1、1中药制剂中药制剂含量测定技术含量测定技术 2方法方法化学方法化学方法* *仪器分析方法仪器分析方法有效成分有效成分指标性成分指标性成分毒性成分毒性成分 分析成分分析成分中药制剂含量测定技术中药制剂含量测定技术3高效液相色谱法高效液相色谱法薄层扫描法薄层扫描法可见可见-紫外分光光度法紫外分光光度法气相色谱法气相色谱法原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法方法方法仪器分析方法仪器分析方法滴定法滴定法浸出物测定法浸出物测定法重量法重量法挥发油测定法挥发油测定法总氮测定法总氮测定法化学方法化学方法4仪器分析法之仪器分析法之紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法5KCLA A:A:吸光度吸光度K:K
2、:吸收系数吸收系数C:C:溶液浓度溶液浓度L:L:液层厚度液层厚度 基本原理基本原理:Lamber-Beer:Lamber-Beer定律定律紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法6u摩尔吸收系数摩尔吸收系数： 一定，一定，C=1mol/LC=1mol/L，L=1cmL=1cm时的吸光度时的吸光度u百分含量吸收系数百分含量吸收系数/ / 比吸收系数比吸收系数 一定，一定，C=1g/100mlC=1g/100ml，L=1cmL=1cm时的吸光度时的吸光度%1110cmEM紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法%11cmE*7紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法n吸收光谱吸收光谱（吸收曲线
3、）（吸收曲线）：n定性依据定性依据: :n 吸收峰吸收峰maxmaxn 吸收谷吸收谷minminn 肩峰肩峰shshn定量依据定量依据: :吸收峰吸收峰maxmax89钨灯或卤钨灯：可见光源钨灯或卤钨灯：可见光源 3503501000nm1000nm氢灯或氘灯：紫外光源氢灯或氘灯：紫外光源 200200360nm360nm吸收池：吸收池： 玻璃玻璃-能吸收能吸收UVUV光，仅适用于可见光区光，仅适用于可见光区 石英石英-不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）光光源源紫外紫外- -可见
4、分光光度法可见分光光度法10测定波长的选择：测定波长的选择： maxmax吸光度读数范围的选择：吸光度读数范围的选择：A=0.3A=0.30.70.7UV 吸光度测量的条件选择吸光度测量的条件选择样样参参调节光路调节光路光学性质和厚度相同光学性质和厚度相同样品池样品池样品溶液样品溶液，参比池参比池空白溶液空白溶液样品池样品池参比池参比池配制样品的溶剂配制样品的溶剂空白溶液空白溶液A AT TA A+ += = =+ +% %1001000 011样品样品A值值UV-标准曲线法标准曲线法对照品溶液：一系列不同浓度的对照品溶液对照品溶液：一系列不同浓度的对照品溶液 相同条件下相同条件下A为纵坐标，
5、为纵坐标，C为横坐标为横坐标标准曲线（工作曲线）标准曲线（工作曲线）样品的浓度和含量样品的浓度和含量一系列一系列A值值12标准曲线又称工作曲线。如标准曲线又称工作曲线。如吸光光度吸光光度法，在绘制时，法，在绘制时，首先在一定条件下配制一系列具有首先在一定条件下配制一系列具有不同已知不同已知浓度吸浓度吸光物质的标准溶液，然后在确定的波长和光程等条光物质的标准溶液，然后在确定的波长和光程等条件下，分别测量系列溶液的吸光度，绘制件下，分别测量系列溶液的吸光度，绘制A-cA-c曲线曲线，从而得到一条通过从而得到一条通过原点原点的直线，即标准曲线。当需的直线，即标准曲线。当需要对某未知液的浓度要对某未知
6、液的浓度c cx x进行测定时，只需要在相同进行测定时，只需要在相同条件下测得未知液的吸光度条件下测得未知液的吸光度A Ax x，就可由就可由c cx x=A=Ax x/ /b b计计算算得出或直接在标准曲线上得出或直接在标准曲线上查查得得c cx x。在实际操作中，在实际操作中，应注意调整应注意调整c cx x的大小，使其对应的的大小，使其对应的A Ax x处于标准曲线处于标准曲线的直线范围（线性范围）之内。的直线范围（线性范围）之内。UV-标准曲线法标准曲线法13UV-标准曲线法标准曲线法 标准曲线的标准曲线的直线部分直线部分所对应的被测物所对应的被测物质质浓度（或含量）的范围浓度（或含量
