1、实验室简介n1. 实验守则n2. 安全制度n3. 赔偿制度n4. 实验室规则n5. 显微镜规则 实验一实验一 油镜的使用油镜的使用1. 目的n了解普通光学显微镜原理及构造。n学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使用方法、保养常识 。n用油镜观察细菌基本形态。2. 显微镜构造及其使用原理n2.1构造的复习（1）显微镜的放大倍数放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积。目镜：10X，13X，15X，16X 低倍镜：10X物镜： 高倍镜：40X 油镜：100X2.2 光学显微镜的原理 （2）数值孔径）数值孔径（简写为NA）： 是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率和镜口角半数的正弦的乘积，可用公
2、式表示： NAsin/2 （3）分辨率分辨率：是指显微镜能辨别物体两点之间的最小距离。用D来表示，公式（Abbe公式）如下： D 2NA / 2( sin /2) 2.3油镜使用注意事项n由于物镜放大倍数与其焦点距离长度相反，即物镜放大倍数越高，其工作距离越短。一般油镜的工作距离在0.15mm左右，所以用油镜观察标本时应特别小心。同时，还要避免压碎玻片，甚至损坏油镜镜头。降低分辨率的措施n（1）降低，选择波长较短的光源。n（2）增大介质的折射率。n（3）增大物镜的镜口角。n（4）增加明暗反差，使标本的明暗对比增强。实验二实验二 微生物学实验的无菌操作微生物学实验的无菌操作n一、目的要求一、目的
3、要求n1了解无菌操作的意义。n2熟悉并掌握无菌操作的要点和步骤。 无菌操作无菌操作：不让不让除我们接种的微生物以外除我们接种的微生物以外其它微生物其它微生物 侵入侵入的技术。的技术。实验三实验三 简单染色法简单染色法一、目的要求一、目的要求n1学习制染色片技术，学习简单染色的原理。n2 进一步掌握无菌操作的技术。n3 掌握简单染色方法。n4 巩固显微镜油镜的使用方法。 二、基本原理n细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表现为无色透明，不易观察，所以必须进行染色处理，使细胞着色，便于观察。n简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、大小、及排列方式。n染色前一般要将细胞固定，其目的是杀
4、死菌体并使之粘附于玻片上，还可以增强菌体的着色能力。固定有加热法和化学法两种，无论采用何种方法均应维持细胞原有形态。三、实验材料n四联球菌（48 h 培养）斜面菌种n枯草杆菌（10 h 培养）斜面菌种四、步骤四、步骤n1涂片：涂片： 载玻片、无菌水、斜面菌种、载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作无菌操作、均、均匀的匀的薄层薄层n2干燥：干燥：n3固定：加热固定固定：加热固定n4染色：染色：结晶紫染结晶紫染1min或或蕃红染蕃红染2-3minn5 水洗：水洗：n6 干燥：干燥：n7镜检：镜检：低倍镜低倍镜观察以确定目标和范围，再观察以确定目标和范围，再换用换用油镜油镜观察绘图。观察绘图。油镜使用主
5、要步骤观察前准备观察前准备：显微镜的准备和调试：显微镜的准备和调试视野明亮视野明亮低倍镜观察低倍镜观察高倍镜观察（此步可以省略）高倍镜观察（此步可以省略）油镜观察油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦调焦显微镜油镜头的清洗和归位（显微镜油镜头的清洗和归位（擦油镜试剂清洗擦油镜试剂清洗）n注意！注意！n显微镜调焦方法显微镜调焦方法实验报告实验报告集P 1-2n细菌形态示意图绘图要求：选择形态典型的部分细菌细胞绘图。仅绘出细菌细胞轮廓，但不同细菌的细胞大小比例应适宜，且形态上应有所区分。细菌与视野相对大小应符合实际，绘空心图。注明菌名、放大倍数。下次实验内容：n革兰氏染色n细胞大小测定
