1、1选修三选修三第一部第一部基础知识基础知识填空版填空版（下部附非填空版）（下部附非填空版）第一章发酵工程1_培养基,该培养基可用来鉴别大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈_色，并有金属光泽、灭菌、倒平板；取 10mL 刚融化的冰激凌作为原液，然后进行梯度稀释，稀释倍数为 1101105 取每个浓度的冰激凌液各 0.1mL，用涂布平板法进行接种， 每个浓度涂 3 个平板， 一共培养 18 个平板； 在适宜温度下培养 48h，统计菌落数.有人认为， 在用该方法统计菌落数目时不需要设计对照组， 所以只准备培养 18 个平板，你认为在这项检测中是否需要对照组？为什么？2 通过发酵可获得大量的_，
2、即单细胞蛋白。用酵母菌等生产的单细胞蛋白可以作为食品添加剂；用单细胞蛋白制成的微生物饲料，能使家畜、家禽增重快，产奶或产蛋量显著提高。另外，在青则饲料中添加乳酸菌，可以提高饲料的品质，使饲料保鲜，动物食用后还能提高免疫力。3.随着对纤维素水解研究的不断深入，利用纤维废料发酵生产_等能源物质已取得成功。 像这样的发酵原料的改变推动着发酵工业迅速发展， 对解决资源短缺与环境污染问题具有重要意义。4._菌、嗜盐菌可以用来生产洗涤剂，_菌有助于提高热敏性产品的产量。发酵工程正渗透到几乎所有的工农业领域，在助力解决粮食、环境、健康和能源等方面的重大问题上，作出了越来越大的贡献。5 发酵工程的应用：第一，
3、生产微生物肥料。微生物肥料利用了微生物在代谢过程中产生的_等来增进土壤肥力，改良土壤结构，促进植株生长，常见的有根瘤菌肥、_菌肥等。有的微生物肥料还可以抑制土壤中病原微生物的生长，从而减少病害的发生。第二，生产微生物农药。与传统的化学农药不同，微生物农药是利用微生物或_来防治病虫害的。第三，生产微生物饲料。6 在医药工业上的应用,例如，_激素能够抑制生长激素的不适宜分泌，可用于治疗肢端肥大症。此外，科学家还利用基因工程，将病原体的某个或某几个_基因转入适当的微生物细胞，获得的表达产物就可以作为疫苗使用。7 啤酒发酵过程分为_和后发酵两个阶段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成 都在_阶
4、段完成。_结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下储存一段时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。8 以大豆为主要原料，利用产生_的霉菌(如黑曲霉)，将原料中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，然后经淋洗、调制成酱油产品；以谷物或水果等为原料，利用_发酵生产的各种酒类。柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂，它可以通过_霉的发酵制得；由_菌发酵可以得到谷氨酸，谷氨酸经过一系列处理就制成味精。9 发酵工程的基本环节一般包括_，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，_，产品的分离、提纯等方面。210 性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过_育种或_ 育种获得。11一些微生物的研
5、究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用_酶处理服装面料等。 已知刚果红是一种染料， 它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成_；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的_。12 细菌适宜在酸碱度接近_性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表38cm 的土壤层。因此，取样时一般要铲去_。13 测定土壤中细菌的数量，一般选用_倍稀释的稀释液进行平板培养。取土 样 时 用 的 铁 铲 样 纸 袋 在 使 用 前 都 需 要 _ 。 操 作 完
6、成 一 定 要_。14 实验使用的平板和试管较多为避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别_和平板上培养样品的_等。15 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成_的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为_的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。16_法除可以用于分离微生物外， 也常用来统计样品中_的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个_，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为_的平板进行计数。17 样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定
