1、六、基因工程菌的稳定性及生长代谢的特点六、基因工程菌的稳定性及生长代谢的特点（一）基因工程菌质粒的不稳定性（一）基因工程菌质粒的不稳定性（二）质粒稳定性的分析方法（二）质粒稳定性的分析方法（三）质粒不稳定的原因（三）质粒不稳定的原因（四）提高质粒稳定性的方法（四）提高质粒稳定性的方法（五）基因工程菌的生长速率（五）基因工程菌的生长速率（六）蛋白质产量（六）蛋白质产量/ /菌体数量比菌体数量比（七）能量供应与菌体生长的关系（七）能量供应与菌体生长的关系（八）小分子前体、催化剂供应与菌体生长的关系（八）小分子前体、催化剂供应与菌体生长的关系（一）基因工程菌质粒的不稳定性（一）基因工程菌质粒的不稳定
2、性n基因工程菌在传代过程中常出现质粒不基因工程菌在传代过程中常出现质粒不稳定的现象，有稳定的现象，有分裂不稳定分裂不稳定和和结构不稳结构不稳定。定。 由于质粒不稳定导致的质粒丢失菌与含有由于质粒不稳定导致的质粒丢失菌与含有质粒的菌之间质粒的菌之间生产速率生产速率不一致导致可能不一致导致可能的生长优势，进而能在培养基中逐渐取的生长优势，进而能在培养基中逐渐取代含质粒菌成为优势菌群，从而减少基代含质粒菌成为优势菌群，从而减少基因表达的产率，因表达的产率，导致基因工程菌在生产导致基因工程菌在生产过程中出现不稳定现象过程中出现不稳定现象。 （二）质粒稳定性的分析方法二）质粒稳定性的分析方法（1）将工程
3、菌培养液样品适当稀释，均匀）将工程菌培养液样品适当稀释，均匀涂于涂于不含抗生素标记不含抗生素标记的平板培养基，培养的平板培养基，培养10-12h，统计所长出的，统计所长出的菌落数菌落数A；（2）然后随机挑选）然后随机挑选100个菌落，接种到含有个菌落，接种到含有抗生素标记的平板培养基，培养抗生素标记的平板培养基，培养10-12h，统计所长出的统计所长出的菌落数菌落数B；（3）计算）计算B/A的比值的比值。该比值能反映质粒的。该比值能反映质粒的稳定性稳定性,称为称为稳定性稳定性(stability,ST) （三）质粒不稳定的原因（三）质粒不稳定的原因1 1、分裂不稳定、分裂不稳定: :指基因工程
4、菌在分裂的子代菌指基因工程菌在分裂的子代菌体中，出现一定比例不含质粒的现象。它主体中，出现一定比例不含质粒的现象。它主要与要与2 2个因素有关：个因素有关：（1 1）工程菌产生丢失质粒的概率，）工程菌产生丢失质粒的概率，拷贝量拷贝量低低的工程细菌，它所产生的工程细菌，它所产生不含质粒的细菌变不含质粒的细菌变异株异株和和概率较大概率较大。 （2 2）丢失质粒的细菌、含有质粒的工程菌）丢失质粒的细菌、含有质粒的工程菌之间的之间的竞争力大小。竞争力大小。2 2、结构不稳定、结构不稳定: :指外源基因从质粒上指外源基因从质粒上丢失丢失、或、或者发生者发生碱基重排、缺失现象碱基重排、缺失现象，最终导致工
5、程，最终导致工程菌性能改变的现象。菌性能改变的现象。（四）提高质粒稳定性的方法（四）提高质粒稳定性的方法1 1、选择合适的宿主菌、选择合适的宿主菌2 2、选择合适的载体、选择合适的载体3 3、选择性压力、选择性压力4 4、分阶段培养、分阶段培养5 5、控制培养条件、控制培养条件6 6、固定化、固定化1 1、选择合适的宿主菌、选择合适的宿主菌 宿主菌的遗传特性对质粒的稳定宿主菌的遗传特性对质粒的稳定性影响很大。性影响很大。2 2、选择合适的载体、选择合适的载体 含低拷贝质粒的菌含低拷贝质粒的菌产生不含质产生不含质粒的子代菌频率粒的子代菌频率大于大于含高拷贝含高拷贝质粒的菌。质粒的菌。3 3、选择
