1、微厌氧细菌anaerobic culture oven厌氧手套箱厌氧手套箱 G G+，可形成芽胞的大杆菌可形成芽胞的大杆菌 抵抗力强抵抗力强 主要分布在土壤、人和动物肠道中主要分布在土壤、人和动物肠道中 芽胞发芽形成繁殖体，产生芽胞发芽形成繁殖体，产生外毒素外毒素和酶引起人、和酶引起人、动物疾病动物疾病 芽胞形态、在菌体中的位置互不相同，鉴别菌芽胞形态、在菌体中的位置互不相同，鉴别菌种有意义种有意义 第一节、厌氧芽胞梭菌第一节、厌氧芽胞梭菌 (ClostridiumClostridium )介绍三类：介绍三类：破伤风梭菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌破伤风梭菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌 （破伤风）（破
2、伤风）（肉毒病）（肉毒病）（气性坏疽）（气性坏疽）第一节、厌氧芽胞梭菌第一节、厌氧芽胞梭菌 (ClostridiumClostridium)破伤风梭菌破伤风梭菌（C.tetaniC.tetani）人和动物的肠道中，污染土壤，形成芽孢而长人和动物的肠道中，污染土壤，形成芽孢而长期存在期存在 外伤外伤或使用不洁器具引起，厌氧条件下生长发或使用不洁器具引起，厌氧条件下生长发 芽繁殖，释放毒素，引起破伤风芽繁殖，释放毒素，引起破伤风 典型症状：强直性痉挛，典型症状：强直性痉挛，抽搐抽搐-窒息、呼吸衰竭窒息、呼吸衰竭 外伤感染后死亡率达外伤感染后死亡率达303050%50%，新生儿死亡率可，新生儿死亡率
3、可 高达高达90%90%（一）生物学性状（一）生物学性状l 菌体细长，有周鞭毛，无荚膜菌体细长，有周鞭毛，无荚膜l 有芽胞，呈正圆，位于顶端，整个有芽胞，呈正圆，位于顶端，整个菌体呈鼓槌状菌体呈鼓槌状，为本菌典型特点，为本菌典型特点l G+G+，专性厌氧菌，专性厌氧菌l 有溶血现象有溶血现象l 芽胞抵抗力芽胞抵抗力强强耐受煮沸耐受煮沸60min60min，干热，干热100 1h100 1h可被破坏可被破坏在干燥的土壤和尘埃中可存活数十年在干燥的土壤和尘埃中可存活数十年繁殖体与其他细菌相似繁殖体与其他细菌相似l 繁殖体对青霉素敏感繁殖体对青霉素敏感（一）生物学性状（一）生物学性状二、致病性二、致
4、病性经伤口感染人体经伤口感染人体,局部繁殖局部繁殖,不扩散到血流不扩散到血流1 1、伤口需形成厌氧微环境、伤口需形成厌氧微环境 （伤口的厌氧微环境伤口的厌氧微环境是本菌生长繁殖和致病的是本菌生长繁殖和致病的重要条件）：重要条件）：v伤口深而窄（如刺伤）伤口深而窄（如刺伤）v混有泥土和异物，或大面积创伤，坏死组织、混有泥土和异物，或大面积创伤，坏死组织、凝血块较多凝血块较多v同时伴有需氧菌或兼性厌氧菌感染同时伴有需氧菌或兼性厌氧菌感染2 2、致病物质、致病物质T 致病物质致病物质 病菌产生的外毒素病菌产生的外毒素 即：破伤风溶血毒素和即：破伤风溶血毒素和破伤风痉挛毒素破伤风痉挛毒素 T 痉挛毒素
