1、尿液检验的标准化作业（建议）1尿液检验的标准化作业（建议）尿液检验的标准化作业（建议）孙长伟尿液检验的标准化作业（建议）2概述 近大半个世纪以来随着临床医学及实验室技术的不断发展，尿液检验已成为评估健康、疾病状态，尤其是诊断肾脏疾病的一种最常用且不可取代的检查项目，是医学检验中不可缺少的一部分，已在临床上行成了常规检验项目，是我们临床 检验的基础知识。 然而多年以来，由于种种原因，尿液检验在检验界始终未有达到一个统一的标准化作业水平，操作者都按自己习惯的方法进行操作。如：标本处理、离心速度、时间、涂片大小、镜检报告方式等等。这样必定会造成报告结果的不一致因此，为了能够有一个正确的统一标准 ，本
2、人根据有关材料，认为有必要按中华医学会检验分会2002年提出的尿沉渣检验标准化的建议，结合我科实际情况和现有条件对尿常规检验提出一个标准化作业水平的方案（建议）。孙长伟尿液检验的标准化作业（建议）3尿液检验的标准化作业（建议）4尿液检验的标准化作业（建议）v材料与器械v标本的收集及运送v尿沉渣检验的操作步骤 v附 1：尿常规与尿沉渣系列检查有何区别 v附2：尿畸形红细胞发生机制及判定标准尿液检验的标准化作业（建议）5材料与器械v收集标本的容器 v尿沉渣计数板 v离心机 v显微镜 v自动化设备 尿液检验的标准化作业（建议）6材料与器械收集标本的容器 尿杯 离心管 玻片 尿液检验的标准化作业（建议
3、）7收集标本的容器尿杯尿杯 收集和运送尿液的容器应由不与尿液成分发生反应的惰性材料制成，洁净、防漏、防渗，一次性使用；容积应 50ml, 圆形开口的直径 4.0cm ，具有较宽的底部。尽可能使用具有安全、易于开启的密封装置，以保证标本运送安全。 尿液检验的标准化作业（建议）8收集标本的容器v离心管离心管v 用于离心尿液的离心管，应具备以下条件，清洁、透明、带刻度，刻度上的应至少标明 10ml 、1ml 、 0.2ml ，容积应 12 ml 、试管底部呈锥形或缩窄形。试管口尽可能具有密封装置。最好使用不易破碎的一次性塑料或玻璃离心管。 尿液检验的标准化作业（建议）9收集标本的容器v玻片玻片v用于
4、尿沉渣分析的玻片必须能进行标记，便于病人标本的识别，且应保持洁净。 尿液检验的标准化作业（建议）10材料与器械v尿沉渣计数板 v尿沉渣的量和压（涂）片厚度是标准化重要环节，在普通玻片上随意滴加沉渣液或加盖玻片（不加盖玻片），不能提供标准化的结果。建议使用标准化的沉渣计数板。 尿液检验的标准化作业（建议）11材料与器械v离心机 v采用水平式离心机，离心时应盖上盖，以保证安全。离心时，机内温度应尽可能保持 25 ，离心机相对离心力（ RCF ）应在 400g 左右。 离心机转速与相对离心力的换算公式为：g=11.18(rpm/1000) 2 R或 rpm=1000 400/(11.18 半径 )
5、1/2注： rpm= 为每分钟转数；r 为半径，指从离心机轴中央到离心管底部的距离；g 为相对离心力。 尿液检验的标准化作业（建议）12材料与器械v显微镜 v尿沉渣检查尽可能使用具有内置光源的显微镜，光线强度可调，应具备 40 倍、 10 倍的物镜和 10 倍的目镜。同一实验室如有多台显微镜的物镜及目镜的放大倍数应一致。 尿液检验的标准化作业（建议）13材料与器械v自动化设备 v有条件的实验室也可使用各类自动、半自动的尿沉渣分析仪作为尿沉渣分析，或用作过筛，但此类仪器必须经权威机构认可。尿液检验的标准化作业（建议）14材料与器械v计算机数据处理系统 v在有条件的单位，可使用带计算机成像系统的显
