1、艾滋病检测技术及诊断艾滋病检测技术及诊断1检测依据和行业标准2样品的采集和处理n样品种类及用途样品种类及用途n血液标本的采集血液标本的采集n抗凝剂的选择抗凝剂的选择n样品的保存样品的保存n样品的运送样品的运送3样品种类及用途 n全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液及干血斑全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液及干血斑（ DBS DBS ）样品可用于）样品可用于HIVHIV抗体检测。抗体检测。n全血、血清、血浆、病毒培养上清液可用于全血、血清、血浆、病毒培养上清液可用于HIVHIV抗原检测。抗原检测。n抗凝全血可用于抗凝全血可用于CD4CD4+ +和和CD8CD8+ +T T淋巴细胞测定。淋巴
2、细胞测定。n血浆、血浆、DBSDBS可用于可用于HIV-1HIV-1病毒载量、基因型和耐药检测。病毒载量、基因型和耐药检测。n淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞（淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞（PBMCPBMC）及全血）及全血可用于可用于HIVHIV核酸定性与定量、基因型检测和核酸定性与定量、基因型检测和HIV-1HIV-1分离培养。分离培养。4血液标本的采集n抗凝全血：消毒局部皮肤，用有抗凝剂的真空采血管抽取抗凝全血：消毒局部皮肤，用有抗凝剂的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻抗凝剂的试管
3、中，轻轻颠倒混匀颠倒混匀6868次，备用。次，备用。n血浆：将采集的抗凝全血血浆：将采集的抗凝全血15003000r/min15003000r/min离心离心1515分钟，分钟，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。n血清：根据需要，用不含抗凝剂的真空采血管抽取血清：根据需要，用不含抗凝剂的真空采血管抽取510ml510ml静脉血，或一次性注射器抽取静脉血，转移至无静脉血，或一次性注射器抽取静脉血，转移至无抗凝剂的试管中，室温下自然放置抗凝剂的试管中，室温下自然放置1212小时，待血液凝固、小时，待血液凝固、血块收缩后再用血块收缩后再用150030
4、00r/min15003000r/min离心离心1515分钟，吸出血清，分钟，吸出血清，置于合适的容器中，备用。置于合适的容器中，备用。5抗凝剂选择 nCD4CD4+ +和和CD8CD8+ +T T淋巴细胞检测：淋巴细胞检测：EDTAEDTA、肝素肝素、枸橼酸钠、枸橼酸钠n病毒分离、核酸检测：病毒分离、核酸检测： EDTAEDTA、枸橼酸钠、枸橼酸钠6样品的保存 n抗体检测：血清或血浆样品，抗体检测：血清或血浆样品，短期短期（1 1周）内进行检测的周）内进行检测的可存放于可存放于2828，一周以上一周以上应存放于应存放于-20 -20 以下。以下。n核酸检测：核酸检测：48h48h内分离血浆，
5、内分离血浆，4 4天内天内检测可存放于检测可存放于4 4 , ,3 3个月内个月内存放于存放于-20 -20 以下，以下，3 3个月以上个月以上-70 -70 以下保存。以下保存。nCD4CD4+ +T T淋巴细胞检测：室温保存，时间不超过淋巴细胞检测：室温保存，时间不超过24h24h。如果。如果用用CD45CD45设门，样品保存不超过设门，样品保存不超过72h72h。7样品的保存n筛查阳性样品应及时进行补充试验，筛查阴性样品，可根筛查阳性样品应及时进行补充试验，筛查阴性样品，可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存据具体需要决定保存时间，建议至少保存1 1个月个月。特殊用。特殊用途或专项项目
