1、检验科检验科梅毒实验室诊断()副本全国梅毒流行现状中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）年病例年发病率年均增长1999804066.50/10万200932743324.66/10万14.3%年病例年发病率年均增长19971090.53/10万20091075764.41/10万49.2%先天梅毒先天梅毒梅毒梅毒MSM人群梅毒和HIV感染率宜昌地区梅毒螺旋体感染情况宜昌地区梅毒螺旋体感染情况TPAbTPAbTRUSTTRUST200920094.24%(359/9315)4.24%(359/9315)5.09%(90/1767)5.09%(90/1767)201020104.16%(4
2、97/12083)4.16%(497/12083)7.14%(153/2144)7.14%(153/2144)201120113.65%(635/17416)3.65%(635/17416)6.45%(145/2262)6.45%(145/2262)201220123.49%(388/10827)3.49%(388/10827)9.67%(122/1261)9.67%(122/1261)宜昌地区梅毒感染情况总结宜昌地区梅毒感染情况总结1.梅毒感染呈现逐年增多趋势2.女性多于男性3.年龄分布主要集中在20-40岁之间4.梅毒患者多来自门诊，但不自觉的现症感染者逐渐增加。梅毒预防与控制措施梅毒预防
3、与控制措施 广泛开展宣传教育，普及广泛开展宣传教育，普及梅毒防治知识梅毒防治知识 开展综合防治，阻断梅毒开展综合防治，阻断梅毒传播传播 提高监测检测质量，开展提高监测检测质量，开展主动检测，促进梅毒早期主动检测，促进梅毒早期发现发现 提供规范化梅毒医疗服务提供规范化梅毒医疗服务 预防和控制先天梅毒预防和控制先天梅毒 加强国际合作和应用性研加强国际合作和应用性研究究中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）n到到2015年底实现以下目标年底实现以下目标n梅毒预防和诊疗服务专业人员相关知识和技术标准梅毒预防和诊疗服务专业人员相关知识和技术标准掌握合格率达到掌握合格率达到85%；n孕产期保健人员
4、预防梅毒母婴传播相关知识和技术标准掌握合格率达到80%。n到到2020年底实现以下目标年底实现以下目标n梅毒预防和诊疗服务专业人员相关知识和技术标准梅毒预防和诊疗服务专业人员相关知识和技术标准掌握合格率达到掌握合格率达到100%；n孕产期保健人员预防梅毒母婴传播相关知识和技术标准掌握合格率达到90%。筛查与检测n制定和下发制定和下发梅毒实验室检测规范梅毒实验室检测规范n梅毒检测三级实验室网络建立梅毒检测三级实验室网络建立n性病门诊的梅毒主动筛查nHIV咨询检测服务中纳入梅毒筛查n医疗机构主动提供的HIV检测咨询中的梅毒检测n社区药物维持治疗门诊中的梅毒检测n孕产妇梅毒筛查n高危人群外展服务中的
5、梅毒检测n梅毒流行与防治介绍梅毒流行与防治介绍n梅毒的实验室检测梅毒的实验室检测梅毒病原体n小而纤细的螺旋状微生物长520m，粗细2年），但妊娠时仍可传染给胎儿n病期越长，传染性越小;n输血传染梅毒的诊断n 梅毒的诊断n早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隐性梅毒）n必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析n 梅毒的实验室检查n结果对诊断有决定性意义常用梅毒实验室检测方法n病原学检测病原学检测n血清学检测血清学检测病原学检查n取材方法n一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液n暗视野显微镜、镀银染色法和直接荧光法n在暗视野显微
6、镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。病原学检查的临床意义病原学检查的临床意义n病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。n 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。n 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测方法问题Q1：实验室诊断梅毒的两类血清学检测方：实验室诊断梅毒的两类血清学检测方法是什么？法是什么？Q2：为什么需要这两类血清学检测方法？：为什么需要这两类血清学检测方法？梅毒血清
7、学检测分类梅毒血清学检测分类1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）2.梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）非梅毒螺旋体抗原血清学试验n原理原理（抗心磷脂抗体）：n人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体产生类脂质抗体（反应素）。n主要是IgM和IgG混合抗体。非梅毒螺旋体抗原血清学试验n抗体产生时间 n感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周n一般在感染后57周（或硬下疳出现后23周）产生。（郭红亮，中外健康文摘2010年第20期）n抗体作用n无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治
8、疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。Q3：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法和定量两种检测方法原理和方法n反应原理反应原理n抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见n抗原基本成分抗原基本成分n心磷脂、卵磷脂和胆固醇n方法包括：方法包括：n快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)n不加热血清反应素(USR)n甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）n性病研究实验室试验(VDRL)等。试验特点n 原理和成分与试验相同n 血清不需要灭活n 不需要显微镜观测结果n 可作定量试验n 有现成的试剂盒携带方便n 操作简单n 价格便
