1、性病实验室检查性病实验室检查班后业务学习班后业务学习地点：行政楼5楼会议室时间：2014年11月23日性传播疾病实验室性传播疾病实验室相关检查相关检查一、梅毒、一、梅毒、淋病、淋病、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、生殖器疱疹、软下疳、细菌性阴道病；生殖器疱疹、软下疳、细菌性阴道病；二、各性病的实验室检测的检测二、各性病的实验室检测的检测方法及临床意义；方法及临床意义；概述概述历史上：（传统历史上：（传统） 把通过性活动传染的疾病称为把通过性活动传染的疾病称为性病 （Venereal diseases, VD） 主要指: 梅毒(syphilis) 淋病(gonorrhea)
2、性病肉芽肿 软性下疳四种又称又称经典性病经典性病概念更新概念更新上世纪年代以来发现上世纪年代以来发现许多病原体也可以通过许多病原体也可以通过性生活性生活传播传播概念有了大幅度的更新概念有了大幅度的更新迄今为止大约已发现余种性病迄今为止大约已发现余种性病同时：同时：四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方法，明显地得到了抑制四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方法，明显地得到了抑制 性病的发病性病的发病“顺位谱顺位谱”，有了变化，鲜为人知的性病提前，而久为人知，有了变化，鲜为人知的性病提前，而久为人知的性病占到了后位的性病占到了后位 19701970年，世界卫生组织把旧名称年，世界卫生组织把旧名称“性
3、病性病”改为改为“性传播疾病性传播疾病”。 （Sexually transmitted diseases, STDSexually transmitted diseases, STD） 性病（性病（VDVD）：）： 是指通过性交传染的、具有明显生殖器损是指通过性交传染的、具有明显生殖器损 害症状的全身性疾病。害症状的全身性疾病。4 4种种性传播疾病（性传播疾病（STDSTD）：）： 是指通过性接触可以传染的一组传染病是指通过性接触可以传染的一组传染病, ,在在 我国我国, ,人们简称为性病人们简称为性病 。包容。包容2020余种余种病毒病毒生殖器疱疹生殖器疱疹 单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒(HSV
4、) (HSV) (主要由主要由HSV-2HSV-2引起引起) )生殖器生殖器CMVCMV感染感染巨细胞病毒巨细胞病毒(CMV(CMV) )乙型肝炎乙型肝炎 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(HBV)(HBV)甲型肝炎甲型肝炎 甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒(HAV)(HAV)尖锐湿疣尖锐湿疣 人乳头瘤病毒人乳头瘤病毒(HPV)(HPV)生殖器传染性软疣生殖器传染性软疣 传染性软疣病毒传染性软疣病毒获得性免疫缺陷综合征获得性免疫缺陷综合征(AIDS)(AIDS)人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒(HIV(HIV) )非细菌性微生物非细菌性微生物性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿 (CT(CTL L型引起型引起)