5、是主要致病物质，痉挛毒素是主要致病物质，属神经毒素属神经毒素T 毒性极强，不耐热，可被胃蛋白酶破坏毒性极强，不耐热，可被胃蛋白酶破坏T 对对脊髓前角细胞和脑干神经细胞有高度亲和力脊髓前角细胞和脑干神经细胞有高度亲和力T 有免疫原性，可产生有免疫原性，可产生抗毒素抗毒素T 可制备可制备类毒素类毒素3 3、致病机理、致病机理阻止上下神经元间正常抑制性神经冲动传递，阻止上下神经元间正常抑制性神经冲动传递，造成骨骼肌强直性痉挛造成骨骼肌强直性痉挛正常传导正常传导1屈肌屈肌伸肌伸肌2121.1.运动神经元运动神经元 2.2.抑制性中间神经元抑制性中间神经元神经冲动传入神经冲动传入毒素作用毒素作用 神经冲
6、动传入神经冲动传入 2 1 2 毒素作用位点毒素作用位点 1.运动神经元运动神经元 2.抑制性中间神经元抑制性中间神经元屈肌屈肌伸肌伸肌1阻止运动神经元的抑制性神经递质（阻止运动神经元的抑制性神经递质（-氨氨基丁酸及甘氨酸）的释放基丁酸及甘氨酸）的释放3.3.致病过程致病过程l 侵入伤口，伤口形成厌氧微环境侵入伤口，伤口形成厌氧微环境 细菌仅在局部繁殖，释放毒素细菌仅在局部繁殖，释放毒素 破伤风（咀嚼肌痉挛破伤风（咀嚼肌痉挛-牙关禁闭，苦笑面容牙关禁闭，苦笑面容 背部及四肢肌肉痉挛背部及四肢肌肉痉挛-角弓反张）角弓反张）破伤风潜伏期可从几天至几周，与原发感染的破伤风潜伏期可从几天至几周，与原发
7、感染的部位距中枢神经系统的长短有关部位距中枢神经系统的长短有关破伤风的临床表现破伤风的临床表现左上：牙关紧闭左上：牙关紧闭左下及右上：左下及右上：角弓反张角弓反张破伤风的临床表现破伤风的临床表现左上及左下：左上及左下：苦笑面容苦笑面容右上：角弓反张右上：角弓反张三、免疫性三、免疫性l 体液免疫体液免疫抗毒素的中和作用抗毒素的中和作用l 极少量毒素即可致病极少量毒素即可致病,但少量毒素不足以引起免疫但少量毒素不足以引起免疫l 破伤风主要是抗毒素发挥中和作用（毒素与破伤风主要是抗毒素发挥中和作用（毒素与CNSCNS组组织结合非常牢固，一旦结合则抗毒素不能发生中织结合非常牢固，一旦结合则抗毒素不能发
8、生中和作用）和作用）-及及早早治疗治疗v获得有效抗毒素的途径是人工免疫获得有效抗毒素的途径是人工免疫:主动、被动主动、被动四、微生物检查四、微生物检查v直接涂片染色镜检：一般不进行直接涂片染色镜检：一般不进行v典型的症状和病史即可作出诊断典型的症状和病史即可作出诊断v必要时厌氧培养必要时厌氧培养防治原则：防治原则：一旦发病，疗效不佳，预防是关键一旦发病，疗效不佳，预防是关键清创：防止创口厌氧微环境的形成清创：防止创口厌氧微环境的形成紧急预防和治疗：早期足量注射紧急预防和治疗：早期足量注射破伤风抗毒素破伤风抗毒素 （tetanus antitoxin，TAT）注意皮试注意皮试 和抗生素和抗生素特
9、异性预防：注射破伤风特异性预防：注射破伤风类毒素类毒素 百白破三联疫苗百白破三联疫苗 免疫程序：免疫程序：3 3、4 4、5 5月月 3 3次次 2 2、7 7岁加强岁加强 2 2次次 特殊情况特殊情况 1 1次次产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌 (C Cperfringensperfringens)1 1、气性坏疽和食物中毒主要病原菌、气性坏疽和食物中毒主要病原菌2 2、厌氧芽孢梭菌、厌氧芽孢梭菌一、生物学性状一、生物学性状vG+G+粗大杆菌粗大杆菌v芽胞位于菌体芽胞位于菌体次极端次极端，呈呈椭圆形椭圆形，不大于菌体，不大于菌体v无鞭毛，可形成无鞭毛，可形成荚膜荚膜1 1、形态与染色、形态与染色v