6、性压力、选择性压力 因为丢失质粒因为丢失质粒的细菌在含的的细菌在含的抗生素的培养抗生素的培养基中不能正常基中不能正常生长。生长。 所以可通过加所以可通过加入抗生素来入抗生素来抑抑制制质粒丢失的质粒丢失的细菌的生长。细菌的生长。4 4、分阶段培养、分阶段培养 工程菌的培养一般分为工程菌的培养一般分为2 2个阶段：个阶段：（1 1）第一阶段）第一阶段: :先使菌体生长至一定先使菌体生长至一定密度密度。（2 2）第二阶段）第二阶段: :开始开始诱导诱导外源基因的表达。外源基因的表达。 由于第一阶段外源基因没有表达，减少了由于第一阶段外源基因没有表达，减少了丢失质粒的细菌的产生概率，也就增加了丢失质粒
7、的细菌的产生概率，也就增加了工程菌的工程菌的稳定性稳定性。5 5、控制培养条件、控制培养条件通过温度、通过温度、pH值、培养基组分、溶解氧的值、培养基组分、溶解氧的综合调节措施综合调节措施通过以下方法可以提高质粒的稳定性。通过以下方法可以提高质粒的稳定性。（1）间歇间歇送氧送氧（2）改变）改变稀释速率稀释速率6 6、固定化、固定化固定化可提高基因重组大肠杆菌的稳定性。固定化可提高基因重组大肠杆菌的稳定性。（五）基因工程菌的生长速率（五）基因工程菌的生长速率 细菌菌体生长是核酸和蛋白质的综合表现，细菌菌体生长是核酸和蛋白质的综合表现，通常用通常用比生长速率比生长速率表征。表征。 比生长速率比生长
8、速率:表征微生物生长速率的参数。表征微生物生长速率的参数。 菌体生长菌体生长对于提高质粒的稳定性、减少代对于提高质粒的稳定性、减少代谢副产物的积累、提高外源蛋白质的产量谢副产物的积累、提高外源蛋白质的产量都有重要的意义。都有重要的意义。 基因工程菌的生长速率可通过基因工程菌的生长速率可通过选用不同的选用不同的碳源碳源、控制补料量控制补料量、稀释速率稀释速率的方法来加的方法来加以控制。以控制。（六）蛋白质产量（六）蛋白质产量/ /菌体数量比菌体数量比 在基因工程菌的发酵生产过程中，在基因工程菌的发酵生产过程中，蛋白质产量蛋白质产量/菌体数量比菌体数量比基本上是一个恒定值。基本上是一个恒定值。 细
9、菌生长速度快，其蛋白质合成的速度也相应细菌生长速度快，其蛋白质合成的速度也相应加快。加快。（七）能量供应与菌体生长的关系（七）能量供应与菌体生长的关系1 1、 Andersen Andersen 理论理论（1 1）AndersenAndersen等人通过实验发现，培养基中所能提等人通过实验发现，培养基中所能提供的最大能量决定着工程细菌的供的最大能量决定着工程细菌的最大生长速率最大生长速率。（2 2）当培养基提供的能量不足时，细菌往往会产生）当培养基提供的能量不足时，细菌往往会产生代谢副产物乙酸，而代谢副产物乙酸，而乙酸乙酸则会明显则会明显抑制细菌的生抑制细菌的生长长。其实质是由于三羧酸循环的供
10、能不足，导致。其实质是由于三羧酸循环的供能不足，导致部分乙酰辅酶部分乙酰辅酶A A转化成乙酸来供能。转化成乙酸来供能。2 2、改进方法、改进方法（1 1）适当）适当提高提高pHpH值值，可以减少乙酸的抑制作用。，可以减少乙酸的抑制作用。（2 2）分批选用不同的）分批选用不同的碳源碳源、控制补料速度控制补料速度、能在一、能在一定范围之内，控制细菌的过度生长，从而抑制乙定范围之内，控制细菌的过度生长，从而抑制乙酸的产生。酸的产生。（八）前体供应与菌体生长的关系（八）前体供应与菌体生长的关系1、工程菌的生长速率工程菌的生长速率往往往往低于低于未经克隆的未经克隆的原原始宿主细胞始宿主细胞2、外源基因的
11、大量表达外源基因的大量表达常常引起工程菌的常常引起工程菌的生生长停滞长停滞。这种停滞与能量供应无关。这种停滞与能量供应无关。3、在基础培养基中加入氨基酸，能使细菌的、在基础培养基中加入氨基酸，能使细菌的生长速率提高。生长速率提高。4、当合成材料的前体物供应不足时，工程细、当合成材料的前体物供应不足时，工程细菌就会产生菌就会产生“严紧反应严紧反应”。当氨酰当氨酰tRNA不不足时，核糖体就会在密码子上停留，并合成足时，核糖体就会在密码子上停留，并合成ppGpp的魔点蛋白的魔点蛋白，这是一种调控因子，会，这是一种调控因子，会导致导致RNA聚合酶在模板上移动的停顿。聚合酶在模板上移动的停顿。七、基因工