5、)非淋菌性尿道非淋菌性尿道( (宫颈宫颈) ) 炎炎 沙眼衣原体沙眼衣原体(CT(CTD DK K型引起型引起) ) 解脲支原体（解脲支原体（UUUU） 人型支原体人型支原体(MH)(MH) 生殖道支原体生殖道支原体(GU)(GU)梅毒梅毒 梅毒梅毒( (苍白苍白) )螺旋体螺旋体(TP)(TP)细菌细菌淋病淋病 奈瑟淋病双球菌奈瑟淋病双球菌(NG) (NG) 腹股沟肉芽肿腹股沟肉芽肿 肉芽肿荚膜杆菌肉芽肿荚膜杆菌(DG,CBG)(DG,CBG)软下疳软下疳 杜克雷嗜血杆菌（杜克雷嗜血杆菌（HD)HD)细菌性阴道炎细菌性阴道炎 加特纳嗜血杆菌加特纳嗜血杆菌(GV)(GV)志贺氏菌属志贺氏菌属
6、痢疾志贺氏菌感染痢疾志贺氏菌感染弯曲杆菌病弯曲杆菌病 弯曲杆菌弯曲杆菌 B B群链球菌群链球菌 阴部感染及阴道病阴部感染及阴道病细菌性阴道病细菌性阴道病 某些阴道厌氧菌某些阴道厌氧菌真菌真菌由白色念珠菌由白色念珠菌/ /拟酵母菌：拟酵母菌： 念珠菌性阴道炎念珠菌性阴道炎 念珠菌性龟头包皮炎念珠菌性龟头包皮炎 外阴阴道真菌感染外阴阴道真菌感染表浅部真菌：表浅部真菌： 股癣股癣 原虫原虫 ： 滴虫性阴道炎滴虫性阴道炎 尿道炎（阴道毛滴虫）尿道炎（阴道毛滴虫） 阿米巴病（溶组织阿米巴原虫）阿米巴病（溶组织阿米巴原虫） 蓝氏贾第鞭毛虫感染蓝氏贾第鞭毛虫感染体表寄生虫：体表寄生虫： 阴虱病（阴虱）阴虱病
7、（阴虱） 阴部疥（疥螨）阴部疥（疥螨） 让患者能接受让患者能接受 社会性很强的疾病社会性很强的疾病我国重点防治的性病我国重点防治的性病艾滋病艾滋病(AIDS)梅毒梅毒(syphilis)尖锐湿疣尖锐湿疣(condyloma acuminatum)(condyloma acuminatum)淋病淋病( (Gonorrhea)生殖器疱疹生殖器疱疹( (genital herpes)非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎( (NGU) )软下疳软下疳( (chancroid)性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿( (lymphogranuloma Venereum)STDSTD的诊断：的诊断： 病史病史接触史接触
8、史 临床表现临床表现 实验室检查实验室检查STDSTD监测和疗效判断的重要依据监测和疗效判断的重要依据 实验室检查实验室检查性病实验室检查特点性病实验室检查特点诊断技术种类较多（诊断技术种类较多（形态学、微生物学、免疫学、分形态学、微生物学、免疫学、分 子生物学等许多检子生物学等许多检测方法）测方法）临床检验工作中不确定性临床检验工作中不确定性（需借助图谱病原体形态（需借助图谱病原体形态 典型和不典型，可借助书籍典型和不典型，可借助书籍资料篇幅有限资料篇幅有限疾病的社会性疾病的社会性（健康、精神、经济、家庭和声誉健康、精神、经济、家庭和声誉）性病实验室诊断原则性病实验室诊断原则慎重：慎重：不能
9、盲目滥用各种非标准检测方法、注重社会效益不能盲目滥用各种非标准检测方法、注重社会效益 和客观条件，和客观条件，新技术：新技术：对待新技术一定要科学比对，慎重使用对待新技术一定要科学比对，慎重使用梅毒梅毒一、梅毒的临床分期一、梅毒的临床分期后天梅毒后天梅毒 ：一期梅毒一期梅毒 二期梅毒二期梅毒 三期梅毒三期梅毒( (晚期梅毒晚期梅毒) ) 先天梅毒（胎传梅毒）先天梅毒（胎传梅毒）梅毒一期皮损-硬下疳梅毒二期皮损梅毒晚期损害二、梅毒的实验室诊断二、梅毒的实验室诊断 1. 1.检查病原体的试验检查病原体的试验 2.2.检测抗体检测抗体血清学检查血清学检查 检查病原体的试验检查病原体的试验1.1.暗视
10、野显微镜检查法（暗视野显微镜检查法（WHOWHO推荐）推荐）2.Fontana-Tribondean2.Fontana-Tribondean镀银染色法镀银染色法（难、敏感性差）（难、敏感性差）3.3.单克隆免疫银光法（单克隆免疫银光法（DFIDFI）-PCR-PCR暗视野显微镜下见纤细螺旋状微生物，暗视野显微镜下见纤细螺旋状微生物，长约长约4 414 m14 m，宽约，宽约2 m2 m，8 81414个规则的螺旋，折光性强，运动缓慢，个规则的螺旋，折光性强，运动缓慢，有规律。有规律。螺旋有三种活动方式，旋转式，螺旋有三种活动方式，旋转式， 蛇形蛇形式，伸缩式。式，伸缩式。 暗视野显微镜检查临床
