1、医学微生物学实验医学微生物学实验实验内容一、细菌染色标本检查法一、细菌染色标本检查法 抗酸染色法(操作)抗酸染色法(操作)二、标本片观察:二、标本片观察:(钩体(钩体、白色念珠菌,曲霉、枯草芽胞杆菌、)、白色念珠菌,曲霉、枯草芽胞杆菌、)目的要求l掌握抗酸染色技术l掌握钩体,白色念珠菌、曲霉、枯草杆菌基本形态l分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质,主要是分枝菌酸脂质,主要是分枝菌酸,它包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌一般不易着色,要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后,就很难被酸性脱色剂脱色,故名抗酸染色抗酸染色。l齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭
2、酸复分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物红牢固结合成复合物,用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后,分枝杆菌仍然为红色红色,而其他细菌及背景中的物质为兰色兰色。一、抗酸染色原理一、抗酸染色原理 抗酸染色抗酸染色l材料:标本:卡介苗 染液:石炭酸复红,3%盐酸酒精,美蓝 器具:同革兰氏染色 实验方法:实验方法:1、细菌涂片标本的制备、细菌涂片标本的制备 涂片涂片 干燥干燥 固定固定3、油镜观察油镜观察1)初染:)初染:用玻片夹夹持涂片标本,滴加石炭酸复红2-3滴,在火焰高处徐徐加热,切勿沸腾,出现蒸汽即暂时离开,若染液蒸发减少,应再加染液,以免干涸,加热3-5分钟,待标本冷却后用水冲洗待标
3、本冷却后用水冲洗。2)脱色:)脱色:3%盐酸酒精脱色301;用水冲洗。3)复染复染:用碱性美兰溶液复染1,用水冲洗后用吸水纸吸干。2、染色染色 抗酸染色步骤抗酸染色步骤 1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。、涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片涂片 干燥干燥 固定固定抗酸染色步骤抗酸染色步骤l2、染色包括初染、脱色、复染三步。、染色包括初染、脱色、复染三步。石炭酸复红维持石炭酸复红维持 3-5 5 3%盐酸酒精盐酸酒精30 1 美蓝复染美蓝复染1 冲洗冲洗 干燥干燥 油镜观察油镜观察冲洗冲洗冲洗冲洗初染初染脱色脱色复染复染三、抗酸染色结果三、抗酸染色结果抗酸菌呈红色抗酸菌呈红色,常堆积成团,排列无序,偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。注意事项:1、无菌操作、无菌操作2、菌种管摇匀后取菌、菌种管摇匀后取菌3、涂片均匀、涂片均匀4、初染加热维持、初染加热维持35分钟,勿沸腾烧干分钟,勿沸腾烧干5、冷却后冲洗、冷却后冲洗6、油镜下从视野中找红色抗酸菌、油镜下从视野中找红色抗酸菌二、标本片观察二、标本片观察l白色念珠菌l钩体l枯草杆菌l曲霉白色念珠菌钩端螺旋体类炭疽(枯草杆菌)类炭疽(枯草杆菌)炭疽杆菌炭疽杆菌曲霉实验报告实验报告l绘制抗酸染色结果镜下图l绘制四张标本片镜下图