1、专题2微生物的培养与应用考点一考点一微生物的实验室培养微生物的实验室培养【核心知识通关【核心知识通关】1.1.无菌技术的主要方法及适用对象无菌技术的主要方法及适用对象(连一连连一连)：2.2.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：一定体积一定体积称量纸称量纸称量纸称量纸蛋白胨蛋白胨琼脂琼脂pHpH高压蒸汽高压蒸汽1211211515303050503.3.纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：(1)(1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成原理：在培养基上将细菌稀释或分散成_细胞，细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。单个单
2、个(2)(2)主要方法：下图甲可表示用主要方法：下图甲可表示用_法接种获得法接种获得的平板；下图乙可表示用的平板；下图乙可表示用_法接种获得的法接种获得的平板。平板。(3)(3)纯化原理：上图甲菌体的分散是通过一系列的纯化原理：上图甲菌体的分散是通过一系列的_操作实现的；上图乙菌体的分散是通过一系列的操作实现的；上图乙菌体的分散是通过一系列的_和和_操作实现的。操作实现的。平板划线平板划线稀释涂布平板稀释涂布平板连续连续划线划线梯度稀释梯度稀释涂布平板涂布平板4.4.菌种的保存方法：菌种的保存方法：(1)(1)对于频繁使用的菌种，可以采用对于频繁使用的菌种，可以采用_的方的方法。法。(2)(2
3、)对于需要长期保存的菌种，可以采用对于需要长期保存的菌种，可以采用_的的方法。方法。临时保藏临时保藏甘油管藏甘油管藏【特别提醒【特别提醒】(1)(1)培养基中营养物质的确定方法。培养基中营养物质的确定方法。自养型微生物所需的主要营养物质是无机物，碳源自养型微生物所需的主要营养物质是无机物，碳源可来自大气中的可来自大气中的COCO2 2，氮源可由含氮无机盐提供。，氮源可由含氮无机盐提供。异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要由有机物提供，源必须由含碳有机物提供，氮源也主要由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无
4、机氮源。部分异养型微生物也可以利用无机氮源。(2)(2)选择无菌技术的原则。选择无菌技术的原则。考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。(3)(3)纯化大肠杆菌的两种方法的异同。纯化大肠杆菌的两种方法的异同。相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单细胞菌落。细胞菌落。不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀
5、释涂布平板法能对微生物计数。布平板法能对微生物计数。(3)(3)纯化大肠杆菌的两种方法的异同。纯化大肠杆菌的两种方法的异同。相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单细胞菌落。细胞菌落。不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂布平板法能对微生物计数。布平板法能对微生物计数。【思维拓展【思维拓展】培养基的培养基的“三大成分三大成分”与与“三种分类三种分类”(1)(1)培养基的培养基的“三大成分三大成分”：营养营养成分成分作用作用来源来源碳源碳源能为微生物提供能为微生物提供所需碳元素的营所需碳元素的营养物
6、质养物质无机碳源：无机碳源：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3等等有机碳源：糖类、脂肪酸、有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等花生粉饼、石油等营养营养成分成分作用作用来源来源氮源氮源能为微生物提供能为微生物提供所需氮元素的营所需氮元素的营养物质养物质无机氮源：无机氮源：N N2 2、氨、铵盐、氨、铵盐、硝酸盐等硝酸盐等有机氮源：尿素、牛肉膏、有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等蛋白胨、氨基酸等特殊营特殊营养物质养物质微生物生长不可微生物生长不可缺少的微量有机缺少的微量有机物物牛肉膏、蛋白胨、动植物组牛肉膏、蛋白胨、动植物组织提取液等织提取液等(2)(2)培养基的培养基的“三种分
7、类三种分类”：分类分类依据依据种类种类特点特点应用应用物理物理性质性质液体液体培养基培养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产半固体半固体培养基培养基加凝固剂加凝固剂(少少)观察微生物的运动、分观察微生物的运动、分离、鉴定离、鉴定固体固体培养基培养基加凝固剂加凝固剂(多多)微生物的分离、鉴定，微生物的分离、鉴定，活菌计数、保藏活菌计数、保藏分类分类依据依据种类种类特点特点应用应用化学化学成分成分天然天然培养基培养基含化学成分不明的天然物含化学成分不明的天然物质质工业生产工业生产合成合成培养基培养基培养基成分明确或用一定培养基成分明确或用一定化学物质配制化学物质配制分类、鉴定分类、鉴定用途用途选