11、意义暗视野显微镜检查临床意义1.1.可确证梅毒可确证梅毒- -直接检查到梅毒螺旋体直接检查到梅毒螺旋体2.2.对早期现症梅毒检测最好的方法（一期、二期梅毒皮损或淋巴节结、对早期现症梅毒检测最好的方法（一期、二期梅毒皮损或淋巴节结、孕妇羊膜穿刺）孕妇羊膜穿刺）需要仪器设备：暗视野显微镜需要仪器设备：暗视野显微镜选择试验注意事项选择试验注意事项1.1.清洁皮损表面清洁皮损表面用生理盐水清洁，用生理盐水清洁，不能用消毒液不能用消毒液2.2.取材取材- -渗出液、尽量避免出血渗出液、尽量避免出血（降低阳性率）（降低阳性率）3.3.口腔溃疡要谨慎口腔溃疡要谨慎4.4.阴性结果不能排除梅毒可能性阴性结果不
12、能排除梅毒可能性- -取材不当、皮损致数量不足、近取材不当、皮损致数量不足、近期使用抗生素、损害接近自然消退等期使用抗生素、损害接近自然消退等梅毒血清学检查梅毒血清学检查【原理】【原理】当机体感染梅毒螺旋体后，经过当机体感染梅毒螺旋体后，经过一定潜伏期，在血清中产生一定数量一定潜伏期，在血清中产生一定数量的抗类脂质抗体（的抗类脂质抗体（非特异性的反应素非特异性的反应素）和抗密螺旋体抗体（和抗密螺旋体抗体（特异性免疫球蛋特异性免疫球蛋白白），主要是），主要是IgGIgG抗体，因此，可以用抗体，因此，可以用各种免疫学的方法来检测反应素或抗各种免疫学的方法来检测反应素或抗体，协助梅毒的诊断。体，协助
13、梅毒的诊断。 两组试验：两组试验：1.1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验2.2.梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验两组试验的目的都是检测抗体两组试验的目的都是检测抗体非梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗非梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗- -脂质抗体脂质抗体- -非特异性非特异性）梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗- -梅毒螺旋体抗体梅毒螺旋体抗体- -特异性特异性）非特异性梅毒的血清学初筛试验非特异性梅毒的血清学初筛试验方法：方法：1.1.性病研究实验室试验性病研究实验室试验VDRLVDRL2.2.不加热血清反应素试验不加热血清反应素试验USR
14、USR3.3.快速血浆反应素环状卡片试验快速血浆反应素环状卡片试验RPRRPR4.4.不加热甲苯胺红血清试验不加热甲苯胺红血清试验TRUSTTRUST 1.1.性病性病研究实验室试验（研究实验室试验（venersal disease venersal disease research laboratory testresearch laboratory test，VDRL)VDRL)： VDRLVDRL试验所用抗原是从牛心中提取心磷脂加上试验所用抗原是从牛心中提取心磷脂加上卵磷脂和胆固醇，梅毒螺旋体在破坏组织的过程卵磷脂和胆固醇，梅毒螺旋体在破坏组织的过程中，体内释放一种抗原性心磷脂，它刺激机