10、厌氧生长繁殖快厌氧生长繁殖快,42,42度最适温度度最适温度,代时代时8min8minv血平板上形成血平板上形成双层溶血环双层溶血环，内层完全溶血，外层不完内层完全溶血，外层不完 全溶血全溶血v 能分解多种糖类产酸产气能分解多种糖类产酸产气v 汹涌发酵现象：汹涌发酵现象：将牛乳培养将牛乳培养 基中的凝固酪蛋白冲成蜂窝状基中的凝固酪蛋白冲成蜂窝状2 2、培养特性、培养特性汹涌发酵3.分类v根据产生毒素不同，可分为五型：根据产生毒素不同，可分为五型：A A、B B、C C、D D、E Ev对人致病主要是对人致病主要是A A型：型：可引起气性坏疽和食可引起气性坏疽和食物中毒物中毒vC C型中部分菌株
11、可以引起：坏死性肠炎型中部分菌株可以引起：坏死性肠炎v其他型别主要引起动物腹泻和肠炎。其他型别主要引起动物腹泻和肠炎。致病性致病性1气性坏疽气性坏疽感染途径：创伤感染，产后宫内感染。感染途径：创伤感染，产后宫内感染。致病条件同破伤风致病条件同破伤风致病物质：荚膜和外毒素。致病物质：荚膜和外毒素。所致疾病所致疾病l 气性坏疽气性坏疽主要由主要由A A型产气荚膜梭菌引起型产气荚膜梭菌引起潜伏期短，发展迅速，病情险恶，死亡率高，潜伏期短，发展迅速，病情险恶，死亡率高，以组以组织坏死，气肿，剧痛，恶臭和全身中毒为特征织坏死，气肿，剧痛，恶臭和全身中毒为特征 毒素损伤血管内皮细胞，红细胞，血管通透性上升
12、毒素损伤血管内皮细胞，红细胞，血管通透性上升 出血、水肿、局部坏死出血、水肿、局部坏死 分解糖产气，压迫软组织、血管分解糖产气，压迫软组织、血管 加重组织坏死（捻发音）加重组织坏死（捻发音）分解组织，病变迅速扩散，引起全身中毒症状分解组织，病变迅速扩散，引起全身中毒症状气性坏疽气性坏疽2.2.食物中毒食物中毒肠毒素引起，作用机理同霍乱肠毒素肠毒素引起，作用机理同霍乱肠毒素食入被大量细菌污染的食物（多为肉类）食入被大量细菌污染的食物（多为肉类）临床表现：腹痛、腹胀、水样腹泻；可自愈临床表现：腹痛、腹胀、水样腹泻；可自愈三、微生物学检查三、微生物学检查l 标本标本:深创取标本、食物残渣深创取标本、
13、食物残渣l 直接涂片：直接涂片：l革兰阳性大杆菌、白细胞少且不典型、伴有革兰阳性大杆菌、白细胞少且不典型、伴有其它杂菌其它杂菌l 厌氧培养厌氧培养l 汹涌发酵汹涌发酵l 必要时作动物实验必要时作动物实验早期诊断能避免病人最终截肢或死亡早期诊断能避免病人最终截肢或死亡四、防治原则四、防治原则v早诊断早治疗早诊断早治疗v对伤口及时清创、扩创，对伤口及时清创、扩创，必要时截肢必要时截肢v青霉素抗菌，早期多价抗毒素，高压氧青霉素抗菌，早期多价抗毒素，高压氧G+G+杆菌杆菌芽胞呈椭圆形，直径大于菌体，位于次芽胞呈椭圆形，直径大于菌体，位于次极端，使细胞呈网球拍状极端，使细胞呈网球拍状无荚膜，有周鞭毛无荚
