1、RT-PCR三部曲RNARNA提取提取逆转录为cDNAPCRPCRRNA提取-第一步提取RNA器械的处理n玻璃、不锈钢器皿：180度干烤46小时（不离人）n塑料制品：-高压灭菌，烘干-DEPC水浸泡过夜，捞出沥干水分（很重要），烘干-电泳槽可用0.5M的NaOH浸泡20min RNA提取所需试剂和器皿清单干烤的物品：干烤的物品：n玻璃器皿：10002000ml的大烧杯（浸泡Tip）、100ml的量筒（配乙醇用）、带玻璃塞子的玻璃瓶3个（装异丙醇、氯仿、75%的乙醇）n铝饭盒（放ET管）、镊子（夹Tip和EP管用）处理的塑料制品：处理的塑料制品：n枪头（1000ul/200ul/20ul）nEP
2、管（1.5ml、200ul）nEP管盒子（要与枪头配套）制剂：nDEPC、Trizoln异丙醇、氯仿、乙醇(未开封的)n电泳缓冲液、琼脂糖、EBDEPC（焦碳酸二乙酯）nDEPC水，nA：配制好未消毒；蒸馏水中加入0.1%DEPC，室温搅拌4小时以上至完全溶解。n作用：处理RNA提取的器材（不能干烤的物品）浸泡过夜nB:配制好已消毒。高压灭菌20分钟，冷却备用。（通过高压消毒，该物质会降解，从而无毒）n作用:配置75%乙醇，溶解RNA防止RNA降解n有专门的RNA提取区域：避免人员流动n实验人员带口罩、帽子，勤换手套n快速操作n保证低温环境：降低环境温度、冰上操作（冰盒）、低温离心1 Rnas
3、e是一种蛋白酶，能够降解RNA。2 皮肤、唾液3 这个酶高效稳定。要么在DEPC水中处理n小时，要么在160度高温烘烤6小时。此酶才会失效。什么是RNA酶Rnase?n1 1mlTrizol/孔，室温放置5min，用吸管吹打吸取到EP管中；2 加200ul氯仿 剧烈振荡15s，室温放置23min；3 12000g 低温离心 15min;4 小心取上层水相,一般400-450ul就足够了（千万不要贪多）！n5 加入500ul异丙醇 摇匀（反复颠倒10次），室温放置10min；6 12000g 低温离心 10min；7 75乙醇 1ml 洗涤沉淀；8 7500g 离心 5min；（也可加大离心速度，这样RNA不易被倒掉）9 小心弃去乙醇（不要把RNA倒掉），用小Tip吸干净残余的乙醇（底部不要吸的太干，室温干燥510min；n10 加2030ul DEPC水溶解沉淀。n留取6ul，其余立即分装两份冻存（-80度）n2ul用于定量，余下用于跑胶电泳-判断RNA完整性和是否有DNA污染n新鲜配置的电泳缓冲液n电泳时间不要太久，100120V，1015min足够了。如何判断RNA的完整性：n最理想的RNA降解的RNA是酱紫滴定量n1：70（1ul+69ul的水）