15、体产中，体内释放一种抗原性心磷脂，它刺激机体产生反应素，这种反应素与牛心中提取的心磷脂在生反应素，这种反应素与牛心中提取的心磷脂在体外有抗原抗体反应。体外有抗原抗体反应。实验步骤：实验步骤： 将待检血清先灭活，吸取将待检血清先灭活，吸取0.5ml0.5ml血清滴入玻片的圆圈中，血清滴入玻片的圆圈中，使血清涂使血清涂布扩散到整个圆圈布扩散到整个圆圈。用。用1ml1ml注射器装上专用针头取一滴抗原试剂加入圆注射器装上专用针头取一滴抗原试剂加入圆圈内。用转动器或手转动玻片圈内。用转动器或手转动玻片4min4min，每分钟约，每分钟约180180次左右，立即判断结次左右，立即判断结果。果。* * *
16、*试验时应用已知阳性血清对照。试验时应用已知阳性血清对照。结果判定：结果判定： “”阴性阴性: :仅见微小颗粒，液体浑仅见微小颗粒，液体浑浊。浊。 “+”“+”弱阳性弱阳性: :肉眼见小的块状物或者肉眼见小的块状物或者用放大镜见到块状物，液体浑浊。用放大镜见到块状物，液体浑浊。 +阳性阳性: :肉眼见大的或中等大的块肉眼见大的或中等大的块状物。状物。VDRLVDRL玻片定量试验：玻片定量试验： 将待测血清用生理盐水在小试管中作将待测血清用生理盐水在小试管中作6 6个稀释度，原倍血清、个稀释度，原倍血清、1:21:2、1:41:4、1:81:8、1:161:16、1:321:32，每个稀释度样本
17、取，每个稀释度样本取0.5ml0.5ml加于玻片圆圈中，按加于玻片圆圈中，按定性的方法测定和判断结果。定性的方法测定和判断结果。 2. 2. 不加热血清反应素试验（不加热血清反应素试验（unheated serum reagin testunheated serum reagin test，USRUSR）：）： 该试验用改良的该试验用改良的VDRLVDRL抗原，稀释后离心沉淀，于沉淀中加入抗原，稀释后离心沉淀，于沉淀中加入EDTAEDTA（二胺四乙酸二钠）氯化胆碱可起化学（二胺四乙酸二钠）氯化胆碱可起化学 灭活灭活 作用，所以血清不必灭作用，所以血清不必灭活，抗原不必每天配制，在活，抗原不必每
18、天配制，在4 488冰箱中保存冰箱中保存6 6个月。个月。 (1) USR(1) USR玻片定性试验玻片定性试验方法：方法：吸取吸取5050l l血清放入反应板圈内，并均匀涂布整血清放入反应板圈内，并均匀涂布整个圈。个圈。 将将USRUSR抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本中加个标本中加1 1滴抗原液。滴抗原液。 将反应板置旋转器旋转将反应板置旋转器旋转4min4min，(180(1805)r/min5)r/min。 立即用肉眼或显微镜观察结果。立即用肉眼或显微镜观察结果。 本实验应用已知阳性血清作阳性对照。本实验应用已知阳性血清作阳性对照。结果判定
19、：结果判定：根据凝集反应絮状物大小判断阳性程度根据凝集反应絮状物大小判断阳性程度强阳性强阳性(3(34+)4+)： 大或中等大小的絮状物，溶液清亮。大或中等大小的絮状物，溶液清亮。阳性阳性(2+)(2+)： 絮状物比较小，悬液较清亮。絮状物比较小，悬液较清亮。 弱阳性弱阳性(1+)(1+)： 絮状物比较小，均匀分布，液体混浊。絮状物比较小，均匀分布，液体混浊。可疑可疑( () )： 抗原颗粒较粗一般属于阴性反应。抗原颗粒较粗一般属于阴性反应。 阴性阴性( () )： 抗原颗粒均匀，针状细小。抗原颗粒均匀，针状细小。 （2 2）USRUSR定量试验定量试验 正反应板圆圈内加入正反应板圆圈内加入5
20、050l l等渗盐水等渗盐水( (一般做一般做6 6个个滴 度 ， 有 必 要 者 应 继 续 稀 释滴 度 ， 有 必 要 者 应 继 续 稀 释 ) ) 。 吸取吸取5050l l血清加到第一孔混匀后，再吸取血清加到第一孔混匀后，再吸取5050l l至第二孔稀释，依此作倍比稀释至第二孔稀释，依此作倍比稀释(1:2(1:21:64)1:64)，最，最后 所 稀 释 的 圆 圈 内 应 弃 去后 所 稀 释 的 圆 圈 内 应 弃 去 5 05 0 l l 每个圆圈加每个圆圈加1 1滴抗原混匀，将反应板置旋转器旋滴抗原混匀，将反应板置旋转器旋转转4min4min，(180(1805)5)转转/