7、稀释范围的样品液进行培养， 以保证获得菌落数为 30300、 适于计数的平板。 在同一_下，应至少对 3 个平板进行重复计数，然后求出平均值。值得注意的是，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少， 这是因为_时平板上观察到的只是一个菌落。 因此，统计结果一般用_数而不是用活菌数来表示。18 除上述的活菌计数外，利用_进行直接计数，也是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的_板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。19铲取土样，将样品装入纸袋中。将 10g 土样加入盛有_mL 无菌水的锥形瓶中，充分摇
8、匀。取 1mL 上清液加入盛有_mL 无菌水的试管中，依次等比稀释。20 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为_培养基21 通过_在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到_。22 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板_，放入 28左右(培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异)的恒温培养箱中培养.23 在实验室中，切不可_，离开实验室一定要洗手，使用后的培养基在丢弃前一定要进行_，以免污染环境。24 采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体
9、培养基上，之后经培养得3到的_一般是由单个微生物繁殖形成的_。25 在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。由_繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、_、分离和培养等步骤。26 灭菌 则是指使用强烈的理化方法杀死物体内外有的微生物，包括_。消毒和灭菌工作主要包括两个方面：对操作的空间、操作者的_进行清洁和 消毒；将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进 行_。常用的消毒方法有煮沸消毒、_消毒等；灭菌方法有湿热灭菌、干热灭菌和_灭菌等。27 为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多
10、操作都应在_并在酒精灯火焰附近进行。28 培养基还需 使用前要满足微生物生长对 pH、(特殊营养物质以及 O2，的需求。例如，在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_；在培养霉菌时，需要将培养基调至_；在培养细菌时，需要将培养基调至_；在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。29 醋酸菌是好氧细菌，当 O2、糖源都充足时能将糖分解成醋酸反应简式为：；当缺少糖源时则将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为醋酸反应简式为：酵母菌以葡萄糖为底物的有氧呼吸反应式为：酵母菌以葡萄糖为底物的无氧呼吸反应式为乳酸菌以葡萄糖为底物的无氧呼吸反应式为：29 腐乳本身便于保存。多种微生物参与了豆腐的发酵，如酵母、曲霉和毛霉等
11、，其中起主要作用的是_。30 直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术一般称为_发酵。31.通过微生物发，可以将粮(如玉米小麦等)及各种植物纤维加工成_；将_和普通汽油按一定比例混配，就形成了目前在我国多地广泛使用的乙醇汽油。乙醇汽油的环保性令人称道。调查显示，便用乙醇汽油与使用普通汽油相比，排放到空气中的 NO2、CO 等均有不同程度下降。_法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解，因此可以用它们来净化污水、污泥。第二章细胞工程章清基础知识1 来自同一胚胎的
12、后代具有相同的_，因此胚胎分割可以看作动物_或克隆的方法之一。2 胚胎分害所需要的主要仪器设备为_镜和_。在进行胚胎分割时，应选择发育良好形态正常的_， 将它移人盛有操作液的培养皿和中， 然后在显微镜下用分割针或分割刀分割。在分割囊胚阶段的胚胎时，要注意将_均等分割。3 胚胎移植实质上是_在相同生理环境条件下_的转移。4 进行胚胎移植的优势是可以充分发挥_的繁殖潜力。在这项技术中，供体的主要职能变为产生具有_， 繁重而漫长的妊娠和育仔任务由受体取代， 这就大大缩短了供体本身的_。同时，在对供体施行_处理后，可获得多枚胚胎，经移植可得到多个后代!这使供体的后代数是自然繁殖的十几倍几十倍。45 胚