12、程菌中试七、基因工程菌中试 中试中试: :生物技术药物与其他药物一样，从实生物技术药物与其他药物一样，从实验室研究到产业化必须经过中间放大试验验室研究到产业化必须经过中间放大试验的系列工艺研究和验证，这种中间放大试的系列工艺研究和验证，这种中间放大试验简称之。验简称之。 中试放大的目的中试放大的目的是验证、复审和完善实是验证、复审和完善实验室工艺所研究确定的反应条件，及研验室工艺所研究确定的反应条件，及研究选定的工业化生产设备结构、材质、究选定的工业化生产设备结构、材质、安装和车间布置等，为正式生产提供数安装和车间布置等，为正式生产提供数据，以及物质量和消耗等。据，以及物质量和消耗等。n药物从
13、实验室的微量制备到工厂的产业药物从实验室的微量制备到工厂的产业化制备，化制备，并不是简单的数量级的线性放并不是简单的数量级的线性放大关系大关系，而是各种研究技术的系统集成而是各种研究技术的系统集成和放大优化。和放大优化。n中试研究的理想状况是中试研究的理想状况是工艺稳定工艺稳定，工艺工艺规模同等条件放大规模同等条件放大，使设计的生产批量，使设计的生产批量和成本符合使用要求。和成本符合使用要求。基因工程菌中试需考虑以下几方面：基因工程菌中试需考虑以下几方面：1 1 工程菌的选择工程菌的选择2 2 反应器的设计反应器的设计3 3 发酵培养基的组成发酵培养基的组成4 4 工艺最佳化与参数监测控制工艺
14、最佳化与参数监测控制5 5 计算机应用计算机应用1 1 工程菌的选择工程菌的选择能用基因重组技术获得能用基因重组技术获得高产潜力高产潜力以工业原料为培养基以工业原料为培养基生产工艺能用一般的工业生产经验生产工艺能用一般的工业生产经验产生和分泌的蛋白质不致病、无毒性、能安全生产。产生和分泌的蛋白质不致病、无毒性、能安全生产。代谢能控制代谢能控制2 2 反应器的设计反应器的设计 反应器（发酵罐）的设计应符合生物反应反应器（发酵罐）的设计应符合生物反应与化学工程需要，因此在设计前应取得与化学工程需要，因此在设计前应取得5 5 种生物数据：种生物数据：培养细胞系特性培养细胞系特性细胞生长率细胞生长率发
15、酵罐消毒方法发酵罐消毒方法温度、溶氧、二氧化碳、温度、溶氧、二氧化碳、pHpH值、代谢产物值、代谢产物后处理效果后处理效果3 3 发酵培养基的组成发酵培养基的组成培养基作用培养基作用: : 提供化学元素提供化学元素, ,如碳、氮、氧、氢、磷、微量元素如碳、氮、氧、氢、磷、微量元素 提供特殊的营养源，氨基酸、维生素提供特殊的营养源，氨基酸、维生素 提供能源，如葡萄糖提供能源，如葡萄糖 控制代谢控制代谢4 4 工艺最佳化与参数监测控制工艺最佳化与参数监测控制 工艺最佳化：工艺最佳化： 最快周期、最高产量、最好质量、最低消耗、最大安最快周期、最高产量、最好质量、最低消耗、最大安全、最周全的废物处理效
16、果、最佳化速度与最低失败全、最周全的废物处理效果、最佳化速度与最低失败率的综合指标。率的综合指标。 参数监测控制参数监测控制： 生物反应中，有生物反应中，有4种参数需监测：种参数需监测： 主要参数主要参数：pH值、温度、溶氧、二氧化碳值、温度、溶氧、二氧化碳 生物量生物量：浑浊度、细胞组分、总氮量及菌丝干重：浑浊度、细胞组分、总氮量及菌丝干重 碳源碳源：糖、有机酸、乙醇、淀粉、脂质：糖、有机酸、乙醇、淀粉、脂质 产品产品 5 5 计算机应用计算机应用热电耦测量热电耦测量-温度温度离子敏感电极离子敏感电极-元素元素氧化还原电极氧化还原电极-还原电位还原电位热量计热量计-热平衡热平衡最终目标：最终
