1、维生素类药物 第一节 维生素A A的分析u维生素A主要包括:维生素A A1 1:视黄醇,retinol 维生素A A2 2:去氢维生素A,dehydroretinol 维生素A A3 3:去水维生素A,anhydroretinol u生物活性:维生素A A1 1 维生素A A2 2 维生素A A3 3(一)结构 R:-HR:-H,vitamin A vitamin A 醇 R:-COCHR:-COCH3 3,vitamin A vitamin A 醋酸酯 R:-COCR:-COC1515H H3131,vitamin A vitamin A 棕榈酸酯 天然维生素A:A:主要是全反式维生素A A
2、CH3CH3CH3CH3CH2ORvitamin A(醇或酯）CH3123456789一、结构与性质(二)性质 1、UVUV吸收特性:在325-328nm内有最大吸收2 2、不稳定性 易被空气中的氧或氧化剂氧化 无生物活性的环氧化合物、维生素 A A 醛或酸 易被紫外光裂解 对酸不稳定:遇Lewis Lewis 酸 或无水HClHCl乙醇液 去水Vit AVit A 维生素 A A 酯比维生素 A A 醇稳定二、鉴别试验(一)三氯化锑反应(Carr-Price 反应)1、原理u维生素A在饱和无水SbCl3的无醇三氯甲烷溶液中,显蓝色 维生素A和SbCl3中存在的亲电试剂氯化高锑(5价)作用,形
3、成不稳定的蓝色碳正离子u反应式:CH2OCROSbCl5CH2CH2SbCl 5 RCOO水:使SbCl3水解成氯化氧锑(SbOCl)醇:与蓝色碳正离子作用,使正电荷消失(二)UV法u 维生素A的无水乙醇-盐酸溶液:326nm处有单一吸收峰u 溶液加热,发生脱水反应 去水维生素A:332nm处有较低的吸收峰或拐点 348、367、389nm处有3个尖锐的吸收峰 三、含量测定(一)UV法(三点校正法)u 维生素A:在325-328nm范围内具有最大吸收u 维生素A原料中混有的杂质:在310-340nm内,有吸收、对维生素A A测定有影响的杂质u 维生素A2、维生素A3u 维生素A的氧化产物 环氧
4、化物、维生素A醛和维生素A酸u 维生素A在光照下产生的无活性聚合物 鲸醇(维生素A醇的二聚体)u 维生素A异构体、有关中间体u 植物油2 2、三点校正法u在3 3个波长处测定吸收度后,在规定条件下以校正公式校正吸收度,再进行含量计算。u消除杂质等无关吸收的影响,求得维生素A的真实含量。3 3、测定原理u杂质的无关吸收在310-340nm范围内几乎呈一条直线,且随波长的增大吸收度下降。u物质对光的吸收呈加和性。即在某一样品的吸收曲线上,各波长处的吸收度是维生素A A与杂质吸收度的代数和,吸收曲线也是二者吸收的叠加。4、波长的选择u三点波长的选择原则:一点选择在维生素A的最大吸收波长处(1)其它
5、2 点选择在1的两侧(2,3)l 等波长差法:31=12 Chp规定测定维生素A醋酸酯时,1=328nm 2=316nm 3=340nm =12nml 等吸收比法 A2=A3=(6/7)A1 Chp规定测定维生素A醇时,1=325nm2=310nm 3=334nmu具体选择方法:5 5、测定方法u直截了当测定法 (适用于纯度高的维生素 A A 醋酸酯)(1 1)方法周密称定维生素A醋酸酯适量,加环己烷制成每ml含9-15单位的溶液。分别测定300,316,328,340和360nm波长处的吸收度,确定最大吸收波长(应为328nm),计算各波长下的吸收度与328nm处的吸收度比值。(2)含量计算
6、 I:求,由A=CL求 A 为A328或A328(校正)A328(校正)=3、52(2A328 A316-A340)-等波长差校正式 C近似等于供试品溶液的浓度1cmE%1cmE%A值的选择 p351-352II:求效价(IU/g)指每g供试品中所含维生素A的国际单位数 效价IU/g=1900 1900:Vit A醋酸酯在环己烷溶液中 的换算因子1cmE%III:求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量 标示量%=A:A328或 A328(校正)D:供试品稀释倍数 W:供试品取用量 :胶丸的平均内容物重 标示量:每粒胶丸含Vit A醋酸酯的国际单位数%1001001900标示量LWWDA效价（IU/