13、胎移植是指将通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到_的雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。6 通过任何一项技术(如转基因、_和_等)获得的胚胎，都必须移植给受体才能获得后代。7 胚胎工程技术包含的内容很丰富，目前在医学和生产上应用较多的是_、_和_割等，借助这些技术，可以进一步挖掘动物的繁殖潜力。8 哺乳动物的体外受精技术主要包括_的采集、_的获取和受精等步骤，采集到的卵母细胞和精子， 要分别在体外进行成熟培养和获能处理， 然后才能用于体外受精。一般情况下， 可以将_的精子和_的卵子置于适当的培养液中共同培养一段时间，来促使它们完成获能精子体外受精。9 受精卵形成后即_内进行有丝分裂，
14、开始发育，胚胎发育早期，有一段时间是在_内进行分裂，_不断增加，但胚胎的总体积并不增加，这种受精的早期分裂称为卵裂。10 内细胞团，将来发育成胎儿的_；而沿透明带内壁扩展和排列的细胞，称为滋养层细胞，它们将来发育成_。11 随着胚胎的进一步发育，胚胎的内部出现了含有液体的腔囊胚腔，这个时期的胚胎叫作囊胚。囊胚进一步扩大，会导致_破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫作_。12 囊胚孵化后，将发育形成原肠胚。原肠胚表面的细胞层为外胚层，向内迁移的细胞形成_。随着发育的进行，胚层将逐渐分化形成各种组织、器官等，一部分细胞还会在内、外两个胚层之间形成_。13 多数哺乳动物的第一极体不进行减数分裂，因而
15、不会形成两个_极体。在实际胚胎工程操作中，常以观察到_或者_作为受精的标志。14 卵子一般在排出 23h 后才能被精子穿人。动物排出的卵子成熟程度不同，有的可能是_细胞，如马、犬等；有的可能是_细胞，如猪、羊等。但它们都要在输卵管内进一步成熟，到_期时，才具备与精子受精的能力。15 获能后的精子与卵子相遇时，首先它释放出_，以溶解_外的一些结构， 同时借助自身的运动接触细胞膜。 在精子触及卵细胞膜的瞬间， 卵细胞膜外的_会迅速发生生理反应，阻止后来的精子进人_。然后，精子入卵。精子入卵后，_也会立即发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵内。16 精子入卵后，_脱离，原有的核膜破裂并形成一个新的核膜
16、，最后形成一个比原来精子的核还大的核，叫作_。与此同时，精子人卵后被激活的卵子完成_，排出第二极体后，形成_。雄、雌原核充分发育后，相向移动，彼此靠近，核膜消失。这个含有两个染色体组的合子就是受精卵。17 使精子获能的方法有直接利用雌性动物的_使精子获能；将精子培养在人工配制的_中使其获能等。_的成分因动物种类不同而有所差异，常见的有效成分有肝素、_载体等。18 胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或_细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。胚胎工程技术包括体外受精、_、胚胎移植和胚胎分割等。19 目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是_法
17、。也有人采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞_的情况下去核或使其中的_变性。520 通过_法使两细胞融合，供体核进入卵母细胞，形成_胚。21 用物理或化学方法(如电刺激、Ca*载体、_)激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程22 单克隆抗体优点：能准确地识别抗原的_，与_发生特异性结合，并且可以大量制备。因此被广泛用作_，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要的作用。例如，利用_标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。除前面介绍的单克隆抗体可以_外，单克隆抗体自身也能用于_。在医药领域，单克隆抗体药物占有非常重要的地
18、位。23 用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，_的亲本细胞和融合的具有_的细胞都会死亡，只有融合的_细胞才能生长。对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行_培养和_检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。24 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞含义是指：分泌的抗体能与_结合。即基因工程中检测目的基因所用到三种方法之一的_法。25 杂交瘤细胞特点：既能_，又能产生_。26 动物细胞融合与植物_融合的基本原理相同， 动物细胞融合的常用方法有 P EG 融合法、电融合法、_诱导法等。其意义为：细胞融合技术突破了_的局限，使_成为可能。目前，这一技术已经成为研究细胞遗传、_、肿瘤和培育生物新品