17、目标： 工艺最佳化工艺最佳化、产品、产品产量与质量产量与质量不断提高、不断提高、原材料与能源原材料与能源消耗不断下降消耗不断下降、成本降低成本降低。 经计算机计算，模拟出一个经计算机计算，模拟出一个高质高质、高产高产、低成本低成本的生产工艺最佳化的控制微生物的的生产工艺最佳化的控制微生物的数学公式。数学公式。八、基因工程菌的扩增和发酵生产八、基因工程菌的扩增和发酵生产（一）基因工程菌培养的程序（一）基因工程菌培养的程序（二）基因工程菌的培养方式（二）基因工程菌的培养方式（三）影响基因工程菌培养的各种因素分析（三）影响基因工程菌培养的各种因素分析（四）基因工程菌的培养设备（四）基因工程菌的培养设
18、备-发酵罐发酵罐（五）基因工程菌发酵工艺的优化（五）基因工程菌发酵工艺的优化（一）基因工程菌培养的程序（一）基因工程菌培养的程序 摇瓶操作摇瓶操作：了解工了解工程菌生长的基础条件，程菌生长的基础条件，如温度、如温度、pHpH、培养基、培养基各种组分以及碳氮比，各种组分以及碳氮比，分析表达产物的合成、分析表达产物的合成、积累对受体细胞的影积累对受体细胞的影响；响； 培养罐操作培养罐操作：确定确定培养参数和控制的方培养参数和控制的方案和顺序。案和顺序。（二）基因工程菌的培养方式（二）基因工程菌的培养方式1 1、补料分批培养、补料分批培养2 2、连续培养、连续培养3 3、透析培养、透析培养4 4、固
19、定化培养、固定化培养1 1、补料分批培养、补料分批培养 将种子接入发酵反应器进行培养，经过一段将种子接入发酵反应器进行培养，经过一段时间后，间歇式或连续地时间后，间歇式或连续地补加新鲜培养基补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的方法。使菌体进一步生长的方法。 其目的是创造一个良好的微生物环境，其目的是创造一个良好的微生物环境，延长延长菌体的对数生长期菌体的对数生长期，来获得，来获得高密度的菌体总高密度的菌体总量量。2 2、连续培养、连续培养 将种子接入发酵反应器中，搅拌式培养达到将种子接入发酵反应器中，搅拌式培养达到一定的菌体浓度后，同时进行进料、出料操一定的菌体浓度后，同时进行进料、出料操作，通
20、过控制一定的营养物稀释比率，来进作，通过控制一定的营养物稀释比率，来进行行不间断式培养不间断式培养的培养方式。的培养方式。 连续培养利于保持连续培养利于保持生产环境的恒定生产环境的恒定，利于控，利于控制制菌体的生长速率。菌体的生长速率。 但是由于基因工程菌的不稳定性，导致连续但是由于基因工程菌的不稳定性，导致连续培养比较困难。培养比较困难。3 3、透析培养、透析培养 透析培养透析培养是利用膜的半透性原理，使得代谢是利用膜的半透性原理，使得代谢产物和培养基分开，通过去除培养液中的代产物和培养基分开，通过去除培养液中的代谢产物的方法来谢产物的方法来消除代谢产物对工程菌的不消除代谢产物对工程菌的不良
21、影响良影响。 透析装置是用半透膜将发酵器隔成两半，形透析装置是用半透膜将发酵器隔成两半，形成发酵液区和透析液区，通过透析来及时移成发酵液区和透析液区，通过透析来及时移去合成产物。去合成产物。 半透膜的种类、孔径、面积、发酵液和透析半透膜的种类、孔径、面积、发酵液和透析液的比例、透析液的组成、循环流速、培养液的比例、透析液的组成、循环流速、培养持续时间等因素会影响产物得率。持续时间等因素会影响产物得率。4 4、固定化培养、固定化培养 为了维持质粒的稳定为了维持质粒的稳定性，将性，将固定化技术固定化技术和和基因工程菌基因工程菌结合起来，结合起来，进行固定化式连续培进行固定化式连续培养，有利于提高生