6、微镜、标准化的沉渣检测系统和相关辅助软件来自动处理结果，但检查方法和尿沉渣结果报告方式须标准化。v附:尿沉渣标准工作站_ 所谓工作站就是将摄像显微镜、电脑、尿沉渣计数板三个组成一体化，包括标准定量流动计数室全程键盘控制、条形码识别，自动强制清洗，自动染色进样，配以16 孔水平式离心机，带图像的电脑打印等 尿液检验的标准化作业（建议）15标本的收集及运送v标本的收集v实验室工作人员、医生、护士必须对病人留尿进行指导、务必使尿道口保持清洁。随机尿液标本的留取无特殊时间规定，但病人必须有足够的尿量（ 30 50ml ）；晨尿指病人起床后第一次尿；收集“时段尿”时，应告知病人时间段的起点和终点，起始时
7、先排空膀胱；三杯试验留尿时间要分段明确，做好标记。送检单上应注明留尿时间、送检时间。 尿液检验的标准化作业（建议）16标本的收集及运送v标本的运送 v按上述要求留取尿液应在 2h 内完成检验，如果标本收集后 2h 内无法完成分析 , 可 2 8 冷藏， 6h 内完成检验；如仅做尿沉渣检查，可在尿标本中加适量防腐剂 ( 大多使用 400g /L 的甲醛溶液，每升尿液加入 5ml .应注意甲醛过量时可与尿素产生沉淀物，干扰显微镜检查 ) 。v 尿液检验的标准化作业（建议）17标本的收集及运送v标本的标记 v标本容器必须有标记，包括：病人姓名、特定编码（或住院病人的病区、床号）、标本收集时间。标签应
8、贴在容器上，不可贴在盖上。 尿液检验的标准化作业（建议）18标本的收集及运送v标本的接收 v实验室应建立严格的标本接收制度，工作人员在接收标本时，必须检查标本容器是否符合要求，标记内容与医生所填写化验单是否一致；从留尿到接收标本的时间是否过长；标本是否被污染。尿标本量不少于 30ml,在特殊病例不可能达到此要求时 ( 如小儿、烧伤、肾衰无尿期 ) ，应在检验报告单上注明收到的尿量、检查方法（离心或未离心）。 尿液检验的标准化作业（建议）19尿沉渣检验的操作步骤v离心 v离心管中倒入充分混匀的尿液至 10ml 刻度处 ,RCF400 k g, 离心 5min 。离心后倾倒或吸去上清液，离心管底部
9、残留尿液的量应在 0.2ml 处，使之浓缩 50倍。 尿液检验的标准化作业（建议）20尿沉渣检验的操作步骤v镜检 v沉渣液混匀后，取 1 滴（约 15 20ul ）充液到标准尿沉渣计数板里 ( 按说明操作 ), 先用低倍镜观察 , 后用高倍镜。计数细胞或管型，按 /ul 报告。这是标准工作站方式.但目前实际情况我们要求取 1 滴尿（约 15 20ul ）涂于载玻片上加盖玻片镜检.尿液检验的标准化作业（建议）21尿沉渣检验的操作步骤v报告方式v要求:WBC,RBC,PC,上皮细胞用高倍镜观察10个视野计算平均每个视野最少到最多的个数,管型用低倍镜观察20个视野以平均每个视野最少到最多的个数报告.