19、种等的重要手段，特别是利用动物细胞融合技术发展起来的_技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。27 干细胞的研究正在如火如荼地开展。虽然将干细胞用临床治疗还面临一些问题，如存在导致_的风险.28 神经干细胞在治疗_损伤和_退行性疾病(如帕金森病、 阿尔茨海默病等方面有重要的应用价值。29 胚胎干细胞必须从_中获取，这涉及伦理问题，因而限制了它在医学上的应用。2006 年，科学家通过体外诱导小鼠_细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞简称iPS 细胞)， .将它称为诱导多能干细胞.现在， 用 iPS 细胞治疗阿尔茨海默病、心血管疾病等领域 IPS 细胞可以来源于病人自身的体细胞， 将它移植回角的研究也
20、取得了新进展。 因为诱导过程无须破坏胚胎，普遍认为 iPS 细胞的应用前景优于胚胎干细胞。另：P108 页目前，科学家已经成功用 iPS 细胞克隆出了活体小鼠。30 胚胎干细胞(， 简称 ES 细胞)于_中，具有分化为成年动物体内的_的细胞，并进一步形成机体的所有_甚至个体的潜能。ES 细胞可以在体外分化成心肌细胞、神经元和造血干细胞等细胞。31 成体干细胞是成体组织或器官内的干细胞，包括骨髓中的_细胞、神经系统中的_细胞和睾丸中中的_细胞等。32 一般认为，成体干细胞有_性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成_的能力。33 造血干细胞是发现最早、研究最多应用也最为成熟的一类成体干细胞，
21、主要存在于成体的_、_和_中。34 人们通常将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为_培养，将分瓶后的细胞培养称为_培养。在进行传代培养时，悬浮培养的细胞直接用_收集；贴壁细胞需要重新用_等处理，使之分散成单个细胞，然后再用6_收集。之后，将收集的细胞制成_，分瓶培养.35 原代培养用_的方法，或用胰蛋白酶、_等处理的方法，将组织分散成单个细胞传代培养.36.在进行细胞培养时，通常采用培养皿或_，并将它们置于含有 95%空气和 5%CO2的混气体的 CO2 培养箱中进行培养。37 体外培养的动物细胞可以分为两大类：一类细胞能够_在培养液中生长增殖；另一类则需要_于某些基质表面能生
22、长增殖，大多数细胞属于这种类型，这-类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为_。悬浮培养的细胞会因细胞_、_和养液中_等因素而分裂受阻。贴壁细胞在生长增殖时，除受上述因素的影响外，还会发生_现象即当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会止分裂增殖。这时就需要对细胞进行_。38 细胞在体外培养时，培养基中应含有细胞所需要的各种营养物质。将细胞所需的营养物质按种类和数量严格配制而成的培养基，称为_培养基。由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此在使用合成培养基时，通常需要加人_等一些天然成分。培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为_。39 在体外培养细胞时，必须保证环境是_的。
23、培养液还需要_，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。40 维持细胞生存必须有适宜的温度。哺乳动物细胞培养的温度多以_为宜。多数动物细胞生存的适宜 pH 为_。此外，_也是动物细胞培养过程中需要考虑的一个重要环境参数。CO2 的主要作用是_。41 初生代谢是生物生长和生存所必需的代谢活动，因此在整个生命过程中它一直进行着。初生代谢物有_、_、_和_等。次生代谢不是生物生长所必需的，一般在_中，并在一定的环境和时间条件下才进行。42 植物代谢会产生一些一般认为不是植物基本的生命活动所必需的产物次生代谢物。次生代谢物是一类_(如酚类、_和含氮化合物等)43。 植物细胞培养是指在_条
24、件下对_植物细胞或_进行培养使其增殖的技术.优点是：它不_，几乎不受_等的限制，因此对于社会、经济、环境保护具有重要意义。44 切取一定大小的茎尖进行组织培养，再生的植株就有可能不带_，从而获得脱毒苗。45 用于快速繁殖优良品种的_技术，被人们形象地称为植物的_技术，也叫作_技术。优点：它不仅可以_地实现种苗的大量繁殖，还可以保持优良品种的_。46 在进行体细胞杂交之前，必须先利用_和_去除这层细胞壁，获得原生质体。杂交过程中的一个关键环节，是_，这必须要借助一定的技术手段才能实现。人工诱导_的方法基本可以分为两大类 物理法和化学法。物理法包括_法、离心法等；化学法包括聚乙二醇(PEG) 融合
25、法、_一高 pH 融合法等。 融合后得到的杂种细胞再经过诱导可形成_， 并可进一步发育成完整的杂种植株。47 植物细胞一般具有全能性.在一定的_和营养等条件的诱导下，已经分化的细胞可以经过脱分化，即失去其_，转变成_的细胞，进而形成不定形的_， 这称为愈伤组织。 愈伤组织能重新分化成芽、 根等器官， 该过程称为再分化。748 植物激素中生长素和细胞分裂素是_、脱分化和再分化的关键激素，它们的_等都会影响植物细胞的发育方向。将愈伤组织接种到含有特定激素的培养基上，就可以诱导其再分化成_,长出芽和根，进而发育成完整的植株。48 植物体细胞杂交技术在_，实现_，培育_等方面展示出独特的优势。49.植