22、产养，有利于提高生产效率。效率。（三）影响基因工程菌培养的各种因素（三）影响基因工程菌培养的各种因素 基因工程菌基因工程菌 传统微生物传统微生物生物材料生物材料含外源重组基因含外源重组基因 不含外源重组基因不含外源重组基因发酵工艺发酵工艺使外源基因高效表达使外源基因高效表达 使自身基因表达使自身基因表达目的产物目的产物 产生外源蛋白质产生外源蛋白质 产生自身的代谢产生自身的代谢1 1、培养基的影响、培养基的影响 4 4、溶解氧的影响、溶解氧的影响2 2、接种量的影响、接种量的影响 5 5、诱导时机的影响、诱导时机的影响3 3、温度的影响、温度的影响 6 6、PHPH值的影响值的影响1 1、培养
23、基的影响、培养基的影响（1 1）常用碳源：葡萄糖、甘油、甘露糖、果）常用碳源：葡萄糖、甘油、甘露糖、果糖。糖。（2 2）常用氮源：酵母提取物、蛋白胨、酪蛋）常用氮源：酵母提取物、蛋白胨、酪蛋白水解物、玉米浆、硫酸铵、硝酸铵、氯化白水解物、玉米浆、硫酸铵、硝酸铵、氯化铵。铵。（3 3）其它组份：无机盐、微量元素、维生素、）其它组份：无机盐、微量元素、维生素、生物素。生物素。（4 4）无机磷在许多初级代谢的酶促反应中是）无机磷在许多初级代谢的酶促反应中是一个效应因子。一个效应因子。2、接种量的影响、接种量的影响 接种量接种量是指所移入的种子液体量与培养液体是指所移入的种子液体量与培养液体量的比例，
24、它的大小会影响发酵物的产量量的比例，它的大小会影响发酵物的产量和发酵周期。和发酵周期。（1）接种量小，菌体生长延迟，不利于外源）接种量小，菌体生长延迟，不利于外源基因的表达。基因的表达。（2）接种量适中接种量适中，生产菌能够迅速占领整个，生产菌能够迅速占领整个培养环境，减少菌体污染的机会。培养环境，减少菌体污染的机会。（3）接种量过大，菌体生长过快，代谢产物）接种量过大，菌体生长过快，代谢产物积累过多，反而会抑制后期菌体的生长。积累过多，反而会抑制后期菌体的生长。 一般来说，一般来说，10-15%的接种量的接种量，菌体的延迟，菌体的延迟期短、菌群迅速繁衍、很快进入对数生长期短、菌群迅速繁衍、很
25、快进入对数生长期，适用于个源基因的表达。期，适用于个源基因的表达。3、温度的影响、温度的影响 温度对基因表达的调控作用发生在复制、温度对基因表达的调控作用发生在复制、转录、翻译、小分子蛋白质的合成水平等转录、翻译、小分子蛋白质的合成水平等方面。方面。（1）在复制水平，温度可影响基因拷贝数）在复制水平，温度可影响基因拷贝数量。量。（2）在转录水平，温度可影响）在转录水平，温度可影响RNA聚合酶聚合酶的作用，而来调控基因表达。的作用，而来调控基因表达。（3）在翻译水平上，还可以通过小分子蛋）在翻译水平上，还可以通过小分子蛋白质的合成水平来影响基因表达。白质的合成水平来影响基因表达。（4）温度还影响
26、蛋白质的活性和包含体的）温度还影响蛋白质的活性和包含体的形成。形成。 4 4、溶解氧的影响、溶解氧的影响 溶解氧溶解氧对于工程菌发酵过程中的菌体代对于工程菌发酵过程中的菌体代谢是有十分重要作用。细菌在大量扩增谢是有十分重要作用。细菌在大量扩增过程中，要进行过程中，要进行消耗氧气消耗氧气的生化反应过的生化反应过程。因此，维持较高水平的溶解氧水平程。因此，维持较高水平的溶解氧水平（DO240%），才能维持工程菌的快），才能维持工程菌的快速生长和繁衍。速生长和繁衍。 采用采用调节搅拌转速调节搅拌转速的方法，可改善的方法，可改善培养过程中的氧供给，提高活菌产量。培养过程中的氧供给，提高活菌产量。5、诱
27、导时机的影响、诱导时机的影响 对于对于PLclts875突变株工程菌来说，在突变株工程菌来说，在28-30培养时，突变体能产生培养时，突变体能产生阻遏蛋白阻遏蛋白、来阻止启动子的转译。当温度升到来阻止启动子的转译。当温度升到42时，时，这种阻遏作用就消失。此时温度对于工程这种阻遏作用就消失。此时温度对于工程菌的表达起诱导作用。菌的表达起诱导作用。 一般来说，对于处在生长期后期的工程菌一般来说，对于处在生长期后期的工程菌进行诱导，如菌体细胞密度在进行诱导，如菌体细胞密度在109个个/ml时，时，通过升温诱导，可达到蛋白质表达增产的通过升温诱导，可达到蛋白质表达增产的效果。效果。6、pH值的影响值