6、的样品根据具体要求确定保存时间。补充试途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。补充试验阳性样品按照国家生物样品管理的有关规定执行。验阳性样品按照国家生物样品管理的有关规定执行。8样品的运送n标本筛查阳性（标本筛查阳性（复检需用三代试剂复检需用三代试剂），送检单位必须联系），送检单位必须联系受检者，在受检者，在仔细核实仔细核实受检者身份等信息后重新采集受检者身份等信息后重新采集1 1份全份全血。将筛查阳性的血清与重新采集的全血共血。将筛查阳性的血清与重新采集的全血共2 2份份样品一同样品一同送至本中心。要求送检血清量不得少于送至本中心。要求送检血清量不得少于0.5ml0.5ml，送检单位，送
7、检单位对重新采集的全血不得做任何处理。标本的标识须用正楷对重新采集的全血不得做任何处理。标本的标识须用正楷字标明受检者姓名、性别和采集时间（年字标明受检者姓名、性别和采集时间（年/ /月月/ /日）。日）。n筛查阳性的血清应装于筛查阳性的血清应装于1.5ml1.5ml冻存管内，如果没有也可装冻存管内，如果没有也可装于真空采血管内，禁止使用除此之外的其他容器。于真空采血管内，禁止使用除此之外的其他容器。9样品的运送n包装要求：应采用包装要求：应采用WHOWHO提出的三级包装系统提出的三级包装系统 第一层容器第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试
8、管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分送检单应与样品分开放置开放置。 第二层容器第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。容器内，容器的材料要易于消毒处理。 第三层容器第三
9、层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。10样品的运送n用于抗体检测的血清和血浆样品应在用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存冻存条件下运送，用条件下运送，用于于CD4CD4+ +和和CD8CD8+ +T T淋巴细胞测定的样品应在淋巴细胞测定的样品应在室温下室温下（18251825 ）运送。用于病毒载量检测的样品应在）运送。用于病毒载量检测的样品应在-20 -20 以下运输。以下运输。DBSDBS和尿液样品应在和尿液样品应在室温下室温下运送。运送。11样品的运
10、送 12样品的运送n带螺帽、垫圈的血清冻存管带螺帽、垫圈的血清冻存管。13样品的运送n禁止使用禁止使用EPEP管管14样品的运送n禁止使用内旋盖冻存管禁止使用内旋盖冻存管15样品的运送n在冻存管外套带盖的第二层容器在冻存管外套带盖的第二层容器16样品的运送n置于带冰袋的第三层容器中置于带冰袋的第三层容器中17样品的运送 HIVHIV抗体筛查检测报告的填写抗体筛查检测报告的填写n筛查阳性的标本应填写筛查阳性的标本应填写HIVHIV抗体筛查检测报告，加盖公章抗体筛查检测报告，加盖公章后送检。后送检。n报告单不得有空项报告单不得有空项 ，必须按规范要求认真完成筛查、复，必须按规范要求认真完成筛查、复
11、检（第一次）、复检（第二次）三次试验。检（第一次）、复检（第二次）三次试验。n在检测结果空白处填写送检样品的在检测结果空白处填写送检样品的S/COS/CO值或发光值。值或发光值。nHIVHIV筛查实验室筛查不能使用快速检测方法。筛查实验室筛查不能使用快速检测方法。n两次复检需使用三代试剂，三代试剂检测结果阳性方可送两次复检需使用三代试剂，三代试剂检测结果阳性方可送检。检。1819HIV抗体检测nHIVHIV抗体检测的实验室要求抗体检测的实验室要求nHIVHIV抗体检测的目的和要点抗体检测的目的和要点n常规常规HIVHIV抗体检测方法抗体检测方法n结果报告结果报告n质量控制质量控制20HIV抗体
12、检测 HIV HIV抗体检测的实验室要求抗体检测的实验室要求n应符合国家对实验室生物安全的有关要求应符合国家对实验室生物安全的有关要求n实验室的质量控制按实验室的质量控制按全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范（20152015）相关章节规定执行相关章节规定执行21HIV抗体检测 HIV HIV抗体检测的目的和要点抗体检测的目的和要点n目的目的：1 1、HIVHIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。 2 2、以诊断为目的的检测是为了确定个体、以诊断为目的的检测是为了确定个体HIVHIV感染状感染状 况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需况，包
