等）上从细胞中提取总RNA，并用荧光或同位素标记将细胞RNA与介质上的基因（DNA）进行杂交，洗去未杂交的RNA用生物芯片扫描仪测定每一点上的信号，确定细胞中是否有特定的RNA及RNA的水平微生物人类健康2011 钟江生物芯片6400点的芯片（12x14mm）微生物人类健康2011 钟江生物芯片微生物人类健康2011 钟江生物芯片微生物人类健康2011 钟江生物芯片在微生物疾病诊断中的应用一次试验诊断所有病原体
6、和疾病蛋白质芯片：用类似的技术结合抗原-抗体反应原理，进行高效率的免疫学检测微生物人类健康2011 钟江多聚酶链式反应（PCR）通过将微量的核酸扩增来检测病原材料：模板：样品中原有的核酸引物：DNA复制必须要有一小段DNA作为先导物，可以设计特殊引物来扩增特定的DNA序列高温多聚酶：能在高温下保持活性的酶原理：高温下双链DNA变性成单链降低温度让引物和模板配对高温聚合酶合成新的DNA如此循环往复多次微生物人类健康2011 钟江PCR反应的反应物模板模板引物引物1，2（过量）（过量）其他：其他：核苷酸、高温聚合酶等核苷酸、高温聚合酶等微生物人类健康2011 钟江PCR反应：第一轮第一步：加热变性
7、第一步：加热变性第二步：降温配对第二步：降温配对第三步：新链合成第三步：新链合成微生物人类健康2011 钟江PCR反应：第二轮第三步：新链合成第三步：新链合成第一步：加热变性第一步：加热变性第二步：降温配对第二步：降温配对微生物人类健康2011 钟江PCR反应：第三十轮微生物人类健康2011 钟江PCR微生物人类健康2011 钟江Kary B.Mullis 1993年诺贝尔化学奖I was working for Cetus,making oligonucleotides.They were heady times.Biotechnology was in flower and one spr
8、ing night while the California buckeyes were also in flower I came across the polymerase chain reaction.I was driving with Jennifer Barnett to a cabin I had been building in northern California.She and I had worked and lived together for two years.She was an inspiration to me during that time as onl
9、y a woman with brains,in the bloom of her womanhood,can be.That morning she had no idea what had just happened.I had an inkling.It was the first day of the rest of my life.微生物人类健康2011 钟江California Buckeye Tree微生物人类健康2011 钟江PCR：快速检测的基础只要知道病原体的部分特征性核酸序列，就可以设计引物，进行PCR检测数小时之内可完成检测新的技术：定量检测微生物人类健康2011 钟江DNA序列测定对于一些难以判定的病原，特别是新的或是变异的病原，有时需要通过序列测定来了解病原的特性新一代核酸序列测定的方法：成本大大降低，效率大大提高可能彻底改变疾病检测和预防DNA测序的成本降低速度之快使“摩尔定律”相形见绌
