1、血清总蛋白（血清总蛋白（TPTP）测定）测定与线性范围试验与线性范围试验邹佳峻邹佳峻一、双缩脲法测定血清总蛋白（一、双缩脲法测定血清总蛋白（TPTP）二、线性范围试验二、线性范围试验1.1.实验目的：实验目的： 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理、方法掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理、方法 熟悉熟悉722722分光光度计的使用分光光度计的使用 了解了解TPTP测定的临床意义测定的临床意义一、一、双缩脲法测定血清总蛋白（双缩脲法测定血清总蛋白（TPTP）+ +CuCu2+2+ OHOH- -2.2.实验原理：实验原理：CO(NHCO(NH2 2) ) 2 2 + + CO(NH CO(NH2 2)
2、 ) 2 2缩合缩合HH2 2N-OC-NH-CO-NHN-OC-NH-CO-NH2 2紫红色化合物紫红色化合物（1）双缩脲反应：）双缩脲反应： OH OH- -蛋白质分子中的肽键蛋白质分子中的肽键 + + 铜离子铜离子 紫红色复合物紫红色复合物 （-CO-NH-CO-NH-） CuCu2 2+ + 紫色复合物在紫色复合物在540nm540nm波长有特定的吸收峰，波长有特定的吸收峰，其其颜色的深浅颜色的深浅（吸光度）与蛋白质的（吸光度）与蛋白质的浓度浓度在在一定范围内一定范围内成正比。成正比。 此反应和此反应和2 2个尿素分子缩合后生成的双缩脲个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与在碱性溶
3、液中与CuCu2 2+ +作用生成紫红色复合物作用生成紫红色复合物的反应相似，故称双缩脲反应。的反应相似，故称双缩脲反应。（2 2）双缩脲法测定）双缩脲法测定TP的原理的原理 3. 3.实验材料：实验材料： 试剂：试剂：（1 1）商品双缩脲试剂）商品双缩脲试剂 （2 2）自配双缩脲试剂）自配双缩脲试剂 （3 3）血清样品）血清样品 （4 4）总蛋白标准液（）总蛋白标准液（70.0g/L70.0g/L） 器材：器材：试管、加样枪、吸量管试管、加样枪、吸量管 、722722分光光分光光度计、水浴箱度计、水浴箱4.4.实验方法：实验方法：取取5 5支试管，按下表操作：支试管，按下表操作：另取另取5
4、5支试管，按下表操作：支试管，按下表操作：5.5.实验结果：实验结果： 参考值：参考值： 6082g/L6082g/L 结合实验数据分析结果进行讨论结合实验数据分析结果进行讨论, ,用用SPSS13.0SPSS13.0分析两组数据间有无统计学意义（配对分析两组数据间有无统计学意义（配对t t检检验）。验）。 6.6.总蛋白测定的临床意义：总蛋白测定的临床意义：（1 1）血清总蛋白浓度增高见于：）血清总蛋白浓度增高见于： a.a.蛋白质合成增加（如多发性骨髓瘤）；蛋白质合成增加（如多发性骨髓瘤）； b.b.血浆浓缩（如呕吐、严重腹泻、高烧）。血浆浓缩（如呕吐、严重腹泻、高烧）。（2 2）血清总蛋
5、白浓度降低见于：）血清总蛋白浓度降低见于： a.a.蛋白质合成障碍（如肝严重受损）；蛋白质合成障碍（如肝严重受损）； b.b.蛋白质丢失增加（如严重烧伤、肾病综合蛋白质丢失增加（如严重烧伤、肾病综合征）；征）； c.c.营养不良或消耗增加（如低蛋白饮食、严营养不良或消耗增加（如低蛋白饮食、严重结核病、甲亢）；重结核病、甲亢）； d.d.血液稀释。血液稀释。 配对样本是指配对样本是指同一样本同一样本进行两次测试所获得进行两次测试所获得的两组数据，或对的两组数据，或对两个完全相同两个完全相同的样本在不的样本在不同条件下进行测试所得的两组数据。同条件下进行测试所得的两组数据。 SPSS13.0SPS
6、S13.0操作：操作：1 1、录入数据；、录入数据；2 2、选择菜单：、选择菜单：Analyze Compare Analyze Compare Means PariedMeans Paried-Sample T Test-Sample T Test3 3、生成统计结果，查看、生成统计结果，查看P“P“sig.(2-tailde)”sig.(2-tailde)”（值（值（P P值值0.050.05，可以认为两种方法的结，可以认为两种方法的结果差别无显著性差异；果差别无显著性差异；P0.05PRegression Linear 8 8、选择自变量选择自变量（X X），），因变量因变量（Y Y）：将将“因变量因变量”选入选入“Dependent”Dependent”下框内，下框内，“自变量自变量”选入选入“Independent”Independent”下框，点击下框，点击“OK”OK” 9 9、生成分析结果生成分析结果“Regression”Regression”并标注并标注 ：