8、择选择培养基培养基添加某物质，抑制杂菌生添加某物质，抑制杂菌生长，促进所需微生物生长长，促进所需微生物生长培养分离出培养分离出特定微生物特定微生物鉴别鉴别培养基培养基根据微生物的代谢特点，根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示在培养基中加入某种指示剂剂鉴别微生物鉴别微生物【高考模拟精练【高考模拟精练】1.(20131.(2013全国卷全国卷)临床使用抗生素前，有时需要做临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗
9、生素的敏感性。菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：回答下列问题：(1)(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或法或_法将样本接种于固体培养基表面，法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)(2)取该单菌落适当稀释，用取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体法接种于固体培养基表面，在培养基表面，在3737培养箱中培养培养箱中培养24 h24 h，使其均匀生，使其均匀生长，布满平板。长，布满平板。(3)(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有有A A、
10、B B、C C、D D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含的不同位置，培养一段时间后，含A A的滤纸片周围出现的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素透明圈，说明该致病菌对抗生素A_A_；含；含B B的的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_B_；含；含C C的滤纸片周围的透明圈比含的滤纸片周围的透明圈比含A A的的小，说明小，说明_；含；含D D的滤纸的滤纸片周围的透明圈也比含片周围的透明圈也比含A A的小，且透明圈中出现了一个的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌
11、污染的情况下，此菌落很可能是抗菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素生素D D的的_。(4)(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素抗生素_。片周围的透明圈也比含片周围的透明圈也比含A A的小，且透明圈中出现了一个的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素生素D D的的_。(4)(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素抗生素_。【解题指南【解题指南】本题主要考查微生物培养，解答本题可本
12、题主要考查微生物培养，解答本题可从以下两个方面着手：从以下两个方面着手：(1)(1)分离微生物方法：平板划线法和稀释涂布分离微生物方法：平板划线法和稀释涂布(平板平板)法。法。(2)(2)透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱。透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱。【解析【解析】本题考查微生物接种和抗生素抗菌能力判断。本题考查微生物接种和抗生素抗菌能力判断。(1)(1)在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法是稀释涂布是稀释涂布(平板平板)法或平板划线法。法或平板划线法。(2)(2)为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂为了使微生物在
13、培养基上能够均匀分布，一般用涂布法将微生物接种在培养基上。布法将微生物接种在培养基上。(3)(3)在抗药性检验过程中，如果在抗生素周围出现透明在抗药性检验过程中，如果在抗生素周围出现透明的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌生长；透明圈的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌生长；透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱，据此可判断的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱，据此可判断A A、B B、C C抗菌能力强弱依次是抗菌能力强弱依次是A A、C C、B B；D D的透明圈中出现的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。(4)(4)实验结果表
14、明抗生素实验结果表明抗生素A A对该致病菌的抗菌效果最好。对该致病菌的抗菌效果最好。答案：答案：(1)(1)划线稀释涂布划线稀释涂布(平板平板)()(或涂布或涂布)(2)(2)涂布涂布(3)(3)敏感不敏感该致病菌对敏感不敏感该致病菌对C C的敏感性比对的敏感性比对A A的弱的弱耐药菌耐药菌(4)A(4)A2.(20162.(2016西安模拟西安模拟)某小组同学为了调查湖水中细菌某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问