7、）的范围称为该方法的线称为该方法的线性范围。性范围。14 标准曲线是依据标准系列的浓度（或含量）和其相对应的相应信号标准曲线是依据标准系列的浓度（或含量）和其相对应的相应信号测量值来绘制的。如浓度（或含量）分别为测量值来绘制的。如浓度（或含量）分别为x x1 1,x,x2 2x xn n，其相应信号，其相应信号( (吸吸光度光度) )的测量值分别为的测量值分别为y y1 1,y,y2 2y yn n，用，用简单简单的方法的方法很难很难绘制出能绘制出能准确准确反映反映y y与与x x之间关系的标准曲线。通常，用之间关系的标准曲线。通常，用“一元线性回归法一元线性回归法”来给出来给出y y与与x
8、x的关系式的关系式 y=a+bxy=a+bx （1-11-1）式中其中式中其中 式式(1-1)(1-1)称为一元线性回归方程，称为一元线性回归方程，b b称为回归系数，即回归直称为回归系数，即回归直线的线的斜率斜率，a a为截距。为截距。xbyaxxyyxxbniiniii121)()(nyiynxixnini11UV-标准曲线法标准曲线法15当两个当两个变量变量之间直线关系之间直线关系不够严格不够严格，数据的，数据的偏离偏离较较严重严重时，虽然时，虽然也也可以求得一条回归线，但是，实际上只有当两个变量之间可以求得一条回归线，但是，实际上只有当两个变量之间存存在在某种某种线性线性关系时，这条回
9、归线关系时，这条回归线才有意义才有意义。判断回归线是否有。判断回归线是否有意义，可用相关系数意义，可用相关系数r r来检验。来检验。相关系数的定义式为：相关系数的定义式为：r r值在值在-1.0000-1.0000与与+1.0000+1.0000之间。相关系数的物理意义如下：之间。相关系数的物理意义如下：（1 1）r r=1=1时，时，y y与与x x之间存在之间存在严格严格的线性关系，所有的的线性关系，所有的yiyi值都在值都在回归线上。回归线上。（2 2） r r=0=0时，时， y y与与x x之间之间完全不存在完全不存在线性关系。线性关系。（3 3） 00r r11.5R1.5n内标物
10、为高纯度标准物质或含量已知物质内标物为高纯度标准物质或含量已知物质内标法内标法n校正因子的计算校正因子的计算n含量计算含量计算70内内对对/ACfAC供内供内ACCfA71薄荷脑对照品气相色谱图 川贝枇杷糖浆气相色谱图7273内A74内75.1510.7515（mg/ml）520C对73.2610.7326（mg/ml）520C内内对对/851302.0/0.75151.040/798023.5/0.7326ACfAC供内供内814180.50.75151.0400.7561（mg/ml）841603.2ACCfA供20含量0.75610.30240.302（mg/ml）50CDn检验依据（中
11、国药典检验依据（中国药典20102010年版一部年版一部12221222页）页）n【检查】乙醇量【检查】乙醇量 应为应为60%60%70%70%（附录（附录 M M）n测定测定: :精密量取恒温至精密量取恒温至2020的颠茄酊的颠茄酊8ml8ml和正丙醇和正丙醇5ml5ml，置，置100ml100ml容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取恒温至摇匀，作为供试品溶液。精密量取恒温至2020的的无水乙醇无水乙醇5ml5ml和正丙醇和正丙醇5ml5ml，置，置100ml100ml容量瓶中，加容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。取标纯化
12、水稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。取标准溶液和供试品溶液各准溶液和供试品溶液各2l2l，连续进样，连续进样3 3次，测得次，测得校正因子（校正因子（f f）分别为）分别为0.69250.6925、0.69210.6921、0.69180.6918。A AX X/ /A AS S分别为分别为1.4661.466、1.4581.458、1.4311.431。求出该供试。求出该供试品乙醇量及其相对标准偏差（品乙醇量及其相对标准偏差（RSDRSD）。）。75/./.123（3 （0 69250 6921 0 6918）30 6921）ffff/%.%.%5乙醇量（）1000 6921 1 466100