13、括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需 要进行的体检等。要进行的体检等。 3 3、以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播、以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播 HIVHIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4 4、以监测为目的的检测是为了了解不同人群、以监测为目的的检测是为了了解不同人群HIVHIV感感 染率及其变化趋势，包括高危人群、重点人群和染率及其变化趋势，包括高危人群、重点人群和 一般人群。一般人群。 222022-4-1323HIV抗体检测n要点要点：1 1、根据目的选择检测方法及检测策略。、根据目的选择检测方法及检测策略。 2 2、严格遵守实验室
14、、严格遵守实验室SOPSOP。 3 3、结果判定以试剂盒说明书为标准。、结果判定以试剂盒说明书为标准。 4 4、筛查试验有反应，须做补充试验。补充试验包、筛查试验有反应，须做补充试验。补充试验包 括括抗体抗体确证试验（确证试验（WBWB、RIBA/LIARIBA/LIA）和核酸）和核酸 试验（定性和定量）。试验（定性和定量）。 24HIV抗体检测常规常规HIVHIV抗体检测方法抗体检测方法 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISAELISA） 化学发光或免疫荧光试验（化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFACIA/IFA） 快速检测法（快速检测法（RTRT）：金标法、硒标法、明胶颗粒凝集）
15、：金标法、硒标法、明胶颗粒凝集 试验（试验（PAPA） 蛋白免疫印迹试验（蛋白免疫印迹试验（WBWB）、条带）、条带/ /线性免疫试验（线性免疫试验（RIBARIBA /LIA /LIA）筛查方法筛查方法抗体确证试抗体确证试验验25HIV抗体检测 结果报告结果报告n筛查报告筛查报告：筛查试验无反应报告为：筛查试验无反应报告为“HIVHIV抗体阴性抗体阴性”；有；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIVHIV抗体阴性抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行需进行“补充试验补充试验”（
16、本中心只提供本中心只提供WBWB试验试验），报告为），报告为“HIVHIV感染感染待确定待确定”，不能出具阳性报告。，不能出具阳性报告。n确证报告确证报告：符合：符合HIV-1HIV-1阳性判断标准，报告阳性判断标准，报告“HIV-1HIV-1抗体阳抗体阳性性”，符合，符合HIV-2HIV-2抗体阳性判断标准，报告抗体阳性判断标准，报告“HIV-2HIV-2抗体阳抗体阳性性”；符合阴性判断标准，报告；符合阴性判断标准，报告“HIVHIV抗体阴性抗体阴性”；符合；符合不确定判定标准，报告不确定判定标准，报告“HIVHIV抗体不确定抗体不确定”，备注中注明，备注中注明“2424周后复检周后复检”。
17、26质量控制n酶免或发光法抗体检测的室内质量控制酶免或发光法抗体检测的室内质量控制n快速法抗体检测质控快速法抗体检测质控27质量控制 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制酶免或发光法抗体检测的室内质量控制n试剂盒内部对照试剂盒内部对照：试剂盒内提供的阴阳性对照血清，用于判断每：试剂盒内提供的阴阳性对照血清，用于判断每次实验的有效性，但次实验的有效性，但不能作为室内质控品用不能作为室内质控品用。n室内质控品（外部对照）室内质控品（外部对照）： 1 1、为试剂盒组分的外部质控品，是为监控检测的重复性而设置，、为试剂盒组分的外部质控品，是为监控检测的重复性而设置，质控品定值必须为质控品定值必须为弱阳性