26、物组织培养原理：_性1.植物组织培养培养基有：MS 培养基、生芽培养基、生根培养基MS 培养基含：大量元素、 微量元素、有机物（甘氨酸、维生素、蔗糖等）； 植物激素（生长素、细胞分裂素、赤霉素等）2.植物激素用量及比例对细胞分裂分化的影响：细胞分裂素/生长素比值高，促进芽分化，抑制根生成细胞分裂素/生长素比值_，促进根分化，抑制芽生成细胞分裂素/生长素比值适中，促进愈伤组织生长第三章基因工程1 生物武器包括致病菌类、病毒类和_类等，例如，天花病毒、波特淋菊、霍乱孤菌和炭疽杆菌都可以用来制造生物武器。生物武器的致病能力强、攻击范围广。它可以直接或者通过_和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤
27、等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，也能大量损害植物。2 关于克隆人，我国政府一再重申四不原则：不_任何生殖性克隆人实验。原因如下：克隆人只是某些人出于某种目的制造出的“产品”，没有“父母”，这可能导致他们在心理上受到伤害；由于技术问题，可能孕育出有严重生理缺陷的克隆人；克隆人的家庭地位难以认定，这可能使以血缘为纽带的父子、兄弟和姐妹等人伦关系消亡；生殖性克隆人冲击了现有的一些有关婚姻、家庭和两性关系的伦理道德观念；生殖性克隆人是对人类尊严的侵犯；生殖性克隆人破坏了人类_的天然属性，不利于人类的生存和进化。3 小鼠单克隆抗体会使人产生免疫反应，从而导致它的治疗效果大大降低，科学家将小鼠抗体上_的
28、区域“嫁接”到人的抗体上，经过这样改造的抗体诱发免疫反应的强度就会降低很多。4 天然蛋白质合成的过程是按照中心法则进行的：基因表达(转录和翻译)形成具有特定氨基酸序列的多肽链形成具有_行使生物功能。而蛋白质工程却与之相反，它的基本思路是：从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的_找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质5 蛋白质工程经常要借助_来建立蛋白质的三维结构模型；要利用_技术来获得蛋白质的结晶体，然后通过_技术，分析晶体的结构；要用到基因的_技术来进行碱基的替换。6 科学家家正尝试利用_技术对猪的器官进行改造，采用的方法是在器官供体的基因组中
29、导人某种调节因子，以抑制_基因的表达，或设法除去_基因、然后再结合_技术，培育出不会引起免疫排斥反8应的转基因克隆猪器官。7 科学家将_基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件组在一起，通过_的方法注入哺乳动物的受精卵中，由这个受精卵发育成的转基因动物进入泌乳期后， 可以通过分泌乳汁来生产所需要的药物这称为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。8.为避免外源 DNA 等因素的污染，PCR 实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行_灭菌处理。9.该实验所需材料可以直接从公司购买，_和酶应分装成小份，并在-20储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在_上缓慢融化。10.在向_ 中添加反
30、应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的_都必须更换。11.待所有的组分都加入后，盖严离心管的盖子。将微量离心管放人离心机里，离心约 10s，使_集中在管的底部。12 根据待分离 DNA 片段的大小， 用_配制琼脂糖溶液，一般配制质量体积比为 0.8%1.2%的琼脂糖溶液。水浴或微波炉内加热至_熔化。稍冷却后妙加人适量的_混匀。将温热的琼脂糖溶液迅速倒人_，并插入合适大小的梳子，以形成_。13 待凝胶溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝胶放入_内。14 将电泳缓冲液加入_中，电泳缓冲液没过凝胶 1mm 为宜。15 将扩增得到的 PCR 产物与凝胶_(内含指示剂)混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入
31、凝胶的_内。 留一个样孔加入指示分子大小的标准参照物。16 接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，.一般为 15V/cm。待指水剂前沿迁移接近_，停止电泳。17、取出凝胶置于_下观察和照相。18.大多数限制酶的识别序列由 6 个核苷酸组成。例如，_、Smal 限制酶的识别序列均为 6 个核苷酸， 也有少限制酶的识别序列由 4 个、8 个或其他数量的核苷酸组成.19.DNA 分子经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式一-_末端和平末端。当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将 DNA 分子的两条链分别切开时，产生的是_末端；当限制酶在它识别序列中心轴线处切开时，产生的是平末