15、题。关的问题。(1)(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉为细菌培养提供了碳培养基中含有的蛋白胨、淀粉为细菌培养提供了碳源和氮源。除此之外，培养基还必须含有的基本成分源和氮源。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是是_和和_。(2)(2)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于湖水样品的平板置于_中培养，培养的温度设中培养，培养的温度设定在定在3737。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种另一平板上接种_作为对照实验。作为对照实验。(3)(3)培养培养2020小时后，观察到平板上有形
16、态和颜色不同的小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的_，这说明湖水样品中有多种细菌。一般来，这说明湖水样品中有多种细菌。一般来说，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越说，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_(_(填填“高高”或或“低低”)。(4)(4)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是落连成一片，最可能的原因是_，应当怎样操作？应当怎样操作？_。【解题指南【解题指南】(1)(1)题干关键词：培养基的题干关键词：培养基的“基本成基本成分分”“”“形态和颜色形态和颜色”。(2)(2)关键方法：接种无菌水的空白对照
17、可以判断培养基关键方法：接种无菌水的空白对照可以判断培养基制作是否合格。制作是否合格。【解题指南【解题指南】(1)(1)题干关键词：培养基的题干关键词：培养基的“基本成基本成分分”“”“形态和颜色形态和颜色”。(2)(2)关键方法：接种无菌水的空白对照可以判断培养基关键方法：接种无菌水的空白对照可以判断培养基制作是否合格。制作是否合格。【解析【解析】(1)(1)蛋白胨富含蛋白质，主要为微生物提供氮蛋白胨富含蛋白质，主要为微生物提供氮源；淀粉作为微生物的碳源，培养基中还应含有水和源；淀粉作为微生物的碳源，培养基中还应含有水和无机盐。无机盐。(2)(2)微生物的培养在恒温培养箱中进行。要使该实验所
18、微生物的培养在恒温培养箱中进行。要使该实验所得结果可靠，还应设置对照实验，即同时在另一平板得结果可靠，还应设置对照实验，即同时在另一平板上接种无菌水作为对照实验，以判断培养基制作是否上接种无菌水作为对照实验，以判断培养基制作是否合格。合格。(3)(3)培养培养2020小时后，不同微生物在平板培养基上会形成小时后，不同微生物在平板培养基上会形成形态和颜色不同的菌落。菌落总数越多，说明湖水中形态和颜色不同的菌落。菌落总数越多，说明湖水中的微生物数量越多，即湖水遭受细菌污染的程度越高。的微生物数量越多，即湖水遭受细菌污染的程度越高。(4)(4)培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓培养基上的菌
19、落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高或培养过程被杂菌污染，可以通过增大稀释倍度过高或培养过程被杂菌污染，可以通过增大稀释倍数或严格无菌操作的方法解决。数或严格无菌操作的方法解决。答案：答案：(1)(1)无机盐水无机盐水(2)(2)恒温培养箱无菌水恒温培养箱无菌水(3)(3)菌落高菌落高(4)(4)菌液浓度过高菌液浓度过高(或培养过程被杂菌污染或培养过程被杂菌污染)增大稀释增大稀释倍数倍数(或严格无菌操作，原因与操作要对应或严格无菌操作，原因与操作要对应)3.(20163.(2016安庆模拟安庆模拟)据报道，从部分企业生产的速冻据报道，从部分企业生产的速冻食品中检出葡萄球菌超标，食品中检出葡萄
20、球菌超标，“细菌门细菌门”事件引起公众事件引起公众普遍关注。葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵普遍关注。葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。某兴趣小组欲检测某果汁类食品中是否色的乳浊环。某兴趣小组欲检测某果汁类食品中是否含有葡萄球菌，进行了如下实验。回答下列问题：含有葡萄球菌，进行了如下实验。回答下列问题：(1)(1)配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaClNaCl、琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后调节琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶
21、解后调节pHpH，分装到锥形瓶后进行分装到锥形瓶后进行_，在无菌状态下加，在无菌状态下加入卵黄液摇匀后立即倒平板。培养基中的牛肉膏和蛋入卵黄液摇匀后立即倒平板。培养基中的牛肉膏和蛋白胨为葡萄球菌生长和繁殖提供白胨为葡萄球菌生长和繁殖提供_。葡萄。葡萄球菌能耐受高浓度的球菌能耐受高浓度的NaClNaCl溶液，所以在配制培养基时溶液，所以在配制培养基时加入高浓度的加入高浓度的NaClNaCl溶液可以将它分离出来，此培养基溶液可以将它分离出来，此培养基属于属于_培养基。培养基。(2)(2)接种：取待检测果汁接种：取待检测果汁2.5 mL2.5 mL加入加入22.5 mL22.5 mL灭菌生理灭菌生理