18、弱阳性。 2 2、可判断该批样品检测的有效性，因此，每次实验必须含室内质、可判断该批样品检测的有效性，因此，每次实验必须含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。控品，其结果无效，必须重新试验。28质量控制nLevey-JenningsLevey-Jennings质控图质控图l质控图参数质控图参数：算术平均值（：算术平均值（X）、标准差（）、标准差（S S）、变异系数）、变异系数（CVCV）及控制限。）及控制限。l控制规则控制规则：告警（：告警（1 12S2S）、失控（）、失控（1 13S3S）29质量控制1 1、告警（、告警（1 12S2S）：当外部对照的）：当外部对照的S/COS/CO值超过
19、值超过 2S2S范围时，系统处于告警状态，范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。警告警告: :1 12S2S规则违背规则违背30质量控制2 2、失控（、失控（1 13S3S）：当外部对照的）：当外部对照的S/COS/CO值超过值超过 3S3S范围时，系统处于失控状态，范围时，系统处于失控状态，本次结果不能被接受。本次结果不能被接受。失控失控: :1 13S3S规则违背规则违背31质量控制n质控图的分析及失控处理质控图的分析及失控处理 实验室应建立质控图分析及失控情况处理的程序。当实验室应建立质控图分析及失控情况处理的程序。
20、当出现失控时，必须找出发生问题的原因，找出解决问题的出现失控时，必须找出发生问题的原因，找出解决问题的方法，并消除原因。方法，并消除原因。32质量控制 快速检测质控快速检测质控n试剂内对照试剂内对照 在质控窗口内出现在质控窗口内出现质控带质控带，该质控带是试剂自带的内，该质控带是试剂自带的内部过程质控，说明实验操作全部完成并且实验所用材料处部过程质控，说明实验操作全部完成并且实验所用材料处于工作状态。于工作状态。清洁的检测区背景清洁的检测区背景是内部阴性过程质控。如是内部阴性过程质控。如试验完成后未呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，试验完成后未呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结
21、果无效，样品必须重检。该试验结果无效，样品必须重检。33实验室质量控制n室内质控品对照室内质控品对照1 1、可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳、可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性性 样品和阴性样品。样品和阴性样品。不能使用酶联试验的外部质控品不能使用酶联试验的外部质控品。 更换试剂批号更换试剂批号 更换检测人员更换检测人员2 2、下列情况需做质量控制、下列情况需做质量控制 更换包装更换包装 更换厂家更换厂家 3 3、建议：每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日、建议：每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测量大于检测量大于5050份样品，至少应做份样品，
22、至少应做2 2次质控。次质控。34实验室检测策略n窗口期窗口期：从：从HIVHIV感染人体到感染者血清中的抗体、抗原或感染人体到感染者血清中的抗体、抗原或核酸等感染标志物能被检测出之前的时期。（在窗口期内核酸等感染标志物能被检测出之前的时期。（在窗口期内的血液已有感染性。现有诊断技术检测的血液已有感染性。现有诊断技术检测HIVHIV抗体、抗原和抗体、抗原和核酸的窗口期分别为感染后的核酸的窗口期分别为感染后的3 3周周、2 2周和周和1 1周左右。）周左右。）nHIVHIV抗体筛查试验抗体筛查试验：初步了解机体血液或体液中有无：初步了解机体血液或体液中有无HIV HIV 抗体的检测方法，也包括同