10、v尿结晶、细菌、真菌、寄生虫等以 + 、 + 、 + 、 + 或 1+ 、 2+ 、3+ 、 4+ 形式报告。 v尿结晶、盐类的报告方法：- ： 01+ ： 1 4 个 / 每高倍视野2+ ： 5 9 个 / 每高倍视野3+ ： 10 个 / 每高倍视野 v原虫、寄生虫卵的报告方法 ：v- ： 01+ ： 1 个 4 个 / 每高倍视野2+ ： 5 9 个 / 每高倍视野3+ ： 10 个 / 每高倍视野 v细菌、真菌的报告方法：- ： 0：数个视野散在可见1+ ：各个视野均可见2+ ：数量多或呈团状集聚3+ ：无数 尿液检验的标准化作业（建议）22尿沉渣检验的操作步骤v尿沉渣的检查内容 v（
11、 1 ）细胞：红细胞、白细胞、吞噬细胞、上皮细胞（肾小管上皮细胞、移行上皮细胞、鳞状上皮细胞） v（ 2 ）管型：透明管型、细胞管型、颗粒管型、蜡样管型、脂肪管型、混合管型、宽形管型等。 v（ 3 ）结晶：磷酸盐、草酸钙、尿酸结晶和药物结晶等。 v（ 4 ）细菌、寄生虫（或卵）、真菌、精子、粘液等。 v（ 5 ）临床医生特殊要求的其他成分。 尿液检验的标准化作业（建议）23尿液检验的标准化作业（建议）24尿常规与尿沉渣系列检查有何区别 概念区别 v尿常规检验是由尿生化11项指标和显微镜检查来诊断泌尿系统疾病的一种简单，快速的方法。是临床工作者评价了解肾脏结构损伤程度的最有效的单个 试验，而且常
12、提供病变本质的准确线索。v尿沉渣系列检查是在尿常规的基础上再通过不同方法（染色或不染色）对RBC进行形态学分析，来区别血尿的来源，对肾脏疾病的诊断与鉴别诊断有着很大的帮助作用。尿液检验的标准化作业（建议）25尿常规与尿沉渣系列检查有何区别 作业要求区别 v尿常规检验是临床检验常规项目，具有筛选性质。每个人进行操作不可能达到条件一致，所以，无法进行重复性和定量分析。v尿沉渣检查是在实验条件完全一致情况下专人专做，这样有利于对尿有形成分进行定量分析，可以对同一病人进行动态观察（实验条件指：标本量，离心力速度，时间，盖玻片大小等完全一致）尿液检验的标准化作业（建议）26尿常规与尿沉渣系列检查有何区别
13、 对标本要求区别 v 尿常规检查由于随机性比较大，医生护士不可能完全按标准嘱咐病人留取标本，特别住院病人，留尿的方式，留尿时间，污染程度，往往达不到要求，只能说可以提高检出率，而不能动态观查病情 。v尿沉渣检查一般要求比较严格，早晨随机尿，无污染不喝水一小时内送检，这样可确保RBC形态的准确定性。由于条件一致，对动态观察起到一定作用。尿液检验的标准化作业（建议）27尿红细胞发生机理及影响因素 v肾小球的滤过v 红细胞从血液中通过病变的肾小球基底膜的狭窄裂隙时，受到机械性损伤，使红细胞膜受损，血红蛋白丢失或部分丢失，红细胞形态发生改变。有人在体外采用模拟实验装置进行试验，认为肾小球滤过膜作用，是
14、产生畸形红细胞的重要条件。尿液检验的标准化作业（建议）28尿红细胞发生机理及影响因素 v肾小管中微环境的变化v 由于肾小管中各部分渗透压发生不同变化，红细胞在经过肾小管时，在低渗状态下发生溶血样改变，红细胞膜发生破裂，红细胞内的成分排出体外，易出现芽孢状突起或空泡。在高渗状态下则易发生缩小，皱缩。所以，红细胞在经过肾小管时历经了低渗、高渗、等渗等不同环境的影响，从而使红细胞呈现典型的多形性特征。尿液检验的标准化作业（建议）29尿红细胞发生机理及影响因素 vPH值的影响v 肾小管中PH值的变化，对红细胞形态改变影响也很大。实验证明，在酸性环境中，PH值4.0时，红细胞呈现增大、肿胀现象，部分呈现
15、溶解状态。在碱性尿中，PH值9.0时则红细胞呈现皱缩现象。因此，红细胞在经过肾小管时，PH值的变化，也是形成变形的因素。尿液检验的标准化作业（建议）30红细胞形态的判定标准 v目前在临床上对红细胞的分型标准尚未达到完全统一，早期分型标准认为红细胞分形态分为三型：（1）均一性，（2）多形型，（3）混合型。实践认为，姜傥等人提出的红细胞分类标准，有利于检测者的实际应用。即将红细胞形态按肾性红细胞（G类红细胞）和非肾性红细胞（N类红细胞）分类。vG类红细胞分为五型，其特征如下： G1类红细胞带有芽孢或伪足突起，可呈大小不等，细胞膜破坏形成炸面包圈、球形、口形、花环形、戒指形；G2类红细胞呈小球形、小
