1、第3节 胚胎工程（胚胎工程技术及其应用）讲课人：涂梦婷第二章 细胞工程复习受精前的准备阶段受精阶段准备阶段:精子获能准备阶段:卵子的准备受精含义方法减数分裂不连续受精和卵细胞成熟的场所精子的结构排卵的含义卵子具备受精能力的时期受精前的准备阶段受精阶段受精精子如何穿越卵细胞膜外结构？防止多精入卵的两道屏障受精的标志是什么？受精完成的标志是什么？复习复习体外受精主要包括 步骤卵母细胞成熟培养成熟卵母细胞（M期）精子获能处理获能的精子体外受精受精卵雌性哺乳动物雄性哺乳动物卵母细胞的采集精子的获取a.卵母细胞的采集b.精子的获取c.(体外)受精体外受精卵母细胞成熟培养成熟卵母细胞（M期）精子获能处理获
2、能的精子体外受精受精卵雌性哺乳动物雄性哺乳动物卵母细胞的采集精子的获取1、卵母细胞的采集方法输卵管利用促性腺激素促性腺激素促使雌性动物排出更多的卵母细胞，从输卵管中冲取卵母细胞。超数排卵卵巢采卵屠宰动物的卵巢采卵活体采卵不能口服体外受精卵母细胞成熟培养成熟卵母细胞（M期）精子获能处理获能的精子体外受精受精卵雌性哺乳动物雄性哺乳动物卵母细胞的采集精子的获取1、卵母细胞的采集方法输卵管利用促性腺激素促性腺激素促使雌性动物排出更多的卵母细胞，从输卵管中冲取卵母细胞。超数排卵卵巢采卵屠宰动物的卵巢采卵活体采卵无需培养，取出的卵母细胞可直接与获能的精子在体外受精培养至M期卵母细胞成熟培养成熟卵母细胞（M
3、期）精子获能处理获能的精子体外受精受精卵雌性哺乳动物雄性哺乳动物卵母细胞的采集精子的获取体外受精2、精子的采集方法假阴道法、电刺激法等卵母细胞成熟培养成熟卵母细胞（M期）精子获能处理获能的精子体外受精受精卵雌性哺乳动物雄性哺乳动物卵母细胞的采集精子的获取体外受精新鲜或解冻的精液获能精子精子离心处理3、为什么精液要离心处理？精子精浆精液含有能抑制精子获能的物质含有能抑制精子获能的物质卵母细胞成熟培养成熟卵母细胞（M期）精子获能处理获能的精子体外受精受精卵雌性哺乳动物雄性哺乳动物卵母细胞的采集精子的获取体外受精新鲜或解冻的精液获能精子精子离心处理4、精子在体外如何获能？在人工配制的培养液中培养（肝
4、素、Ca+载体）卵母细胞成熟培养成熟卵母细胞（M期）精子获能处理获能的精子体外受精受精卵雌性哺乳动物雄性哺乳动物卵母细胞的采集精子的获取体外受精 意义是提高动物繁殖能力的有效措施为胚胎移植提供可用胚胎？体外受精获得的胚胎怎么发育成个体?胚胎移植 概念指将通过 得到的胚胎，移植到_、_的雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。体外受精及其他方式同种的 生理状态相同体内受精、转基因技术和动物细胞核移植技术等供体 提供胚胎的个体产生具有优良遗传特性的胚胎选择标准：职能：受体 接受胚胎的个体选择标准：职能：有健康体质和正常繁殖能力有健康体质和正常繁殖能力承担繁重而漫长的妊娠和育仔任务实质：早期胚胎在
5、相同生理环境条件下空间位置的转移遗传性状优良性状优良、生产能力强胚胎移植受体母牛受体母牛（有健康体质和正常繁殖能力）（有健康体质和正常繁殖能力）（遗传性状优良，生产能力强）（遗传性状优良，生产能力强）优良供体母牛优良供体母牛进行进行同期发情同期发情处理处理利用某些激素（一般用孕激素）人为地控制并调整一群母畜在预定时间内集中发情。同期发情的目的是？使供体和受体的生理环境达到同使供体和受体的生理环境达到同步或一致，步或一致，为供体胚胎移入受体为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。提供相同的生理环境。（这是胚胎移植成功与否的关键。）受体对胚胎基本发生免疫排斥反应！胚胎移植受体母牛受体母牛（有健康体质
6、和正常繁殖能力）（有健康体质和正常繁殖能力）（遗传性状优良，生产能力强）（遗传性状优良，生产能力强）优良供体母牛优良供体母牛进行进行同期发情同期发情处理处理受体发情超数排卵处理促性腺激素促性腺激素孕激素孕激素发情配种或人工受精发情配种或人工受精收集胚胎并检查收集胚胎并检查优良公牛优良公牛正常繁殖或两三个月后进行另一次移植正常繁殖或两三个月后进行另一次移植移植胚胎移植胚胎对受体进行妊娠检查对受体进行妊娠检查具有优具有优良性状良性状的后代的后代“两次检查”“两次激素”同期发情孕激素超数排卵促性腺激素对胚胎进行质量检查胚胎进行质量检查；对受体母畜进行是否妊是否妊娠娠的检查。桑椹胚或囊胚阶段胚胎移植
7、意义可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，缩短了供体本身的繁殖周期。作为胚胎工程的最终技术环节，将推动胚胎工程其他技术的研究和应用。对供体施行超数排卵处理后，可获得多枚胚胎，经移植可得到多个后代，使供体生产下的后代数量是自然繁殖的十几倍到几十倍。胚胎分割采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。概念 繁殖方式无性繁殖（克隆）适合分割的胚胎发育良好的、形态正常的桑葚胚或囊胚 理论依据早期胚胎细胞具有很强的分裂能力，并保持着细胞全能性。注意内细胞团要均等分割胚胎分割 主要仪器设备体视显微镜体视显微镜+显微操作仪显微操作仪、分割针或分割刀、分割针或分割刀胚胎
8、分割在盛有操作液的培养皿中，显微镜下分割在盛有操作液的培养皿中，显微镜下分割囊胚腔囊胚腔透明带透明带滋养层滋养层内细胞团内细胞团分割针分割针分割针分割针做做DNADNA分析，分析，鉴定性别鉴定性别二分胚二分胚内细胞团内细胞团（均等分割）（均等分割）胚胎移植胚胎移植 过程胚胎分割 优点可以促进优良动物品种的繁殖产生的遗传性状相同的后代是进行遗传学研究的宝贵材料在胚胎移植前，进行性别鉴定、遗传病筛查等，对于人工控制动物性别、动物繁育健康后代有重要意义 局限性 实践证明，采用胚胎分割技术产生同卵多胎的可能性是有限的，分割次数越多，分割后胚胎成活的概率越小，目前仍然以二分胚胎的分割和移植效率最高。另外
9、，还存在刚出生动物体重偏低，毛色、斑纹可能存在差异等问题。1.下列关于小鼠体外受精及胚胎发育的叙述,错误的是()A.精子在获能液中于37、5%CO2条件下培养的目的是使精子获能B.小鼠在特定光控周期条件下饲养,注射相关激素有促进超数排卵的作用C.分割的胚胎细胞有相同的遗传物质,因此发育成的个体没有形态学差异D.注射到囊胚腔中的胚胎干细胞可以参与个体器官的发育C练习练习2、印度沙漠猫是一种珍稀猫科动物，通过胚胎工程技术，可以让家猫代孕而繁育，主要步骤如图所示。下列相关叙述正确的是A.步骤甲、乙分别是指精子获能、胚胎分割B.诱导超数排卵所注射的激素只能作用于特定细胞C.受精卵发育成早期胚胎所需营养
10、主要来源于培养液D.步骤甲使用的培养液和早期胚胎培养液成分相同练习为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法。请根据图示信息回答下面的问题：(1)试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的生物工程技术有_等。(2)用来促进B牛多排卵的激素是_激素。E牛的性别是_。动物细胞培养、胚胎移植促性腺雌性或雄性练习(3)产生F牛的理论依据是_，其繁殖方式属于_。动物体细胞核具有全能性无性繁殖练习4下列有关胚胎分割叙述不正确的是（）A通过胚胎分割可以产生基因型相同的个体B胚胎分割移植，实现同卵多胎的成功率较低C取滋养层细胞进行性别鉴定、遗传病筛查，是因为囊胚的滋养层和内细胞团是由同一受精卵分裂产生的D胚胎分割时可采用胰蛋白酶处理囊胚，将内细胞团细胞分散开D练习5、下列有关胚胎分割的叙述，错误的是（）A.选择发育良好、形态正常的桑葚或囊胚进行分割B.对囊胚进行胚胎分割时要保证将内细胞团均等分割C.胚胎分割产生的后代个体表型一定完全相同D.胚胎分割可以看成动物的无性繁殖或克隆C C6、以下关于胚胎分割移植的说法，不正确的是（）A.就目前的胚胎分割移植而言，产生的同卵双胎较多，同卵多胎成功率较低B.胚胎分割所需要的主要仪器设备为体视显微镜和显微操作仪C.可在囊胚阶段将胚胎随机分割成两份或多份，然后移植D.用分割针将桑葚胚均分成两部分，可直接将裸半胚移植入受体练习C C