22、盐水中，制成接种样液。盐水中，制成接种样液。实验组：将接种样液用平板划线法接种在含卵黄的实验组：将接种样液用平板划线法接种在含卵黄的固体培养基上。固体培养基上。对照组：将对照组：将_用平板划线法接种在用平板划线法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作为含卵黄的固体培养基上或不接种作为_对照。对照。(3)(3)培养：将上述接种后的培养皿同时放在培养：将上述接种后的培养皿同时放在3636的恒温的恒温箱中培养箱中培养48 h48 h。(4)(4)观察：培养基表面观察：培养基表面_。(5)(5)结论。结论。若培养基上若培养基上_，则该果汁类食品，则该果汁类食品中含有葡萄球菌。中含有葡萄球菌。若培养基上若
23、培养基上_，则该果汁类食品，则该果汁类食品中不含有葡萄球菌。中不含有葡萄球菌。【解题指南【解题指南】(1)(1)关键信息：关键信息：葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。环。接种样液是用灭菌生理盐水稀释的。接种样液是用灭菌生理盐水稀释的。对照组用平板划线法接种。对照组用平板划线法接种。(2)(2)必备知识：对照实验除自变量不同，其他均相同。必备知识：对照实验除自变量不同，其他均相同。【解析【解析】(1)(1)培养基的制备流程：计算培养基的制备流程：计
24、算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板。培养基中的牛肉膏可以为葡萄球菌生倒平板。培养基中的牛肉膏可以为葡萄球菌生长和繁殖提供氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨可以为长和繁殖提供氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨可以为葡萄球菌生长和繁殖提供碳源、氮源和维生素。加入葡萄球菌生长和繁殖提供碳源、氮源和维生素。加入高浓度的高浓度的NaClNaCl溶液的培养基可以抑制大多数微生物的溶液的培养基可以抑制大多数微生物的生长繁殖，因此该培养基属于选择培养基。生长繁殖，因此该培养基属于选择培养基。【解析【解析】(1)(1)培养基的制备流程：计算培养基的制备流程：计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板。培养基中的牛肉膏可以为葡萄球菌生
25、倒平板。培养基中的牛肉膏可以为葡萄球菌生长和繁殖提供氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨可以为长和繁殖提供氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨可以为葡萄球菌生长和繁殖提供碳源、氮源和维生素。加入葡萄球菌生长和繁殖提供碳源、氮源和维生素。加入高浓度的高浓度的NaClNaCl溶液的培养基可以抑制大多数微生物的溶液的培养基可以抑制大多数微生物的生长繁殖，因此该培养基属于选择培养基。生长繁殖，因此该培养基属于选择培养基。(2)(2)比较实验组和对照组可知，实验的自变量为是否接比较实验组和对照组可知，实验的自变量为是否接种接种样液。对照组接种无菌生理盐水，或不接种，种接种样液。对照组接种无菌生理盐水，或不接种，为空白对
26、照。为空白对照。(4)(4)根据题干关键信息根据题干关键信息“葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环特有的乳白色的乳浊环”可知，观察是否出现周围有可知，观察是否出现周围有乳浊环的菌落可以判断果汁中是否含有葡萄球菌。乳浊环的菌落可以判断果汁中是否含有葡萄球菌。(5)(5)果汁中存在葡萄球菌时，培养基上会出现周围有乳果汁中存在葡萄球菌时，培养基上会出现周围有乳浊环的菌落；果汁中不存在葡萄球菌时，培养基上不浊环的菌落；果汁中不存在葡萄球菌时，培养基上不会出现周围有乳浊环的菌落
27、，因此可以根据是否出现会出现周围有乳浊环的菌落，因此可以根据是否出现周围有乳浊环的菌落判断是否存在葡萄球菌。周围有乳浊环的菌落判断是否存在葡萄球菌。答案：答案：(1)(1)灭菌灭菌(高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌)碳源、氮源、磷酸盐碳源、氮源、磷酸盐和维生素选择和维生素选择(2)(2)无菌生理盐水空白无菌生理盐水空白(4)(4)是否出现周围有乳浊环的菌落是否出现周围有乳浊环的菌落(5)(5)出现周围有乳浊环的菌落出现周围有乳浊环的菌落不出现周围有乳浊环的菌落不出现周围有乳浊环的菌落【方法规律【方法规律】正确判断培养基制作与接种操作是否合正确判断培养基制作与接种操作是否合格的方法格的方法(1)(1)从
28、培养基制作是否合格上判断：如果未接种的培养从培养基制作是否合格上判断：如果未接种的培养基在恒温箱中保温基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生长，说明培养基后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。的制备是成功的，否则需要重新制备。(2)(2)从接种操作是否符合无菌要求上判断：从接种操作是否符合无菌要求上判断：如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合接种菌菌落的特点，说明接种操作是符一致，并符合接种菌菌落的特点，说明接种操作是符合要求的；合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，如果培养基上出现了其他