16、口形、小环形；G3类红细胞呈面包圈样、靶形；G4类红细胞呈花环形或细胞表面有颗粒样沉积；G5类红细胞形态不规则、破碎、裂形及脱落的芽孢、细胞碎片。vN类红细胞共同特点胞体正常或偏大,血红蛋白丰富细胞膜完整,其形态也分5类：N1型为正常大小双凹盘状圆形红细胞表面光整；N2类红细胞为正常大小的球形红细胞表面光滑；N3类红细胞扁平肿胀，直径较大，表面光滑或不规则；N4类红细胞多为双凹盘圆形，其凹陷较N1为深，少数成轮胎状，表面光滑；N5类红细胞为扁平或球形，表面呈多棘突或轮齿形细胞表面亦较光滑。在肾性血尿中，畸形红细胞往往为多种形态同时出现，在临床诊断中，至少二种畸形红细胞达到70%以上，才能诊断肾
17、性血尿。尿液检验的标准化作业（建议）31荧光染色流式细胞仪 Sysmex公司生产UF50、UF-100i尿沉渣流式细胞仪是利用沉渣中有形成分DNA与细胞膜与菲啶、羰化氰两种荧光染料接触后通过鞘流进行激光照射，各有形成分产生前向散射光度和荧光脉冲宽度，又通过电阻抗测出红细胞、血细胞大小散点图、直方图，仪器可自动报告红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、细菌5个定量参数及小圆上皮细胞、霉菌、病理管型及精子5个定性参数，还可测出尿液电导率指标。由于无须离心，检测速度快，病理成分敏感度及重复性好，再由于每份尿样本检测步骤模式一致便于质量控制（有标准检测颗粒）及标准化。如与干化学试条联合应用还可以通过计算机处
18、理观察两者间符合程度，临床上用于血尿鉴别、确定泌尿感染、了解肾功能等受到重视。仪器不足之处价格偏高，不能检测出滴虫、脂肪滴、病理及药物结晶，也不能识别病毒包涵体或肿瘤细胞；当尿中存在大量细菌、酵母菌、结晶等颗粒可干扰红细胞记数结果；也不能在影像中识别影红细胞及各种病理管型。 Fl(荧光荧光)染液灵敏度染液灵敏度 高度高度宽度宽度Flw(荧光脉冲宽度荧光脉冲宽度)包涵物的长度包涵物的长度(incl. nucleus)可组合的区域可组合的区域Fsc (前向散射光前向散射光)细胞的长度细胞的长度Fscw(前向散射光脉冲宽度前向散射光脉冲宽度)细胞的容积细胞的容积Imp (电阻抗法电阻抗法)电阻法电阻
19、法信号信号放大器放大器样本样本(尿液尿液)电导传感器电导传感器鞘液鞘液激光束激光束前向散射光前向散射光信号信号放大器放大器放大器放大器荧光信号荧光信号 高度高度宽度宽度 高度高度尿液检验的标准化作业（建议）33荧光染色流式细胞仪v朱忠勇（福州部队总医院全军医学检验中心）：v至于什么情况下进行沉渣镜检：NCCLS的GP16A文件提出三条，可供参考v临床医生要求做v检验科与临床的协议规定要做（如用了免疫抑制剂的病人，肾泌尿系统疾病，妊娠）v任何一项物理、化学试验出现异常结果内时。尿液检验的标准化作业（建议）34尿液分析试纸条使用注意事项 v本产品仅供专业认识使用。v不要使用过期或已变色的试纸条。v
20、试纸条从包装筒中取出即用并立即盖好盖子。v不要用手触摸试纸块表面，避免污染试纸块。v不可将包装筒内的干燥剂取出，不要将试纸条转移到其它的容器中。v试纸条应避免潮湿、高温和阳光直射。v试纸条应贮存在230O C干燥环境内。v维生素C会使亚硝酸盐、胆红素、葡萄糖、隐血结果偏低甚至出现假阴性尿液检验的标准化作业（建议）35March 6, 2000Sysmex Corporation (IHQ)4日立高新日立高新日立高新日立高新尿液干化学检测方法的局限性例如：白细胞：某些幼稚白细胞不表现脂酶尿糖：受其它还原物质的影响造成假阴性细菌：只能检测革兰氏阴性杆菌红细胞：假阳性率高蛋白：抗生素导致假阴性定性结果，不能用于疗效的监测结论：不能代替镜检结论：不能代替镜检尿液检验的标准化作业（建议）36谢谢大家谢谢大家v