9、宜RPR/TRUST检测流程检测流程n试验前期准备nRPR仪仪(水平旋转仪器水平旋转仪器)必须滴！必须滴！n试剂n 50l移液器、吸头n 记号笔、废物缸n 工作服n 一次性手套、口罩、帽子n 生物安全柜梅毒自动旋转仪梅毒自动旋转仪检测流程n操作步骤：将检测试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟。测RPR自动旋转仪转速。在RPR纸卡上编上相应的待检样本的编号。测速:100转/MIN（2转）测旋转幅度:19mm检测流程（定性）加样：加样：n吸取50l血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内。加抗原加抗原：n将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗原。反应反应：n将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立
10、即在亮光下观察结果。检测流程（定量）稀释液准备：稀释液准备：n在圈内加入50l生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。加样加样：n吸取50l血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并涂布满整个圈内。重复定性试验后两步。重复定性试验后两步。临床意义n早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。n 一期梅毒1年后转为阴性n 二期梅毒2年后转为阴性。n 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。临床意义n早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。【感染57周（或硬下疳出现后23周）】n经治疗后血清滴度可下
11、降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。假阳性问题n假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性技术性假阳性技术性假阳性n由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。生物学假阳性生物学假阳性n是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性急性生物学假阳性反应的疾病 风疹风疹水痘水痘传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症传染性肝炎传染性肝炎上呼吸道感染上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎病毒性肺炎牛痘疹牛痘疹慢性生物学假阳性反应的疾病n系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮 n自身免疫性溶血性自身免疫性溶血性贫血贫血n盘状红斑狼疮盘
12、状红斑狼疮 n结节性多动脉炎结节性多动脉炎 n类风湿性关节炎类风湿性关节炎 n桥本氏甲状腺炎桥本氏甲状腺炎 n风湿性心脏病风湿性心脏病n干燥综合征干燥综合征n毒品瘾者毒品瘾者 n慢性肾炎慢性肾炎n肝硬化肝硬化n老年老年 n麻风麻风 (是唯一产生是唯一产生慢性生物学假阳性的慢性生物学假阳性的感染性感染性 疾病疾病)妊娠的假阳性反应妊娠的假阳性反应 这是一种生理情况下的生物学假阳性这是一种生理情况下的生物学假阳性 假阳性发生率较低有报告为假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度，滴度低。低。假阳性问题n 梅毒假阳性反应的处理梅毒假阳性反应的处理n 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，
13、经过重复试验即可除外。n 对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。前带现象n原理原理n指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果。n处理处理n将血清稀释后再进行试验。血清固定n耐血清性（血清固定）n指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。梅毒螺旋体抗原血清学试验试验原理试验原理n检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（IgG 和IgM）。n特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出。nQ3
14、：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？试验在梅毒诊疗中有意义吗？实验方法实验方法n 梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)n 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)n 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）n 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)n 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）n 化学发光免疫分析法（CLIA）n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）TPPA/TPHAnTPPA试验原理与TPHA试验基本相同nTPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒nTPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞n特点n梅毒螺旋体全抗原TPPA原理示意图荧光螺旋体抗体吸收试验（F
15、TA-ABS）n原理n将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。n曾经认为FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。TP-ELISAn原理原理n用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。n特点n本法可用于大规模血清检测。免疫层析临床应用临床应用n梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试