32、端。20 切割 DNA 分子的工具是限制性_酶 ， 又称限制酶 。这类酶主要是从_生物中分离纯化出来的。 它们能够识别双链 DN A 分子的_，并且使每一条链中特定部位的_断开。21 在基因工程中使用的载体除质粒外，还有_、_等。它们的来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插人外源 DNA 片段的大小上也有很大差别。这些基因工程载体，相当于一种运输工具，因此将它们比喻为“_”。22.质粒是一种种裸露的、 结构简单、 独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核 DNA 之外， 并具 有 _ 能 力 的 _ 状 双 链 DNA 分 子 . 质 粒 DNA 分 子 上_个限制酶切割位点供外源 DNA 片段
33、(基因) 插入其中。 携带外源 DNA 片段的质粒进人受体细胞后，能在细胞中进行自我复制，或_到受体 DNA 上， 随受体 DNA 同步复制。923 在基因工程操作中真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行_的。这些质粒上常有特殊的_基因，如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等， 便于重组 DNA 分子的筛选。24.DNA 连接酶主要是一种能够_酶， 称之为 DNA 连接酶，有两类：一类是从_中分离得到的， 称为 E.coliDNA 连接酶：另一类是从_中分离出来的， 称为 T4DNA 连接酶。这两类酶都能将双链 DNA 片段“缝合”起来， 恢复被限制酶切开的磷酸二酯键，但这两种酶的作
34、用有所差别。E.coliDNA 连接酶只能将_的 DNA 片段连接起来， 不能连接具有_DNA 片段。而 T4DN连接酶既可以“缝合”双链 DNA 片段互补的黏性末端， 又可以“缝合”双链 DNA 片段的平末端， 但连接_的效率相对较低。25DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。例如，_不溶于酒精， 但某些_溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离 DNA 与蛋白质。DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同， 它能溶于_的 NaCl 溶液。在一定温度下，DNA 遇_试剂会呈现蓝色， 因此_试剂可以作为鉴定 DN
35、A 的试剂。26.称取约 30g 洋葱，切碎，然后放人研钵中，倒人 10mL 研磨液，充分研磨。在漏斗中垫上_，将 研磨洋葱洋葱研磨液过滤到烧杯中，在_中放置几分钟后， 再取上清液。 也可以直接将研磨液倒人塑料离心管中， 在 1500r/min 的转速下离心 5min，再取上清液放入烧杯中。.在上清液中加人体积相等的、预冷的_溶液(体积分数为 95%)，静置 23min， 溶液中出现的白色丝状物就是_。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；或者将溶液倒入塑料离心管中，在10000/min 的转速下离心 5min， 弃上清液， 将管底的沉淀物(_) 晾干。取两支 20mL
36、的试管， 各加人 2molL 的 NaCl 溶液 5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的 NaCl 溶液中。然后， 向两支试管中各加入 4mL 的二苯胺试剂。混合均匀后， 将试管置于_中加热 5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。27 培育转基因抗虫棉主要需要四个步骤:目的基因的筛选与获取、 _、 目的基因导入受体细胞、目的基因的_与_。28 在基因工程的设计和操作中，用于改变_或获得_等的基因就是目的基因。根据不同的需要，目的基因是不同的，它主要是指_的基因，如与生物抗逆性)优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。29 苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴孢晶体蛋白
37、(Bt 抗虫蛋白)，破坏鳞翅目昆虫的_来杀死棉铃虫。科学家通过实验，将该细菌的“杀虫基因”转到棉花里，让棉花也能产生 Bt 抗虫蛋白抵抗虫害。这个“杀虫基因”就是培育转基因抗虫棉用到的目的基因Bt 抗虫蛋白基因，简称 Bt 基因。30 从相关的已知_的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。在获得转基因产品的过程中，还可以通过_来获取目的基因（P82）。在我国首批具有较高抗虫活性的转基因抗虫棉的培育过程中，科学家_目的基因。31 欲 知 道 更 多 的 基 因 的 结 构 和 功 能 ， 往 往 运 用 到 _( 如 GeBank) 、_(如 BLAST) 。这也为科学家找到合适的目的基因提供了更
38、多的机会和可能。引物的作用：使_能够从引物的_端开始连接脱氧核苷酸32PCR 反应需要在一定的_中才能进行， 需提供 DNA 模板， 分别与两条模板链结合的_种引物， 4 种脱氧核苷酸和_的 DNA 聚合酶； 同时通过_使 DNA 复制在体外反复进行。1033PCR 扩增的过程是：目的基因 DNA_后解为单链，_与单链相应互补序列结合：然后以单链 DNA 为模板， 在_作用下迸行延伸，即将 4 种脱氧核苷酸加到_的 3端，如此重复循环多次。由于延伸后得到的产物又可以作为下一个循环的_，因而每一次循环后目的基因的量可以增加一倍，即成指数形式扩增(约为2， 其中n为扩增循环的次数)。 每次循环一般
39、可以分为变性、 _和延伸三步。34.PCR 是_的缩写。它是一项根据_的原理，在体外提供参与DNA 复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。35.真核细胞和细菌的_都需要 Mg2+激活。因此，PCR 反应_中一般要添加 Mg2+36.引物是一小段能与 DNA 母链的一段碱基序列互补配对的_。 用于 PCR 的引物长度通常为 2030 个_。37 当 Bt 抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的_结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。Bt 抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体。因此，Bt 抗虫
40、蛋白不会对人畜产生上述影响。38.变性：当温度上升到_以上双链 DNA 解聚为单链。复性：当温度下降到 50左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链 DNA 结合。延伸：当温度上升到72 左右时，溶液中的 4 种脱氧核苷酸在_的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的 DNA 链。39 变性、复性、延伸过程可以在 PCR 扩增仪(PCR 仪) 中自动完成以后， 常采用_来鉴定 PCR 的产物。40 构建好的基因表达载体需要通过一定的方式才能进人受体细胞。我国科学家采用他们独创的一种方法一-花粉管通道法， 将 Br 基因导人了棉花细胞。 花粉管通道法有多种操作方式。例如，可以用微量注射器将含目的基
41、因的 DNA 溶液直接注入_中； 可以在植物受粉后的一定时间内， 剪去柱头， 将 DNA 溶液滴加在_切面上， 使目的基因借助_进入胚囊。除此之外，将目的基因导人植物细胞常用的方法还有农杆菌转化法。41 转化 是指目的基因进 入受体细胞内，并且在受体细胞内_的过程。42 基因表达载体是载体的一种，除目的基因、标记基因处， 它还必须有_ 、_等。起动子是一段有特殊序列结构的 DNA 片段， 位于_， 紧挨_的起始位点， 它是_识别和结合的部位， 有了它才能驱动基因转录出 mRNA， 最终表达出人类需要的蛋白质。有时为了满足应用需要，会在载体中人工构建_启动子，当诱导物存在时，可以_目的基因的表达
42、。终止子相当于一盏红色信号灯，使转录在所需要的地方停下来，它位于_，也是一段有特殊序列结构的 DNA 片段。43 在构建抗虫棉的基因表达载体时，首先会用一定的_切割载体，使它出现一个切口；然后用_切割含有目的基因的 DNA 片段；再利用 DNA 连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，这样就形成了一个重组 DNA 分子 。44 目的基因插入 Ti 质粒的_中， 通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞。根据受体植物的不同，所用的具体转化方法有所区别。例如:可以将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与_共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株；可以将花序直接浸没在含有_的溶液中一段时间，然后培养
43、植株并获得种子，再11进行筛选、鉴定等。随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种_植物也取得了成功。45 农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染_植物和_植物，而对大多数_植物没有侵染能力。农杆菌细胞内含有 Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将 Ti 质粒上的 T-DNA(可转移的 DNA) 转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的_上。46 由于不同转基因产品所需要的目的基因不同，受体细胞又有植物、动物、微生物之分，因此_的构建方法不是千篇一律的，将目的基因导入受体细胞的方法也不是完全相同的。例如，将目的基因导人动物受精卵最常用的一种方法是利用_将目的基因注人动物的受精