14、膜，有周鞭毛生物学性状生物学性状肉毒梭菌肉毒梭菌(C.botulinum)抵抗力：强，耐热抵抗力：强，耐热培养特点：专性厌氧培养特点：专性厌氧 肉毒毒素不耐热肉毒毒素不耐热:煮沸煮沸1 1分钟即可被破坏，分钟即可被破坏，但芽胞耐热但芽胞耐热,煮沸煮沸3-53-5小时小时 根据神经毒素的抗原性分根据神经毒素的抗原性分A-G 7A-G 7个型，各型个型，各型毒素只能被同型抗毒素中和毒素只能被同型抗毒素中和二、致病性二、致病性n 致病物质肉毒毒素，剧毒致病物质肉毒毒素，剧毒（对人致死量为（对人致死量为0.10.1g)g)（目前已知毒性最强的毒素目前已知毒性最强的毒素）n 结构、功能和致病机制与破伤风
15、外毒素相似结构、功能和致病机制与破伤风外毒素相似n 肉毒毒素是神经毒素肉毒毒素是神经毒素n 作用位点不同作用位点不同n 结果：肌肉迟缓性麻痹（松弛性麻痹）结果：肌肉迟缓性麻痹（松弛性麻痹）致病机理致病机理l作用位点：颅脑神经核和外周神经末梢、作用位点：颅脑神经核和外周神经末梢、肌肉接头肌肉接头l导致：乙酰胆碱释放受阻，影响神经冲动导致：乙酰胆碱释放受阻，影响神经冲动传递传递l结果：结果：肌肉松弛性麻痹肌肉松弛性麻痹所致疾病所致疾病（1 1）食物中毒食物中毒引起中毒食品多为豆制品、面制品、罐头及火腿引起中毒食品多为豆制品、面制品、罐头及火腿毒素源性食物中毒，非细菌感染毒素源性食物中毒，非细菌感染
16、l 临床表现：临床表现：少见胃肠道症状，主要为少见胃肠道症状，主要为神经末梢麻痹神经末梢麻痹（松驰型）（松驰型）眼睑下垂、斜视、吞咽困难等眼睑下垂、斜视、吞咽困难等,呼吸困难呼吸困难窒息窒息死亡死亡神志清楚，病死率高神志清楚，病死率高（2 2）创伤感染中毒创伤感染中毒 伤口被肉毒梭菌芽胞污染后，芽胞在局部发伤口被肉毒梭菌芽胞污染后，芽胞在局部发芽，繁殖，释放出肉毒毒素，导致机体中毒芽，繁殖，释放出肉毒毒素，导致机体中毒（3 3）婴儿肉毒病婴儿肉毒病：便秘、吮乳无力等，病死率不便秘、吮乳无力等，病死率不高高目前的应用目前的应用三、微生物检查三、微生物检查l 标本：呕吐物或可疑食物标本：呕吐物或可
17、疑食物l 厌氧培养，分离细菌厌氧培养，分离细菌l 动物实验动物实验防治原则防治原则v加强食品卫生管理和监督，加热食品加强食品卫生管理和监督，加热食品v尽早根据症状作出诊断，迅速注射尽早根据症状作出诊断，迅速注射A A、B B、E E 三型多价抗毒素，同时加强护理和对症治疗三型多价抗毒素，同时加强护理和对症治疗v加强护理和对证治疗加强护理和对证治疗v对症治疗：对症治疗：特别注意预防呼吸肌麻痹和窒息特别注意预防呼吸肌麻痹和窒息第二节第二节 无芽胞厌氧菌无芽胞厌氧菌1.1.致病条件：无芽胞厌氧菌是人体的正常菌群，数量上占致病条件：无芽胞厌氧菌是人体的正常菌群，数量上占绝对优势（肠道内占绝对优势（肠道内占99.9%99.9%）为）为机会性致病菌机会性致病菌，引起，引起内内源性感染源性感染。由于机械或物理损伤导致它们侵入非正常寄居部位。由于机械或物理损伤导致它们侵入非正常寄居部位。局部形成厌氧环境。局部形成厌氧环境。菌群失调和机体抵抗力下降。菌群失调和机体抵抗力下降。