28、的影响 pH对于细胞的正常生长、外源蛋白的高效表对于细胞的正常生长、外源蛋白的高效表达都有影响。达都有影响。（1）细胞细胞生长期的最佳生长期的最佳pH范围是范围是6.8-7.4。（2）外源蛋白外源蛋白表达的最佳表达的最佳pH范围是范围是6.0-6.5。n 在发酵过程中，细菌自身对在发酵过程中，细菌自身对pH值有一定的值有一定的调节能力。当调节能力。当pH值超出其调节能力的范围值超出其调节能力的范围时，会影响细菌生长。时，会影响细菌生长。n 发酵前期，发酵前期，pH值可控制在值可控制在7.0，随着蛋白质，随着蛋白质的表达，的表达，pH值不断下降，当值不断下降，当pH6.0时，应时，应及时开动及时
29、开动碱泵碱泵，加入碱液。，加入碱液。（四）基因工程菌的培养设备（四）基因工程菌的培养设备-发酵罐发酵罐1 1、发酵罐的组成、发酵罐的组成2 2、发酵罐的要求、发酵罐的要求1 1、发酵罐的组成、发酵罐的组成（1）空气加入系统）空气加入系统-去水去油的空气压缩机去水去油的空气压缩机 + 气体流量计气体流量计 + 空气无菌过滤器空气无菌过滤器 + 溶解氧电溶解氧电极极 + 溶解氧控制系统。溶解氧控制系统。（2）pH调节系统调节系统-H电极电极 + pH控制系统控制系统 + 酸酸碱补加装置。碱补加装置。（3）温度控制系统）温度控制系统-热敏电极热敏电极 + 温度控制系温度控制系统统 + 加热器加热器
30、+ 冷冻水浴冷却系统。冷冻水浴冷却系统。（4）消沫装置）消沫装置（5）取样装置）取样装置（6）旋转搅拌装置）旋转搅拌装置（7）进料系统）进料系统-培养基加入口。培养基加入口。（8）排出系统）排出系统-气体排出气体排出 + 冷却水排出冷却水排出 + 废废料排出。料排出。2 2、发酵罐的要求、发酵罐的要求（1 1）总体要求）总体要求（2 2）具体要求）具体要求（1 1）总体要求）总体要求（A A）保证发酵环境条件恒定，）保证发酵环境条件恒定，（B B）不影响其遗传特性，）不影响其遗传特性，（C C）不能引起所带质粒丢失。）不能引起所带质粒丢失。（2 2）具体要求）具体要求（A A）提供菌体生长的最
31、适条件，）提供菌体生长的最适条件，（B B）培养过程不得污染，）培养过程不得污染，（C C）保证纯菌培养，）保证纯菌培养，（D D）培养及消毒过程中不得游离出异物，）培养及消毒过程中不得游离出异物，（E E）不能干扰细菌的代谢活动。）不能干扰细菌的代谢活动。（F F）发酵罐应当用不锈钢制成，表面光洁，没有）发酵罐应当用不锈钢制成，表面光洁，没有灭菌死角。灭菌死角。（G G）任何接口必须用密封圈，不得存在泄漏，）任何接口必须用密封圈，不得存在泄漏，（H H）为避免基因工程菌在自然界扩散，培养液废）为避免基因工程菌在自然界扩散，培养液废物必须经过杀灭处理后才能进行排放。以免基物必须经过杀灭处理后才
32、能进行排放。以免基因污染。因污染。精品课件精品课件！精品课件精品课件！（五）基因工程菌发酵工艺的优化（五）基因工程菌发酵工艺的优化 是指形成基因工程菌发酵生产的最佳化工艺，是指形成基因工程菌发酵生产的最佳化工艺，（1 1）目标目标-最快反应周期、最高产量、最高最快反应周期、最高产量、最高质量、最低消耗、最大安全性、最周全的废物质量、最低消耗、最大安全性、最周全的废物处理效果、最佳速度、最低失败率。处理效果、最佳速度、最低失败率。（2 2）具体方法具体方法-通过在不同菌种之间进行重通过在不同菌种之间进行重复试验、绘制出发酵代谢曲线、从而设计出最复试验、绘制出发酵代谢曲线、从而设计出最佳工艺条件。佳工艺条件。