13、63 418SXSXVAV VfAV/%.%.%5乙醇量（）1000 6921 1 45810063 078SXSXVAV VfAV/%.%.%5乙醇量（）1000 6921 1 43110061 908SXSXVAV VfAV/%.%.%.% /.%62.8%乙醇量（）（63 4163 0761 90 ）362 79V V().%210 79211niiXXSn%.%. %（ ）1001 261 3SRSDX7778适用性适用性浸出物测定浸出物测定有效成分不清楚的有效成分不清楚的无定量方法的无定量方法的有效成分溶解性能有效成分溶解性能药用部位药用部位制剂处方制剂处方溶剂溶剂浸出物浸出物含量含
14、量质量质量n测定方法测定方法n水溶性浸出物测定法水溶性浸出物测定法 n醇溶性浸出物测定法醇溶性浸出物测定法 n挥发性醚浸出物测定法挥发性醚浸出物测定法n前处理前处理n粉碎二号筛（水、醇）粉碎二号筛（水、醇）n四号筛（醚）四号筛（醚）79浸出物测定浸出物测定80水溶性浸出物测定法水溶性浸出物测定法溶剂：水溶剂：水水溶性成分水溶性成分方法方法冷浸法冷浸法热浸法热浸法不含或少含淀粉、黏液质不含或少含淀粉、黏液质浸出物测定浸出物测定n水溶性浸出物测定法水溶性浸出物测定法n冷浸法冷浸法: :取供试品约取供试品约4g4g，称定重量，置，称定重量，置250250300ml300ml的锥形瓶中，的锥形瓶中，精
15、密加入水精密加入水100ml100ml，塞紧，冷浸，前，塞紧，冷浸，前6 6小时内时时振摇，再静置小时内时时振摇，再静置1818小时，用干燥滤器迅速滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液小时，用干燥滤器迅速滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml20ml，置己干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴蒸干后，于，置己干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴蒸干后，于105105干干燥燥3 3小时，移置干燥器中，冷却小时，移置干燥器中，冷却3030分钟，迅速精密称定重量，除分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（% %）n热浸法热浸法:
16、:取供试品约取供试品约2 24g4g，称定重量，置，称定重量，置100100250ml250ml的锥形瓶的锥形瓶中，精密加入水中，精密加入水5050100ml100ml，塞紧，称定重量，静置，塞紧，称定重量，静置1 1小时后，小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 1小时。放冷后，取小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用下锥形瓶，密塞，称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。弃去初滤液，精密量取续滤液干燥滤器滤过。弃去初滤液，精密量取续滤液25ml25ml置干燥至恒置干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后
17、，于重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105105干燥干燥3 3小时，移置干小时，移置干燥器中，冷却燥器中，冷却3030分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外，以分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（% %） 81浸出物测定浸出物测定8282醇溶性浸出物测定法醇溶性浸出物测定法醇溶性成分醇溶性成分溶剂溶剂甲、乙醇甲、乙醇丁醇丁醇含较多皂苷含较多皂苷方法同水溶性浸出物测方法同水溶性浸出物测定法定法83n操作方法操作方法n水溶液制剂：用饱和正丁醇提取，依法检查水溶液制剂：用饱和正丁醇提取，依法检查n固体制剂：水溶解，移至分液