29、菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，重新操作。无菌操作还未达到要求，需要分析原因，重新操作。考点二考点二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数【核心知识通关【核心知识通关】1.1.筛选菌株：筛选菌株：(1)(1)寻找目的菌株的原则寻找目的菌株的原则：根据它对：根据它对_的要求，的要求，到相应的环境中去寻找。到相应的环境中去寻找。(2)(2)实验室筛选尿素分解菌的方法：使用以实验室筛选尿素分解菌的方法：使用以_为唯为唯一氮源的一氮源的_培养基进行培养。培养基进行培养。生存环境生存环境尿素尿素选择选择(3)(3)选择培养基：在微生物学中，将允许选择
30、培养基：在微生物学中，将允许_的的微生物生长，同时微生物生长，同时_其他种类微生物生长的其他种类微生物生长的培养基。培养基。特定种类特定种类抑制或阻止抑制或阻止2.2.微生物的计数：常用的方法有显微计数法和微生物的计数：常用的方法有显微计数法和_。稀释稀释涂布平板法涂布平板法表层表层 3030300300稀释涂布平板稀释涂布平板303037375 57 7252528283 34 4菌落菌落(7)(7)计算：根据公式计算：根据公式“每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数=(C=(CV)V)MCMC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V V代代表涂布平板
31、时所用的稀释液的体积表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL(mL)，M M代表稀释倍代表稀释倍数数”进行计算进行计算4.4.分解尿素的细菌的鉴定：分解尿素的细菌的鉴定：(1)(1)方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_指示剂培养分解尿素的细菌。指示剂培养分解尿素的细菌。酚红酚红(2)(2)原理：原理：脲酶脲酶2NH2NH3 3(2)(2)原理：原理：脲酶脲酶2NH2NH3 35.5.设置对照和重复：设置对照和重复：比较项目比较项目对照对照重复重复目的目的排除非测试因素对实验排除非测试因素对实验结果的影响结果的影响排除偶然因素对实排除偶然因素对实验结果的影响
32、验结果的影响实例实例空白对照：确定培养基空白对照：确定培养基制作是否合格制作是否合格同一稀释度涂布至同一稀释度涂布至少少3 3个平板个平板【特别提醒【特别提醒】“选择菌落数在选择菌落数在3030300300的平板的平板”的两个提醒的两个提醒(1)(1)只得到只得到1 1个菌落数在个菌落数在3030300300的平板是错误的，原因的平板是错误的，原因是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。(2)(2)得到得到3 3个或个或3 3个以上菌落数在个以上菌落数在3030300300的平板，也不的平板，也不一定正确，原因是如果不同平板间差异较大，如得到
33、一定正确，原因是如果不同平板间差异较大，如得到3 3个平板，菌落数分别为个平板，菌落数分别为230230、3434、240240，虽然菌落数均，虽然菌落数均在在“3030300”300”，但由于，但由于3434与另外两个平板差异较大，与另外两个平板差异较大，应找出原因并重新实验。应找出原因并重新实验。【思维拓展【思维拓展】微生物计数的两种方法微生物计数的两种方法比较比较项目项目间接计数法间接计数法(稀释涂布平板法稀释涂布平板法)直接计数法直接计数法(显微计数法显微计数法)原理原理当样品的稀释度足够高当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品一个菌落，来源于
34、样品稀释液中的一个活菌，稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中数，就能推测出样品中大约含有多少活菌大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样镜下计算一定容积的样品中微生物的数量品中微生物的数量比较比较项目项目间接计数法间接计数法(稀释涂布平板法稀释涂布平板法)直接计数法直接计数法(显微计数法显微计数法)公式公式每克样品中的菌落数：每克样品中的菌落数：(C(CV)V)M MC C：某稀释度下平板上生：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；长的平均菌落数；V V：涂：涂布平板时所用的稀释
35、液的布平板时所用的稀释液的体积体积(mL(mL)；M M：稀释倍数：稀释倍数每毫升原液所含细菌每毫升原液所含细菌数：每小格平均细菌数：每小格平均细菌数数40040010 00010 000稀释倍数稀释倍数比较比较项目项目间接计数法间接计数法(稀释涂布平板法稀释涂布平板法)直接计数法直接计数法(显微计数法显微计数法)缺点缺点当两个或多个菌体连在一当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只起时，平板上观察到的只是一个菌落是一个菌落不能区分细胞死活不能区分细胞死活结果结果比实际值偏小比实际值偏小比实际值偏大比实际值偏大【高考模拟精练【高考模拟精练】1.(20151.(2015全国卷全国卷节选节选)