16、验n它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性。n 一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。方法特点方法特点n特异性强，敏感性高n很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，有有1%的生物学假阳性发生。如系统性红斑狼疮患者血清可使FTA-ABS试验呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，可使TPHA呈假阳性。麻风患者也可使特异试验呈阳性。临床意义临床意义n 作为RPR初筛阳性标本的确证试验。n不能作为疗效观察的指标。n阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合RPR结果进行诊断。假阳性问题n存在交叉反应的抗体n处理方法：用Reiter株吸
17、收血清中交叉反应的抗体。老年人抗体阳性的问题n1、真阳性 n2、假阳性：这些老年患者所患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/或抗T.pallidum抗体的交叉抗原；梅毒血清学试验结果解释梅毒血清学试验结果的临床意义RPRTRUSTTPPATP-ELISA临床意义阴性阴性排除梅毒排除梅毒（一期梅毒的早早期）（一期梅毒的早早期）阳性阳性现症梅毒现症梅毒(梅毒孕妇所生的婴儿除外梅毒孕妇所生的婴儿除外)阳性阴性生物学假阳性生物学假阳性阴性阳性早期梅毒经治疗后早期梅毒经治疗后（早期梅毒）（早期梅毒）RPR结果解释示意图治疗前治疗后早期一期二期早期潜伏晚期晚期潜伏三期 阳性阳性 阴性阴性 TPP
18、A结果解释示意图治疗前治疗后早期一期二期早期潜伏晚期晚期潜伏三期 阳性阳性 阴性阴性 梅毒血清学试验适用范围检 测 方 法样 品 种 类血清血浆末梢血脑脊液非梅毒螺旋体试验非梅毒螺旋体试验 快速血浆反应素环状卡片试验快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)(RPR)甲苯胺红不加热血清试验（甲苯胺红不加热血清试验（TRUSTTRUST）性病研究实验室试验(VDRL)梅毒螺旋体试验梅毒螺旋体试验 梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA)(TPPA)梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)梅毒酶联免疫吸附试验（梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISATP-ELISA）梅毒免疫层析法-梅毒快速
19、检测(TP-RT)荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）化学发光免疫测定试验（CLIA）梅毒IgM抗体检测（TP-IgM）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-WB）梅毒检测策略与流程梅毒检测技术规范梅毒检测技术规范 非梅毒螺旋体抗原血清试验：非梅毒螺旋体抗原血清试验：RPR、TRUST、VDRL 梅毒螺旋体抗原血清试验：梅毒螺旋体抗原血清试验：TPPA、TPHA、TP-ELISA、RT、FTA-ABS、CLIA、梅毒IgM抗体检测、WB 策略一策略一 采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛行初筛 策略二策略二 采用任何一种梅毒螺旋体抗原血
20、清试验对样品进行采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛初筛以临床诊断为目的检测策略一以临床诊断为目的检测策略一 非非梅毒螺旋体试验梅毒螺旋体试验（具体方法）（具体方法）阴性阴性报告检测方法报告检测方法及阴性结果及阴性结果阳性阳性报告检报告检测方法测方法及阳性及阳性结果结果梅毒螺梅毒螺旋体试旋体试验验（具（具体方法）体方法）阴性阴性报告检测方法报告检测方法及阴性结果及阴性结果阳性阳性报告检测方法报告检测方法及阳性结果及阳性结果非非梅毒螺梅毒螺旋体旋体定定量量试验试验报告检报告检测方法测方法及定量及定量结果结果以临床诊断为目的检测策略二以临床诊断为目的检测策略二梅毒螺旋体试验梅毒螺旋体试
21、验（具体方法）（具体方法）阴性阴性报告检测方法及阴性报告检测方法及阴性结果结果阳性阳性报告检测方报告检测方法及阳性结法及阳性结果果非非梅毒螺旋体梅毒螺旋体试验试验（具体方（具体方法）法）阴性阴性报告检测方法及阴性报告检测方法及阴性结果结果阳性阳性报告检测方报告检测方法及阳性结法及阳性结果果非非梅毒螺旋体定量梅毒螺旋体定量试验试验报告检测方法及定报告检测方法及定量结果量结果梅毒实验室检测策略思考（1）梅毒实验室检测策略思考（2）n？初筛目的和方法选择？初筛目的和方法选择n敏感性、特异性（试剂评估）n操作流程（可及性）n试剂的价格、结果时间（可接收性）策略一和策略二比较2010年梅毒螺旋体抗原血清
22、学检测试剂评估结果2010年非梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评估结果小结n1、非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性往往是梅毒现症感染者，临床上即可开展治疗。n2、定量试验可作为疗效观察的指标。n3、特异性：假阳性反应。n4、敏感性：约1%-2%的二期梅毒病人可以出现因为抗体过量引起的前带反应现象导致结果假阴性。n5、可作为梅毒螺旋体抗原血清学试验的确诊试验。小结n尽早完善操作的标准化，杜绝有个人特点的操作。n对于只做TRUST检测的患者要注意：n定性：n阴性，TP-ELISA阳性的稀释定量后报告，排查前带现象后报告。n阳性，TP-ELISA阴性，报告备注中提示“生物学假阳性的可能”。没有TP-ELISA结果的一定要加做检测。小结n标准化操作。n对TP-ELISA结果有争议的，可用TPPA进一步验证。或是用reiter株对血清进行吸收后再检测。小结n根据目的选择检测方法及检测策略。可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。n策略一n采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛n策略二n采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛
