1、第1章 发酵工程1.2.1 微生物的培养技术及应用学习目标l 什么是培养基？如何配置？l 什么是无菌技术？l 怎样进行酵母菌的纯培养？从社会中来课本P9向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，的细菌，再再经过发酵就可以制成酸奶，由于制作经过发酵就可以制成酸奶，由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶，自制工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶，自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜，的事件屡见不鲜，主要原因是主要原因是在在制作过程中有杂制作过程中有杂菌混入。菌混入。怎样才能保证无处
2、不在的杂菌不混入发酵物中呢？应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入这需要应用无菌技术和微生物的培养技术微生物概述课本P91.微生物的定义：难以用肉眼看清，需要借助光学显微镜或电子显微镜 才能观察到的一切微小生物的总称2.微生物分类病毒病毒:SARSSARS病毒、噬菌体等病毒、噬菌体等无细胞结构细胞结构原核细胞真核细胞草履虫、变形虫等草履虫、变形虫等酵母菌、毛霉等酵母菌、毛霉等真菌真菌:原生生物原生生物:有没有可能不借助显微镜观察到微生物类群呢？本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌细菌细菌:大肠杆菌、乳酸菌
3、等大肠杆菌、乳酸菌等放线菌放线菌:链霉菌等链霉菌等微生物概述课本P9、123.菌落：分散的微生物在适宜的分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部固体培养基表面或内部可以繁殖形成可以繁殖形成肉眼可见的肉眼可见的、有一定形态结构有一定形态结构的的子细胞群体子细胞群体，这就是菌落，这就是菌落(2)特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度大小、形状、光泽度、颜色、透明度等等(3)功能：菌落是菌落是鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据(1)概念：提供合适的营养和环境条件防止杂菌污染，并将所需要的微生物分离出来在实验室培养微生物：培养基的配制无菌技术课本P9高压蒸汽灭菌锅干热灭菌箱微生物的基本培养技术课本P
4、9-10培养基的概念、作用、种类及用途？结合课本P10中“表表1-1 1000ml1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成”，分析培养微生物的培养基的基本营养成分有哪些？配制培养基时，如何满足不同微生物的特殊需求？举例说明。自主学习课本P9-10，思考问题：微生物的基本培养技术课本P9-10(一)培养基的配制1.定义：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质2.作用：用以_微生物或积累其代谢物有 无 凝固剂(如琼脂)液体培养基液体培养基微生物的分离、鉴定、活菌计数扩大培养、工业生产3.种类：固体培养基固体培养基微生物微生物在在固体培养基固体培养基
5、表面生长，表面生长，可以形成肉眼可见的可以形成肉眼可见的菌落菌落营养物质生长繁殖培养、分离、鉴定、保存琼脂不提供琼脂不提供能量和营养能量和营养练习如果大肠杆菌培养基里不添加琼脂，大肠杆菌的生长情况是（）A正常生长 B无法存活C少数能存活 D无法判断琼脂不提供能量和营养琼脂不提供能量和营养A【注意】病毒为非细胞结构生物，只能在活细胞中营寄生生活，目前不能利用人工培养基来培养拓 展划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分目的用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂扩大培养、工业生产观察运动、分类、鉴定分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产成分明确分类、鉴定加入某种物质，促进目的微
6、生物生长；抑制其他微生物生长培养、分离出特定微生物加入指示剂或化学物质鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基天然培养基合成培养基鉴别培养基微生物的基本培养技术(一)培养基的配制4.培养基的营养成分：（1）基本成分：碳源无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-等有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸等自养微生物异养微生物碳源碳源功能：功能：构成细胞的物质和一些代谢产物构成细胞的物质和一些代谢产物;有机碳有机碳既是碳源又是既是碳源又是能源能源氮源无机氮源：N2、NH3、NH4、NO3-等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等氮源氮源功能：功能：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代
7、谢产物等主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等碳源、氮源、水、无机盐课本课本P10P10相关信息相关信息:来源于动物，含有来源于动物，含有糖糖、维维生素生素和和有机氮有机氮等营养物质等营养物质课本P10大本P8（1）基本成分：碳源无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-等有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸等氮源无机氮源：N2、NH3、NH4、NO3-等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等碳源、氮源、水、无机盐微生物的基本培养技术(一)培养基的配制4.培养基的营养成分：微生物微生物碳源碳源氮源氮源能源能源蓝细菌蓝细菌COCO2 2NHNH4 4、NONO3 3-等等光能光能硝化细菌硝化细
8、菌COCO2 2NHNH3 3NHNH3 3的氧化的氧化根瘤菌根瘤菌糖类等有机物糖类等有机物N N2 2有机物有机物【几种特殊微生物的营养和能量来源】【几种特殊微生物的营养和能量来源】课本P10大本P8不是所有微生物的培养基都需要加入碳源、氮源自养微生物可自养微生物可不添加有机碳源，不添加有机碳源，直接利用空气中的直接利用空气中的COCO2 2NHNH3 3(既是硝化细菌的既是硝化细菌的氮源氮源又是又是能源能源)固氮菌能利用固氮菌能利用空气中的空气中的N N2 2，不需要加入氮源不需要加入氮源微生物的基本培养技术课本P10(一)培养基的配制4.培养基的营养成分：（1）基本成分：碳源、氮源、水、
9、无机盐无机盐是细胞的组成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂等水良好的溶剂、维持生物大分子结构的稳定大本P8碳源无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-等有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸等碳源碳源功能：功能：构成细胞的物质和一些代谢产物构成细胞的物质和一些代谢产物;有机碳有机碳既是碳源又是既是碳源又是能源能源氮源无机氮源：N2、NH3、NH4、NO3-等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等氮源氮源功能：功能：主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等主要用于合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物等注意(做题注意积累)(2)有机碳源可以提供能量(如糖类)，无机碳源不能提供能量如自养型
10、微生物利用如自养型微生物利用COCO2 2，只是将其作为合成，只是将其作为合成(CH(CH2 2O)O)的原料，的原料，并非从其中得到能量并非从其中得到能量(3)有机氮源可以提供能量，有些无机氮源也能提供能量如氨即如氨即NHNH3 3可为硝化细菌提供能量和氮源可为硝化细菌提供能量和氮源蛋白胨既可以作为氮源也能提供能量蛋白胨既可以作为氮源也能提供能量(4)有些有机物既可以提供碳源，也可以提供氮源如如牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨(1)不是所有微生物的培养基都需要加入碳源、氮源如自养型微生物可以直接利用如自养型微生物可以直接利用空气中空气中的的COCO2 2，故培养时可以不加碳源，故培养时可以不加碳
11、源 固氮菌可以直接利用固氮菌可以直接利用空气中空气中的的N N2 2，故培养时可以不加氮源，故培养时可以不加氮源练习关于微生物的营养，下列说法正确的是 A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B.凡是碳源都能提供能量 C.无机氮源也可能提供能量 D.牛肉膏蛋白胨培养基属于合成培养基，营养全面无机碳源不能提供能量牛肉膏、蛋白胨如NH3 可为硝化细菌提供能量和氮源牛肉膏蛋白胨培养基属于天然培养基，营养全面C微生物的基本培养技术(一)培养基的配制4.培养基的营养成分：（1）基本成分：碳源、氮源、水、无机盐 在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微
12、生物生长对还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质以及以及O O2 2的需求的需求特殊营养物质：特殊营养物质：维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等等(生长因子生长因子)（如牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有维生素等）（2）培养基的特殊需求：微生物例子微生物例子 培养基需要的特殊物质或条件培养基需要的特殊物质或条件 乳酸杆菌乳酸杆菌霉菌霉菌细菌细菌厌氧微生物厌氧微生物添加维生素添加维生素调至酸性调至酸性调至中性或弱碱性调至中性或弱碱性提供无氧的条件提供无氧的条件课本P10大本P8【几种特殊微生物对特殊营养条件的需求】【几种特殊微生物对特殊营养条件的需求】练习对不同微生
13、物的培养过程中正确的是()A.细菌培养时将pH 调至酸性B.霉菌培养时将pH调至中性或微酸性C.培养厌氧微生物时需要提供无氧环境条件D.培养乳酸杆菌时在培养基中不需要添加维生素C练习微生物的培养需要配制培养基，以下叙述合理的是()。A.培养基中都含有碳源、氮源、水、无机盐 B.因成分不同，培养基可分为固体培养基和液体培养基 C.培养基中的氮源能提供氮元素，但不能作为能源物质 D.筛选自养型微生物时，培养基中不需要加碳源按物理性质不同划分NH3、蛋白胨等D练习下表记录了某培养基的配方，下列叙述错误的是()成分 蒸馏水青霉素含量 30 30 g g定容至 1000 1000 mLmL0.1万单位A
14、.根据物理性质划分，该培养基属于液体培养基B.该培养基不能用于培养大肠杆菌C.根据培养基的配方可知，该培养基培养的是异养型微生物D.固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基正确，一定浓度的抗生素会杀死细菌，如青霉素会杀死大肠杆菌固体培养基去除凝固剂D微生物的基本培养技术(二)无菌技术课本P10-11(1)(1)获得纯净培养物的获得纯净培养物的关键关键？防止杂菌污染无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括消毒和灭菌消毒消毒(2)(2)无菌技术除了用来无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，外，还有什么目的？还有什么目的？(课本课本P
15、15P15旁栏思考旁栏思考)还能有效避免操作者自身被微生物感染2.灭菌：是指使用是指使用 的理化方法杀死物体内外的理化方法杀死物体内外_的的 微生物，包括微生物，包括芽孢和孢子微生物的基本培养技术(二)无菌技术课本P10-111.消毒：是指使用较为是指使用较为 的物理、化学或生物等方法的物理、化学或生物等方法杀死物体表面杀死物体表面 或或内内部部一部分一部分微微生物生物对象：操作的空间、操作者的衣着和手对象：操作的空间、操作者的衣着和手对象：用于培养微生物的器皿、接种用具和培养基对象：用于培养微生物的器皿、接种用具和培养基温和强烈所有培养皿培养皿接种环接种环其他注意：其他注意：实验操作时应避免
16、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。与周围的物品相接触。为了避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在为了避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台超净工作台并在并在酒精灯火焰酒精灯火焰附近进行。附近进行。获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染了解一下指某些细菌指某些细菌(如芽孢杆菌等如芽孢杆菌等)在一定条件下细胞质高度浓缩脱在一定条件下细胞质高度浓缩脱水所形成的一种水所形成的一种抗逆性很强抗逆性很强的球形或椭圆形的的球形或椭圆形的休眠体休眠体。芽孢的壁很厚，对芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的等恶劣的环境
17、有很强的抵抗力。如某些细菌的芽孢煮沸抵抗力。如某些细菌的芽孢煮沸3 3小时才死亡。每个细菌仅形成小时才死亡。每个细菌仅形成一个芽孢。一个芽孢。指细菌、真菌、原生动物和植物等产生的一种有繁殖作用指细菌、真菌、原生动物和植物等产生的一种有繁殖作用的的无性生殖细胞无性生殖细胞。正常情况下不需要两两结合就可以由单个细胞正常情况下不需要两两结合就可以由单个细胞直接发育成直接发育成新个体新个体。芽孢芽孢孢子孢子(二)无菌技术类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物强烈的理化方法，杀死所有微生物(包括芽孢、孢子)煮沸消毒法日常生活100 煮沸56 min巴氏消毒法不耐高温的液体6265
18、煮30 min或80-90 煮30s-1 min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30 min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160170 加热23h湿热灭菌培养基等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121,1530 min接种室、实验室、超净工作台课本P11 大本P9微生物的基本培养技术常见的常用的消毒方法课本P11煮沸消毒100煮沸5-6min巴氏消毒70-75 30min /8015min化学药剂
19、消毒酒精、氯气等消毒剂紫外线消毒紫外线照射30min化学药剂消毒大本P9微生物的基本培养技术常见的常用的灭菌方法课本P11 大本P9灼烧灭菌：常用于涂布器、接种环、接种针、试管口等的灭菌干热灭菌：160-170下加热1-2h常用于玻璃器皿(如：吸管、培养皿等)和金属器具微生物的基本培养技术常见的常用的灭菌方法课本P11 大本P9湿热灭菌：利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方式对象：培养基培养基等等原理：高温蒸汽破坏微生物的蛋白质、核酸等结构使其变性高温蒸汽破坏微生物的蛋白质、核酸等结构使其变性优点：操作简便，效果可靠，操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热可以杀灭所有的生物，包
20、括最耐热的某些微生物的休眠体。的某些微生物的休眠体。注意注意:要将其中的冷空气彻底排尽，否则会导致锅达不到相应的温度，灭菌不彻底要将其中的冷空气彻底排尽，否则会导致锅达不到相应的温度，灭菌不彻底其中高压蒸汽灭菌效果最好(100kPa、121 15-30min)练习以下物品所采用的灭菌或消毒方法依次是培养基培养基培养皿培养皿接种环接种环实验操作者的双手实验操作者的双手实验室实验室牛奶牛奶高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌干热灭菌干热灭菌灼烧灭菌灼烧灭菌化学消毒（酒精）化学消毒（酒精）紫外线消毒紫外线消毒巴氏消毒法巴氏消毒法练习下列对灭菌和消毒的理解不正确的是（）A灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和
21、孢子B消毒是指杀死物体表面或内部的部分微生物C消毒和灭菌都是采用物理方法杀灭微生物D常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等消毒和灭菌都是采用物理或化学的方法杀灭微生物C练习生产、生活和科研实验中常用到无菌技术。下列相关叙述不正确的是()A.腌制泡菜时，泡菜坛内缺氧、呈酸性的环境不利于杂菌生长 B.实验室中的玻璃吸管、培养基等均可以用干热灭菌法处理 C.生活中用巴氏消毒法处理牛奶既可消毒，又基本不会破坏牛奶中的营养成分 D.湿热灭菌是一种利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法B培养基要用湿热灭菌法培养基要用湿热灭菌法(高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌)问题1：微生物结构简单、形体微小，眼睛
22、看不到，若想看某种微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想看某种纯净的微生物纯净的微生物,当我们掌握了培养基配制和无菌技术后，我们接下来该如何操作？当我们掌握了培养基配制和无菌技术后，我们接下来该如何操作？小结培养基的营养物质培养基的营养物质培养基培养基无菌技术无菌技术巴氏消毒、化学药剂消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒、煮沸消毒、紫外线消毒等煮沸消毒、紫外线消毒等微微生生物物的的基基本本培培养养技技术术培养基的类型培养基的类型按物理性质划分按物理性质划分按功能划分按功能划分按组成成分划分按组成成分划分基本成分基本成分:碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐特殊需求特殊需求:维生素维生素(如
23、乳酸杆菌如乳酸杆菌)、碱基等、碱基等湿热灭菌湿热灭菌干热灭菌干热灭菌灼烧灭菌灼烧灭菌常用的消毒方法：常用的消毒方法：常用的灭菌方法常用的灭菌方法(高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌:如培养基如培养基)微生物的纯培养课本P11-13 大本P10(一)培养物、纯培养物、纯培养概念辨析：1.培养物：接种于接种于 内，在内，在合适条件合适条件下形成的含下形成的含 的群体的群体2.纯培养物：由由 所获得的微生物群体所获得的微生物群体3.纯培养：获得纯培养物的获得纯培养物的过程过程就是纯培养就是纯培养(二)纯培养的步骤：配制培养基灭菌倒平板接种和分离培养培养基特定种类微生物单一个体繁殖*单菌落单菌落一般是由一般是由
24、单个微生物繁殖单个微生物繁殖形成的纯培养物形成的纯培养物(课本课本P12)P12)探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P101.培养原理：采用采用平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法将单个微生物分散在将单个微生物分散在固体培养基固体培养基上，上，之后得到的之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。微生物群微生物群分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞单个菌落单个菌落繁殖繁殖探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P10 称取去皮马铃薯称取去皮马铃薯200g200g，切成小块，加水，切成小块，加水1000ml1000ml
25、，加热煮沸至马铃薯软烂，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤用纱布过滤。向滤液中加入。向滤液中加入20g20g葡萄糖葡萄糖、151520g20g琼脂琼脂，用蒸馏水定容至，用蒸馏水定容至1000ml1000ml马铃薯块去皮、切块加水(1000mL)煮沸纱布过滤滤液加葡萄糖/蔗糖(20g)加琼脂加水定容(1000mL)酵母菌培养基马铃薯(200g)2.方法步骤：(1)制备培养基配制配制培养基培养基(先调PH，再灭菌)2.方法步骤：(1)制备培养基灭菌灭菌探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P10 将配制好的培养基培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅高压
26、蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121的条件下，灭菌1530min。将58套培养皿培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱干热灭菌箱内，在160170灭菌2h。培养基:包好再高压蒸汽灭菌（高压蒸汽锅,121,100kPa,15-30分钟）培养皿:包好再干热灭菌（干热灭菌箱,160-170下灭菌2h）2.方法步骤：(1)制备培养基倒平板倒平板探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P10待待培养基培养基冷却到冷却到5050左右左右时，在时，在酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近倒平板倒平板防止瓶口微生物污染培养基防止瓶口微生物污染培养基防止杂菌污染防止杂菌污染避免培养基表面的水分
27、过快挥发避免培养基表面的水分过快挥发防止皿盖上的冷凝水落入培养基，防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染造成污染倒平板注意事项：温度：50左右操作：在酒精灯火焰附近冷凝后平板倒置探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P101：培养基灭菌后，为什么需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？温度过高会烫手，且琼脂在温度过高会烫手，且琼脂在4444以下凝固以下凝固,若低于若低于5050不及时操作不及时操作,琼脂会凝固。琼脂会凝固。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2：在倒平板
28、的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？4：怎么确定所倒平板未被杂菌污染？将所倒平板放入将所倒平板放入37 37 的的恒温箱中培养恒温箱中培养12241224h h，观察是否有菌落存在以确定是，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。否被污染或灭菌是否彻底。避免培养基表面的水分过快挥发；防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染避免培养基表面的水分过快挥发；防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染不能不能,防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。3：平板冷凝后，为什么要将
29、平板倒置？练习【检测】a.请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程:。b.乙中的灭菌方法是 。c.丁中的操作需要等待 才能进行。丙乙甲丁灼烧灭菌平板冷却凝固后练习下列关于倒平板的叙述，错误的是()A.待培养基冷却至50 左右时倒平板 B.倒平板整个过程应在酒精灯火焰旁进行 C.完全打开培养皿皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 D.为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置C2.方法步骤：(2)接种和分离酵母菌探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P10微生物群微生物群连续划线连续划线分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞单个菌落单个菌落繁殖繁殖 通过接种环在固体培
30、养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。连续划线法分区划线法2.方法步骤：(2)接种和分离酵母菌探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P10灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖试管口通过火焰，并塞上棉塞 在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞 试管口通过火焰 在火焰附近用接种环蘸取一环菌液 灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线不能划破培养基不能划破培养基，一旦划破，一旦划破，会造成划线不
31、均会造成划线不均匀，匀，难以达到分离单菌落的目的；存留在划破难以达到分离单菌落的目的；存留在划破处的处的单个细胞无法形成规矩的菌落，单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落着划破处生长，会形成一个条状的菌落微生物群微生物群连续划线连续划线分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞单个菌落单个菌落繁殖繁殖第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌分区划线法12345(1)(1)接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液,但要在培养基不但要在培养基不同位置同位置连续划线多次连续划线多次(2)(2)每次每次划线前划线前接种环进行灭菌接种环进行灭菌
32、(3)(3)划线时最后一区和第一区不能划线时最后一区和第一区不能首尾相接首尾相接(4)(4)划线结束后划线结束后,培养皿培养皿倒置培养倒置培养(5)(5)不能划破培养基不能划破培养基探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P101：在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种以免接种环温度太高，杀死菌种2：在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？从上一次划线的末端开始划线，能使细菌的数目随着划线次数的增加而从上一次划线的末端开始划线，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落逐渐减少，最终能
33、得到由单个细菌繁殖而来的菌落(将聚集的菌体逐步分散减少以便得到单个菌落将聚集的菌体逐步分散减少以便得到单个菌落)3：为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2.方法步骤：(2)接种和分离酵母菌探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P103：为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？第一次操作每次划线之前划线结束目的杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少杀死接种环上原有的微生物杀死接种环上残存的菌种，避免菌落污染
34、环境和感染操作者2.方法步骤：(2)接种和分离酵母菌探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P103 3个划线平板（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）1 1个不划线平板放入28恒温箱中培养24h48h(重复组的作用重复组的作用:增强实验的说服力与准确性。增强实验的说服力与准确性。若重复组的结果不一致，则意味着操作有误，若重复组的结果不一致，则意味着操作有误，需要重新实验需要重新实验)使用后的培养基在使用后的培养基在丢弃前丢弃前一定要进行一定要进行灭菌灭菌处理，以免处理，以免污染环境污染环境2.方法步骤：(3)培养酵母菌探究实践 酵母菌的纯培养课本P12-13 大本P101：未
35、接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？在未接种的培养基表面应该没有菌落生长在未接种的培养基表面应该没有菌落生长,如果有如果有,说明培养基被杂菌污染了说明培养基被杂菌污染了2：在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的颜色、形状、大小是否一致，如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析可能是哪些原因引起的吗？如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的规范等原因引起的2.方法步骤：(3)培养酵母菌练习下列为几位同学描述的平板划线接种法的划线方式，其中正确的是（）A.B.C.D.C
36、下图为微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5，下列叙述正确的是()练习C A.在每一区域内划线时接种环上的菌种直接来源于菌液 B.划线操作时应在酒精灯火焰旁边打开皿盖放在桌面上，划线接种 C.每次划线只能从上一次划线的末端开始，才能确保菌种逐步稀释以得到单菌落 D.第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数练习C下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是()A.步骤操作时，倒好平板后应立即将其倒置 B.步骤中将接种环在火焰上灼烧后迅速蘸取菌液进行平板划线 C.步骤中多次划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落小结酵酵母母菌菌的的纯纯培培养养1.1
37、.制备培养基制备培养基配制培养基配制培养基灭菌灭菌倒平板倒平板培养基：培养基：培养皿：培养皿：用用接种环接种环在在固体培养基固体培养基上用上用平板划线法平板划线法接种接种平板平板倒置倒置，放入，放入2828左右的恒温培养箱培养左右的恒温培养箱培养2.2.接种和分离酵母菌接种和分离酵母菌3.3.培养酵母菌培养酵母菌(在酒精灯火焰附近操作在酒精灯火焰附近操作)(营养协调、营养协调、pHpH适宜适宜先调先调pHpH再灭菌再灭菌)湿热灭菌湿热灭菌(高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅)干热灭菌干热灭菌(干热灭菌锅干热灭菌锅)评估论点的可信程度评估论点的可信程度 所谓“酵素”，就是“酶”的另一种说法。“酵素”制
38、作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。这样制作的“酵素”中可能有糖类(包括-些简单的糖和膳食纤维等)、蛋白质(包括多种酶)、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的营养物质，其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。因此，“吃水果酵素可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力”的论点值得怀疑。课本P14练习一、概念检测1.微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。(1)培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。()(2)消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。()(3)微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。(
39、)2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低温储存干制、腌制、低温储存等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；低温则是通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。课本P14练习课本P14二、拓展应用1.某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入 37恒温培养箱中培养24 h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析冋答下列问题。(1)这
40、个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有_。培养皿和培养基(2)“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？接种(3)从实验结果来看，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？通过实验结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。练习课本P14二、拓展应用2.某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210 r/min、230 r/min和 250r/min，培养
41、时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。(1)摇床转速不同，意味着培养条件有什么不同？意味着培养液中意味着培养液中O O2 2含量不同，转速越高，含量不同，转速越高，O O2 2含量越高含量越高(2)从图中数据你可以得出什么结论？其原因是什么？培养液中培养液中O O2 2含量越高，酵母菌种群密度越大含量越高，酵母菌种群密度越大(3)为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定？这时候已经达到了环境容纳量这时候已经达到了环境容纳量练习下表是某培养基的配方，分析回答：材料牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水用量5 g10 g5 g20 g定容至1 000 mL(1)根据培
42、养基的物理性质，该培养基属于哪类培养基，理由是什么？固体培养基。该培养基的配方中含有固体培养基。该培养基的配方中含有凝固剂琼脂凝固剂琼脂(2)该培养基中提供碳源和氮源的物质是什么？属于有机物还是无机物？为什么培养基需要氮源？牛肉膏和蛋白胨牛肉膏和蛋白胨提供碳源和氮源提供碳源和氮源；二者；二者均属于有机物；均属于有机物；培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质必需的培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质必需的(3)该培养基培养的微生物同化作用类型是_，理由是什么？异养型微生物，该微生物的碳源和氮源是有机物异养型微生物，该微生物的碳源和氮源是有机物(4)不同微生物所需的pH不同，培养
43、细菌时需要将pH调至 ；培养乳酸杆菌时要在培养基中添加 。中性或弱碱性中性或弱碱性维生素维生素补充(简单了解一下，清楚含义、分类即可)简单理解：“同化”就是把非己变成自己 “异化”正好相反把自己变成非己(1)同化作用：是指生物体把从外界环境中获取的营养物质转变成自身的组成物质或能量储存的过程。分为自养生物和异养生物。自养生物：能够利用无机物合成自身的有机物的生物属于自养生物。如蓝藻，硝化细菌，绿色植物等。异养生物：只能从外界摄取现成有机物的生物属于异养生物。如绝大多数动物、真菌等。(2)异化作用：是指机体将自身有机物分解成无机物归还到无机环境并释放能量的过程。异化作用的类型包括需氧型、厌氧型和兼性厌氧型。