36、已知微生物已知微生物A A可以产生油脂，可以产生油脂，微生物微生物B B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：油的生产。回答有关问题：(1)(1)显微观察时，微生物显微观察时，微生物A A菌体中的油脂通常可用菌体中的油脂通常可用_染色。微生物染色。微生物A A产生的油脂不易挥发，可产生的油脂不易挥发，可选用选用_(_(填填“萃取法萃取法”或或“水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。从菌体中提取。(2)(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B B的单的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂
37、物的土壤中取样，菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以并应选用以_为碳源的固体培养基进行培为碳源的固体培养基进行培养。养。(3)(3)为了确定微生物为了确定微生物B B产生的脂肪酶的最适温度，某同产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在学测得相同时间内，在3535、4040、4545温度下降解温度下降解10 g10 g油脂所需酶量依次为油脂所需酶量依次为4 mg4 mg、1 mg1 mg、6 mg6 mg，则上述，则上述三个温度中，三个温度中，_条件下该酶活力最小。为了条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕进一步确定该酶的最适温度，应围绕_设计设计后
38、续实验。后续实验。【解题指南【解题指南】(1)(1)题干关键词：不易挥发。题干关键词：不易挥发。(2)(2)关键知识：提取油脂的方法、分解油脂的微生物的关键知识：提取油脂的方法、分解油脂的微生物的分离、测定微生物数量的方法和探究酶的最适温度的分离、测定微生物数量的方法和探究酶的最适温度的方法。方法。【解析【解析】(1)(1)脂肪可被苏丹脂肪可被苏丹()染液染成橘黄色染液染成橘黄色(红红色色)，题干中说明微生物，题干中说明微生物A A产生的油脂不易挥发，则可产生的油脂不易挥发，则可以采用萃取法提取微生物以采用萃取法提取微生物A A中的油脂。中的油脂。(2)(2)油脂为有机化合物，富含碳元素，故为
39、了从自然界油脂为有机化合物，富含碳元素，故为了从自然界获得能够分解油脂的单菌落，应以油脂为唯一碳源来获得能够分解油脂的单菌落，应以油脂为唯一碳源来配制培养基。在该培养基上，能分解油脂的微生物可配制培养基。在该培养基上，能分解油脂的微生物可以正常生长，其他微生物不能正常生长。以正常生长，其他微生物不能正常生长。(3)(3)在在4545下，降解下，降解10 g10 g油脂所需酶量最多，则该温度油脂所需酶量最多，则该温度下酶活性最低；由题干信息可知，下酶活性最低；由题干信息可知，4040下降解下降解10 g10 g油油脂所需的酶量最少。应围绕脂所需的酶量最少。应围绕4040设置不同温度梯度来设置不同
40、温度梯度来探究酶的最适温度。探究酶的最适温度。答案：答案：(1)(1)苏丹苏丹(或苏丹或苏丹)萃取法萃取法(2)(2)油脂油脂(其他合理答案也可其他合理答案也可)(3)45(3)4540402.(20142.(2014全国卷全国卷)为了调查某河流的水质状况，某为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：细菌分离等工作。回答下列问题：(1)(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培在涂布接种前，
41、随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将然后，将1 mL1 mL水样稀释水样稀释100100倍，在倍，在3 3个平板上用涂布法个平板上用涂布法分别接入分别接入0.1 mL0.1 mL稀释液；经适当培养后，稀释液；经适当培养后，3 3个平板上的个平板上的菌落数分别为菌落数分别为3939、3838和和3737，据此可得出每升水样中的，据此可得出每升水样中的活菌数为活菌数为_。(2)(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线灭菌，在第二次
42、及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是的是_。(3)(3)示意图示意图A A和和B B中，中，_表示的是用稀释涂布平板表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。法接种培养后得到的结果。(4)(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中析其原因是：振荡
43、培养能提高培养液中_的含的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。的利用率。【解题指南【解题指南】(1)(1)题干关键词：题干关键词：“先行培养先行培养”“”“振荡培振荡培养养”。(2)(2)隐含信息：隐含信息：A A图中菌落是采用平板划线法培养的结图中菌落是采用平板划线法培养的结果，果，B B图中菌落分布相对均匀，为稀释涂布平板法接种图中菌落分布相对均匀，为稀释涂布平板法接种培养的结果。培养的结果。(3)(3)关键知识：稀释涂布平板法检测细菌含量、平板划关键知识：稀释涂布平板法检测细菌含量、平板划线法分离细菌。线法分离细菌。【解题指南【解题指