44、卵中， 这个受精卵将发育成为具有新性状的动物。 在基因工程操作中，常用_生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛。研究人员一般先用_处理大肠杆菌细胞， 使细胞处于一种_的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。47 目的基因进入受体细胞后，是否稳定_其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道，首先是分子水平的检测， 包括通_等技术检测棉花的染色体 DNA 上是否插人了 Bt 基因或检测 Bt 基因是否转录出了_；“从转基因棉花中提取蛋白质， 用相应的_进行抗原一抗体杂交，检测 Bt 基因是否翻译成 Bt 抗虫蛋白等。48 还需要进行_水平的鉴定。例如，通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫来确定
45、Bt 基因是否赋予了棉花抗虫特性以及抗性的程度。49.PCR 利用了 DNA 的_原理， 通过_来控制 DNA 双链的解聚与结合。PCR 仪实质上就是一台能够_的仪器。一次 PCR 一般要经历_次循环。50.DNA 分子具有可解离的基团， 在一定的 pH 下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着_的电极移动，这个过程就是电泳。51. PCR 的产物一般通过_来鉴定。在凝胶中 DNA 分子的迁移速率与_的浓度、 _的大小和构象等有关。 凝胶中的 DNA 分子通过染色，可以在波长为 300nm 的_下被检测出来。选修三选修三第二部第二部基础知识基础知识非填空版非填空版
46、选修三第一章基础知识1 伊红一亚甲蓝琼脂培养基,该培养基可用来鉴别大肠杆菌， 生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽)、灭菌、倒平板；取 10mL 刚融化的冰激凌作为原液，然后进行梯度稀释，稀释倍数为 1101105 取每个浓度的冰激凌液各 0.1mL，用涂布平板法进行接种，每个浓度涂 3 个平板，一共培养 18 个平板；在适宜温度下培养 48h，统计菌落数.有人认为， 在用该方法统计菌落数目时不需要设计对照组， 所以只准备培养 18 个平板，12你认为在这项检测中是否需要对照组？为什么？答：需要设置对照组。严格来说，应该设置两组对照组。一组为阴性对照组，不进行涂布或者用无菌水涂
47、布平板；另一组为阳性对照组，涂布大肠杆菌。前者可以说明培养基是否被污染后者可以说明该培养基能否培养出大肠杆菌。2 通过发酵可获得大量的微生物体，即单细胞蛋白。用酵母菌等生产的单细胞蛋白可以作为食品添加剂；用单细胞蛋白制成的微生物饲料，能使家畜、家禽增重快，产奶或产蛋量显著提高。另外，在青则饲料中添加乳酸菌，可以提高饲料的品质，使饲料保鲜，动物食用后还能提高免疫力。3.随着对纤维素水解研究的不断深入，利用纤维废料发酵生产酒精、乙烯等能源物质已取得成功。 像这样的发酵原料的改变推动着发酵工业迅速发展， 对解决资源短缺与环境污染问题具有重要意义。4.嗜热菌、嗜盐菌可以用来生产洗涤剂，嗜低温菌有助于提
48、高热敏性产品的产量。发酵工程正渗透到几乎所有的工农业领域， 在助力解决粮食、 环境、 健康和能源等方面的重大问题上，作出了越来越大的贡献。5 发酵工程的应用：第一，生产微生物肥料。微生物肥料利用了微生物在代谢过程中产生的有机酸、生物活性物质等来增进土壤肥力，改良土壤结构，促进植株生长，常见的有根瘤菌肥、固氮菌肥等。有的微生物肥料还可以抑制土壤中病原微生物的生长，从而减少病害的发生。第二，生产微生物农药。与传统的化学农药不同，微生物农药是利用微生物或其代谢物来防治病虫害的。第三，生产微生物饲料。6 在医药工业上的应用,例如， 生长激素释放抑制激素能够抑制生长激素的不适宜分泌， 可用于治疗肢端肥大
49、症。此外，科学家还利用基因工程，将病原体的某个或某几个抗原基因转入适当的微生物细胞，获得的表达产物就可以作为疫苗使用。7 啤酒发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成 都在主发酵阶段完成。主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下储存一段时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。以大豆为主要原料，利用产生蛋白酶的霉菌(如黑曲霉)，将原料中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，然后经淋洗、调制成的酱油产品；以谷物或水果等为原料，利用酿酒酵母发酵生产的各种酒类。 柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂， 它可以通过黑曲酶的发酵制得；由谷氨酸棒状杆菌
50、发酵可以得到谷氨酸，谷氨酸经过一系列处理就制成味精。发酵工程的基本环节一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面。性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种或基因工程 育种获得。11 些微生物的研究与应用， 使人们能够利用秸秆等生产酒精， 用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料， 它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物， 但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈
