1、医学微生物学实验医学微生物学实验实验内容一、细菌染色标本检查法一、细菌染色标本检查法 抗酸染色法（操作）抗酸染色法（操作）二、标本片观察：二、标本片观察：（钩体（钩体、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、）、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、）目的要求l掌握抗酸染色技术l掌握钩体，白色念珠菌、曲霉、枯草杆菌基本形态l分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色抗酸染色。l齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭
2、酸复分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色兰色。一、抗酸染色原理一、抗酸染色原理 抗酸染色抗酸染色l材料：标本：卡介苗 染液：石炭酸复红，3%盐酸酒精，美蓝 器具：同革兰氏染色 实验方法：实验方法：1、细菌涂片标本的制备、细菌涂片标本的制备 涂片涂片 干燥干燥 固定固定3、油镜观察油镜观察1）初染：）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗待标
3、本冷却后用水冲洗。2）脱色：）脱色：3%盐酸酒精脱色301；用水冲洗。3）复染复染：用碱性美兰溶液复染1，用水冲洗后用吸水纸吸干。2、染色染色 抗酸染色步骤抗酸染色步骤 1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。、涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片涂片 干燥干燥 固定固定抗酸染色步骤抗酸染色步骤l2、染色包括初染、脱色、复染三步。、染色包括初染、脱色、复染三步。石炭酸复红维持石炭酸复红维持 3-5 5 3%盐酸酒精盐酸酒精30 1 美蓝复染美蓝复染1 冲洗冲洗 干燥干燥 油镜观察油镜观察冲洗冲洗冲洗冲洗初染初染脱色脱色复染复染三、抗酸染色结果三、抗酸染色结果抗酸菌呈红色抗酸菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。注意事项：1、无菌操作、无菌操作2、菌种管摇匀后取菌、菌种管摇匀后取菌3、涂片均匀、涂片均匀4、初染加热维持、初染加热维持35分钟，勿沸腾烧干分钟，勿沸腾烧干5、冷却后冲洗、冷却后冲洗6、油镜下从视野中找红色抗酸菌、油镜下从视野中找红色抗酸菌二、标本片观察二、标本片观察l白色念珠菌l钩体l枯草杆菌l曲霉白色念珠菌钩端螺旋体类炭疽（枯草杆菌）类炭疽（枯草杆菌）炭疽杆菌炭疽杆菌曲霉实验报告实验报告l绘制抗酸染色结果镜下图l绘制四张标本片镜下图