7、g)W标示量100%W(3)换算因子:定义:单位数值所相当的效价 维生素A醋酸酯:在环己烷溶液中的换算因子为1900 维生素A醇:在异丙醇溶液中的换算因子为1830计算见 p3511cmE%u 皂化法(适用于维生素A醇)n皂化的目的:除去植物油n等吸收比校正式:A325(校正)=6、815 A325 2、555 A310 4、260 A334供试品KOH/乙醇加热回流皂化液Vit A醇甘油+脂肪酸盐Vit A 醋酸酯植物油（高级脂肪酸甘油酯）乙醚提取Vit A醇乙醚液挥干乙醚Vit A醇异丙醇溶解并稀释9-15 IU/ml的溶液%1001001830%标示量标示量LWWDA6 6、讨论n直截了
8、当测定法适用于高纯度维生素A醋酸酯n皂化法适用于维生素A醇。维生素A酯经皂化处理后,以醇式存在 维生素A醇在皂化过程中不被破坏:也可加入焦性没食子酸,防止Vit A 醇被氧化破坏。n经皂化、乙醚提取后,若杂质含量仍较多,应将未皂化部分(乙醚提取液)经色谱法分离,收集含维生素A A醇的流出液,挥干溶剂,残碴溶于异丙醇,再测定。n 注意溶液种类和供试品类别(醇或酯)n 需对仪器波长进行校正(二)HPLC法 p354 NP-HPLC (一)结构u 维生素B1:盐酸硫胺,thiamine hydrochloride第二节维生素B B1 1的分析一、结构与性质NNH3CNH2612345NS234CH2
9、CH2OH5CH3Cl HCl1CH2季铵类:氨基嘧啶环和噻唑环通过-CHCH2 2-连接碱性基团:噻唑环上的季铵及嘧啶环上的氨基(二)性质u 硫色素反应u UV特性:其盐酸液max=246nm u 与生物碱沉淀试剂反应:嘧啶环和噻唑环 2 个含氮杂环 (一)硫色素反应-维生素B1的专属反应u碱性溶液中,噻唑环 开环,再与嘧啶环上的NH2 环合,经铁氰化钾等氧化剂 氧化,生成硫色素。u硫色素溶于正丁醇(或异丁醇),显蓝色荧光。加酸使成酸性,荧光消失,再加碱使成碱性,荧光又重现。二、鉴别试验(二)沉淀反应 与生物碱沉淀剂的反应(三)氯化物反应(四)硝酸铅反应 维生素B1与NaOH共热,分解产生硫
10、化钠,与PbNO3反应生成黑色沉淀。主要用于维生素B1原料的含测u Vit B1与高氯酸的摩尔比为1:2u 盐酸盐影响的消除:加醋酐的高氯酸电位滴定法(Chp2010)用醋酸汞的冰HAc溶液消除(Chp2005)u 三、含量测定(一)非水滴定法主要用于Vit BVit B1 1片剂和注射剂的测定u直截了当测定法:p360p360 HCl HCl溶液(9 9 10001000)中,246nm 246nm 处测定u差示分光光度法 pH=2 pH=2(0 0、1mol/L HCl1mol/L HCl):):maxmax246nm246nm,421421 pH=7(pH=7(磷酸盐缓冲液):232-2
11、33nm232-233nm:345345 266nm 266nm:2552551cmE%1cmE%1cmE%(二)UVUV法 用于Vit B1原料及其制剂的含测u定量基础:一定条件下,形成硫色素的量与Vit B1浓度成正比。u应采纳强碱,且应过量 硫色素在强碱性条件下才生成u无水乙醇的加入:p361(三)硫色素荧光法一、结构与性质(一)结构l二烯醇l内酯环l2个手性碳原子 OOOHHOCH2OHOHCH123456*第三节 维生素C C的分析u 溶解性:水中易溶u糖类的性质:化学结构与糖类相似u旋光性:2个手性C,L(+)-Vit C活性最大u 酸性u 还原性u 水解性u UV UV吸收特性不
12、稳定性(二)性质u二烯醇结构:显酸性uC3-OH酸性较强(pKa1=4、17)C2-OH酸性特别弱(pKa2=11、57)u一般表现为一元酸,可与NaHCO3作用成钠盐 H2CO3:pKa1=6、38 pKa2=10、25酸性u二烯醇基:强还原性u易被氧化为去氢抗环血酸,在强碱或强酸作用下,进一步水解成酮酸(盐)。u在强碱(NaOH)(NaOH)中,内酯环水解,生成酮酸盐uvit C和碳酸钠作用生成单钠盐,不水解还原性水解性UVUV吸收特性u稀盐酸溶液中,243nm243nm处有最大吸收u中性或碱性条件下,最大吸收红移至265nm(一)与硝酸银反应 二、鉴别试验去氢Vit C黑色(二)与2 2
13、,6-6-二氯靛酚反应 OHOOHCOHOHCH2OHNOClHOClOCOHOHCH2OHOO+玫瑰红色(酸性介质中)无色酚亚胺HNOHClHOCl(三)与其它氧化剂的反应 亚甲蓝 高锰酸钾 磷钼酸 碱性酒石酸铜试液-斐林试液(四)糖类的反应 p264p264 水解、脱羧、失水 蓝色产物(五)UVUV 0、01mol/L盐酸中,243nm处有惟一的 最大吸收与吡咯缩合糠醛u目的:控制有色杂质的含量u有色杂质的产生:Vit C受空气、光线和温度的影响,内酯环水解 脱羧 失水 糠醛(易聚合呈黄色)u检查方法:控制供试品溶液的吸收度三、杂质检查(一)溶液的澄清度和颜色(二)铁、铜离子的检查 铁、铜
14、离子可加速Vit C Vit C 氧化 AAS AAS法 u原理:醋酸酸性条件下,Vit C被碘定量氧化四、含量测定(一)碘量法u注意:l滴定在酸性溶液中进行 可减慢Vit C受空气中氧的氧化速度l加新沸过的冷水:减少水中溶解的氧对测定的影响l注射液测定:加入丙酮,消除NaHSO3抗氧剂的影响 用于Vit CVit C制剂的含测u氧化型:酸性液中显红色 还原型:无色的酚亚胺u终点判断:不需指示剂 酸性液中,用2,6-二氯靛酚标准液滴定,至溶液显红色,即终点(二)2 2,6-6-二氯靛酚法(三)HPLCHPLC法 p367p367(一)结构u Vit EVit E:苯并二氢吡喃醇衍生物 -生育酚
15、(tocopherol)及其各种酯类u 生育酚:有、四种异构体 第四节 维生素E E的分析一、结构和性质H3COCOH3CCH3CH3OCH31234CH31357911CH3CH3CH313*n ChpChp收载:人工合成的消旋-生育酚醋酸酯u溶解性:水中不溶,有机试剂中易溶u水解性:酸性或碱性液中加热,水解成游离生育酚u还原性:对氧十分敏感,易被氧化成-生育醌和-生育酚的二聚体 水解产物游离生育酚更易氧化uUVUV吸收:其无水乙醇液max 284nm(二)性质u 硝酸酸性条件下,水解成生育酚u 生育酚被硝酸氧化成生育红H3COCOH3CCH3CH3OCH3C16H33OH3COCH3OCH
16、3C16H33OHNO3,75oC,水解(一)硝酸反应 二、鉴别试验橙红色u 碱性条件下,水解成生育酚u 生育酚与FeCl3发生氧化还原反应,生育酚 对-生育醌 Fe3+Fe2+u Fe2+与联吡啶,生成红色的配位离子(二)三氯化铁反应 (三)UVUV法 Vit E的 0、01%无水乙醇液:284nm处有最大吸收 254nm处有最小吸收(四)其他方法 TLC GC IRu 酸度:控制制备过程中引入的游离醋酸u 有关物质u 生育酚:Chp采纳硫酸铈滴定法检查 游离生育酚可被硫酸铈定量氧化三、杂质检查u GC GC:直截了当GC,内标校正因子法定量u RP-HPLC RP-HPLC:外标一点法定量
17、 -生育酚及其醋酸酯的出峰顺序四、含量测定n维生素D D:甾醇的衍生物nChpChp主要收载:维生素D D2 2、D D3 3原料药及其制剂第五节维生素D D的分析维生素D2、D3的结构差别:D2比D3 在侧链上多一个双键 C24上多一个甲基一、结构与性质(一)结构CH2HOHCH3HHHCH3CH3CH3HCH3维生素 D D 2 2维生素 D D 3 3CH2HOHCH3HHHCH3CH3CH3123451067891112131415161718192021222324252627u溶解性:水中不溶,有机溶剂中易溶u不稳定性 维生素D2、D3极不稳定:遇光、空气、酸及其它氧化剂,均发生氧化而变质。原因:存在多个烯键(二)性质u旋光性 D2有6个手性碳 D3有5个手性碳uUVUV吸收 无水乙醇溶液在265nm处有最大吸收 D2和D3的吸收系数不同u甾类化合物的显色反应 醋酐-硫酸显色反应u 显色反应 醋酐-浓硫酸显色反应 与三氯化锑反应u 比旋度测定u 维生素D2、D3的区别反应二、鉴别试验三、杂质检查u麦角甾醇 D2需检查,D3不需检查u 前维生素D D的光照产物四、含量测定 Chp采纳正相HPLC 固定相:硅胶 流动相:正己烷-正戊烷感谢您的聆听！感谢您的聆听！