44、南】(1)(1)题干关键词：题干关键词：“先行培养先行培养”“”“振荡培振荡培养养”。(2)(2)隐含信息：隐含信息：A A图中菌落是采用平板划线法培养的结图中菌落是采用平板划线法培养的结果，果，B B图中菌落分布相对均匀，为稀释涂布平板法接种图中菌落分布相对均匀，为稀释涂布平板法接种培养的结果。培养的结果。(3)(3)关键知识：稀释涂布平板法检测细菌含量、平板划关键知识：稀释涂布平板法检测细菌含量、平板划线法分离细菌。线法分离细菌。【解析【解析】本题考查微生物培养、细菌分离的相关知识。本题考查微生物培养、细菌分离的相关知识。(1)(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一为了确定培养
45、基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成；利用平养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成；利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：7C38M()1003.8 10/LV0.1 mL接种计数结果平均值稀释倍数接种体积(2)(2)接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是通过划线次数的增加，
46、使每次划线时菌体的数目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。逐渐减少，以便得到单个菌落。(3)(3)根据示意图根据示意图A A和和B B中生长出的菌落形态，判定中生长出的菌落形态，判定B B图中图中为稀释涂布平板法接种培养的结果为稀释涂布平板法接种培养的结果(菌落分布相对均菌落分布相对均匀匀)。(4)(4)振荡培养可以增加液体培养基溶解氧的含量，促进振荡培养可以增加液体培养基溶解氧的含量，促进好氧型微生物的生长；另外振荡培养还可以使菌体与好氧型微生物的生长；另外振荡培养还可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。培养液充分接触，提高营养物质的利用率。
47、答案：答案：(1)(1)检测培养基平板灭菌是否合格检测培养基平板灭菌是否合格3.83.810107 7(2)(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(3)B(4)(4)溶解氧营养物质溶解氧营养物质【易错提醒【易错提醒】本题第本题第(1)(1)题第题第2 2空易错答为空易错答为3.83.810104 4。出错原因是忽视了单位，课本计算公式是每克样品中出错原因是忽视了单位，课本计算公式是每克样品中的细菌数，而本题要计算每升水样中的活菌数，应再的细菌数，而本题要计算每升水样中的活菌数，应再乘以乘以10103 3。3.(20163.(2016石家庄
48、模拟石家庄模拟)同学们为了探究土壤中的微生同学们为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌目的菌)。培养基成分。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：KHKH2 2POPO4 41.4 g1.4 gNaNa2 2HPOHPO4 42.1 g2.1 gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2 g0.2 g葡萄糖葡萄糖10.0 g10.0 g尿素尿素1.0 g1.0 g琼脂琼脂15.0 g15.
49、0 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL1 000 mL(1)(1)培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌，这种培养培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌，这种培养基属于基属于_培养基。培养基。(2)(2)目的菌生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的目的菌生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_和和_，实验中需要振荡培养，实验中需要振荡培养，原因是原因是_。(3)(3)关于下图的操作方法和结果，叙述正确的是关于下图的操作方法和结果，叙述正确的是_。A.A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B.B.划线操作必须在火焰上进行划
50、线操作必须在火焰上进行C.C.在在5 5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落D.D.在在1 1、2 2、3 3、4 4、5 5区域中划线前后都要对接种环灭菌区域中划线前后都要对接种环灭菌【解析【解析】(1)(1)培养基中加入尿素形成以尿素为唯一氮源培养基中加入尿素形成以尿素为唯一氮源的培养基，只有尿素分解菌能够以尿素为氮源进行生的培养基，只有尿素分解菌能够以尿素为氮源进行生活，而其他微生物不能生活，该培养基属于选择培养活，而其他微生物不能生活，该培养基属于选择培养基。基。(2)(2)尿素分解菌所需要的氮源是尿素，碳源是培养基中尿素分解菌所需要的氮源是尿素，碳源是培养基中的葡萄糖，尿