23、时检测抗体和抗原的方法。抗体的检测方法，也包括同时检测抗体和抗原的方法。nHIVHIV补充试验补充试验：在获得筛查试验结果后，为了准确判断，：在获得筛查试验结果后，为了准确判断，继续检测机体血液或体液中有无继续检测机体血液或体液中有无HIVHIV抗体或核酸的方法，抗体或核酸的方法，包括抗体确证试验和核酸试验。包括抗体确证试验和核酸试验。35实验室检测策略36实验室检测策略n使用抗体检测试剂的筛查检测流程（三代试剂）使用抗体检测试剂的筛查检测流程（三代试剂）试剂1有反应无反应两种试剂均有反应一有，一无均无反应补充试验报告HIV抗体阴性37实验室检测策略n使用抗原抗体检测试剂的筛查流程（四代试剂）
24、使用抗原抗体检测试剂的筛查流程（四代试剂）抗原抗体检测试剂有反应抗体检测均有反应一有，一无补充试验均无反应HIV-1核酸试验或P24抗原试验或24周后随访无反应报告HIV抗体阴性，P24抗原阴性38HIV感染/AIDS的诊断n诊断原则诊断原则 以实验室检测为依据，结合临床表现和参考流行病以实验室检测为依据，结合临床表现和参考流行病学资料综合进行。学资料综合进行。HIVHIV抗体和病原学检测是确诊抗体和病原学检测是确诊HIVHIV感染的感染的依据；流行病学史是诊断急性期和婴幼儿依据；流行病学史是诊断急性期和婴幼儿HIVHIV感染的重要感染的重要参考；参考；CD4CD4+ +T T淋巴细胞检测和临
25、床表现是淋巴细胞检测和临床表现是HIVHIV感染分期诊感染分期诊断的主要依据；断的主要依据；AIDSAIDS的指征性疾病是的指征性疾病是AIDSAIDS诊断的重要依诊断的重要依据。据。39HIV感染/AIDS的诊断nHIVHIV感染的诊断感染的诊断l成人、青少年及成人、青少年及1818个月以上儿童符合下列一项即可诊断个月以上儿童符合下列一项即可诊断：HIVHIV抗体筛查试验有反应和抗体筛查试验有反应和HIVHIV抗体确证试验阳性；抗体确证试验阳性；HIVHIV抗体筛查试验有反应和核酸定性试验阳性；抗体筛查试验有反应和核酸定性试验阳性；HIVHIV抗体筛查试验有反应和核酸定量试验抗体筛查试验有反
26、应和核酸定量试验5000cps/ml5000cps/ml；有流行病学史或艾滋病相关临床表现，两次有流行病学史或艾滋病相关临床表现，两次HIVHIV核酸检测均为阳性；核酸检测均为阳性；HIVHIV分离试验阳性。分离试验阳性。40HIV感染/AIDS的诊断l1818个月龄及以下儿童符合下列一项即可诊断个月龄及以下儿童符合下列一项即可诊断：为为HIVHIV感染母亲所生和两次感染母亲所生和两次HIVHIV核酸检测均为阳性（第二次检测需在出核酸检测均为阳性（第二次检测需在出生生4 4周后采样进行）；周后采样进行）；有医源性暴露史，有医源性暴露史，HIVHIV分离试验结果阳性或两次分离试验结果阳性或两次H
27、IVHIV核酸检测均为阳性；核酸检测均为阳性；为为HIVHIV感染母亲所生和感染母亲所生和HIVHIV分离试验阳性。分离试验阳性。41HIV感染/AIDS的诊断nAIDSAIDS的诊断的诊断l成人及成人及1515岁（含岁（含1515岁）以上青少年符合下列一项即可诊岁）以上青少年符合下列一项即可诊断：断：HIVHIV感染和感染和CD4CD4+ +T T淋巴计数淋巴计数200/mm200/mm3 3 ；HIVHIV感染和伴有至少一种成人感染和伴有至少一种成人AIDSAIDS指征性疾病。指征性疾病。42HIV感染/AIDS的诊断l1515岁以下儿童符合下列一项即可诊断：岁以下儿童符合下列一项即可诊断：HIVHIV感染和感染和CD4CD4+ +T T淋巴细胞百分比淋巴细胞百分比25%(1225%(12月龄月龄) )，或，或20%(1220%(12月龄月龄3636月龄月龄) )，或，或15%(3715%(37月龄月龄6060月龄月龄) )，或，或CD4CD4+ +T T淋巴细胞计数淋巴细胞计数200/mm200/mm3 3(514(514岁岁) )；HIVHIV感染和至少伴有一种儿童感染和至少伴有一种儿童AIDSAIDS指征性疾病。指征性疾病。43442022-4-1345