18、漏斗中，用水饱和的正丁醇固体制剂：水溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取数次，合并提取液，照上述方法蒸干，干燥，称定浸提取数次，合并提取液，照上述方法蒸干，干燥，称定浸出物重量，计算出制剂中正丁醇浸出物的含量（出物重量，计算出制剂中正丁醇浸出物的含量（W/W %W/W %）n儿康宁糖浆正丁醇浸出物的测定儿康宁糖浆正丁醇浸出物的测定: :精密量取本品精密量取本品20ml20ml，用水，用水饱和的正丁醇振摇提取饱和的正丁醇振摇提取5 5次，第次，第1 1次次30ml30ml，以后，以后 每次每次20ml20ml，合并正丁醇提取液，置已干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，合并正丁醇提取液，置已干燥至恒
19、重的蒸发皿中，蒸干，置置105105干燥干燥3 3小时小时, ,移置移置 干燥器中、冷却干燥器中、冷却3030分钟，迅速精分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。本品含正丁醇提取物不得少于密称定重量，计算，即得。本品含正丁醇提取物不得少于3.03.0 醇溶性浸出物测定法醇溶性浸出物测定法84醚溶性浸出物测定法醚溶性浸出物测定法乙醚乙醚溶剂溶剂醚溶性成分醚溶性成分挥发性成分挥发性成分85挥发油的测定挥发油的测定 n挥发油又称芳香油或精油，是广泛存在于植物中的一类可挥发油又称芳香油或精油，是广泛存在于植物中的一类可随水蒸气蒸馏得到的与水不相溶的油状液体的总称，内含随水蒸气蒸馏得到的与水不相溶的油状液体
20、的总称，内含有多种化学成分，组成复杂。有多种化学成分，组成复杂。n中国药典中国药典中挥发油的测定系指采用水蒸气蒸馏法对药中挥发油的测定系指采用水蒸气蒸馏法对药品中挥发油总量的测定。例如，正骨水、牡荆油胶丸、保品中挥发油总量的测定。例如，正骨水、牡荆油胶丸、保妇康栓和满山红油滴丸中挥发油的测定妇康栓和满山红油滴丸中挥发油的测定n测定原理：首先利用挥发油的挥发性用水蒸气蒸馏法将其测定原理：首先利用挥发油的挥发性用水蒸气蒸馏法将其提取完全；再利用其较强的亲脂性与水不相溶而分层，即提取完全；再利用其较强的亲脂性与水不相溶而分层，即可读测取油的总量并求算出含量可读测取油的总量并求算出含量 86容量分析法
21、容量分析法 n酸碱滴定法酸碱滴定法n沉淀滴定法沉淀滴定法n配位滴定法配位滴定法n氧化还原滴定法氧化还原滴定法n适用范围适用范围 n生物碱的含量生物碱的含量n某些矿物药的含量某些矿物药的含量 87生物碱的含量测定生物碱的含量测定 n如果生物碱可溶于水或水如果生物碱可溶于水或水- -醇溶液中，且生物碱碱醇溶液中，且生物碱碱性较强，则可用强酸滴定液直接测定；如果生物碱性较强，则可用强酸滴定液直接测定；如果生物碱在水中溶解度较小时，可先将其溶解在一定量过量在水中溶解度较小时，可先将其溶解在一定量过量的酸标准溶液中，再用强碱滴定液回滴剩余的酸，的酸标准溶液中，再用强碱滴定液回滴剩余的酸，即用反滴定法测其
22、含量。如北豆根片、止喘灵注射即用反滴定法测其含量。如北豆根片、止喘灵注射液及颠茄酊中总生物碱的含量测定均采用此法。液及颠茄酊中总生物碱的含量测定均采用此法。n对于某些不溶于水的生物碱或碱性比较弱对于某些不溶于水的生物碱或碱性比较弱（KC10-8KC10-8）的生物碱也可采用非水酸碱滴定法）的生物碱也可采用非水酸碱滴定法测其含量。测定时可选用冰醋酸、醋酐、三氯甲烷、测其含量。测定时可选用冰醋酸、醋酐、三氯甲烷、吡啶等非水溶剂，用高氯酸作滴定液，结晶紫等作吡啶等非水溶剂，用高氯酸作滴定液，结晶紫等作指示剂或以电位法确定终点。本法多用于纯生物碱指示剂或以电位法确定终点。本法多用于纯生物碱的含量测定的
23、含量测定 精品课件精品课件！精品课件精品课件！90矿物药的测定矿物药的测定 n矿物药包括天然矿物、生物化石、人类加工品及矿物药包括天然矿物、生物化石、人类加工品及纯粹化学制品，其组成为无机化合物。矿物药依纯粹化学制品，其组成为无机化合物。矿物药依据其所含最主要的含量最多的元素和化合物类别，据其所含最主要的含量最多的元素和化合物类别，可分为砷类药（如雄黄）、汞类药（如朱砂）、可分为砷类药（如雄黄）、汞类药（如朱砂）、铅类药（如密陀僧）、铜类药（如胆矾）、铁类铅类药（如密陀僧）、铜类药（如胆矾）、铁类药（如赭石）等十种。由于其品种复杂，且砷、药（如赭石）等十种。由于其品种复杂，且砷、汞、铅等类药物具有毒性，因此对矿物药的质量汞、铅等类药物具有毒性，因此对矿物药的质量控制尤为重要控制尤为重要