21、min/min。观察结果同定性试验。观察结果同定性试验。 记录出现记录出现1+1+阳性反应的最高血清稀释倍数，即阳性反应的最高血清稀释倍数，即抗体效价。抗体效价。 3. 3. 快速血浆反应环状卡片试验（快速血浆反应环状卡片试验（rapio plasma reagin card testrapio plasma reagin card test，RPR)RPR) 原理与原理与USRUSR试验基本相同，其优点是试验基本相同，其优点是RPRRPR抗原中加入了活性碳颗粒，抗原中加入了活性碳颗粒，试验在特制的白色纸卡上进行，因此，容易判断结果，肉眼即可观察，试验在特制的白色纸卡上进行，因此，容易判断结果
22、，肉眼即可观察，不需显微镜，血浆也可进行检测。不需显微镜，血浆也可进行检测。 (1) RPR(1) RPR定性试验定性试验吸取吸取5050l l血清或血浆放在白色卡片圈内，并均血清或血浆放在白色卡片圈内，并均匀涂布整个圈内匀涂布整个圈内( (每张卡片有每张卡片有1010个或个或1212个反应圈个反应圈) )。 将将RPRRPR抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本中加个标本中加1 1滴抗原。滴抗原。 将卡片置旋转器旋转将卡片置旋转器旋转8min8min，(100(1005)5)转转/min/min。 立即在明亮光线下观察结果。立即在明亮光线下观察结果。
23、结果判定：结果判定： 阳性：圆圈内出现小至大的黑色絮状物为阳性，不分其阳性的程度。阳性：圆圈内出现小至大的黑色絮状物为阳性，不分其阳性的程度。必 要 时 可 以 依 絮 状 物 的 大 小 和 多 少 ， 用必 要 时 可 以 依 絮 状 物 的 大 小 和 多 少 ， 用 “ + ”+ ” 号 表 示 。号 表 示 。 阴性：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散为阴性。阴性：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散为阴性。 (2) RPR(2) RPR定量试验定量试验在纸卡圆圈内加入在纸卡圆圈内加入5050l l等渗盐水等渗盐水( (一般做一般做6 6个滴度，超过者应继续稀个滴度，超过者应继
24、续稀释释) )。 吸吸5050l l血清或血浆系列稀释血清或血浆系列稀释(1:2(1:21:64)1:64)，最后所稀释的圆圈内应弃，最后所稀释的圆圈内应弃去去5050l l。 滴加滴加1 1滴抗原混匀，旋转时间、速度、观察结果同定性试验。滴抗原混匀，旋转时间、速度、观察结果同定性试验。 记录出现记录出现1+1+阳性反应的最高血清稀释倍数，即抗体效价。阳性反应的最高血清稀释倍数，即抗体效价。 4.4.甲苯胺红不加热血清试验（甲苯胺红不加热血清试验（TRUSTTRUST）【原理】【原理】 TRUSTTRUST试验原理与试验原理与RPRRPR试验原理相同，差别在于试验原理相同，差别在于TRUSTT
25、RUST抗原中加入抗原中加入甲苯胺红染料颗粒代替碳颗粒作为指示物，使阳性结果出现红色絮状甲苯胺红染料颗粒代替碳颗粒作为指示物，使阳性结果出现红色絮状凝集现象，阴性结果甲苯胺红颗粒聚集于中央一点或均匀分散。凝集现象，阴性结果甲苯胺红颗粒聚集于中央一点或均匀分散。 【方法】【方法】 TRUSTTRUST试验方法同试验方法同RPRRPR试验。试验。 【结果】【结果】 TRUSTTRUST试验结果判断同试验结果判断同RPRRPR试验。试验。 【注意事项】【注意事项】 1 1实验环境适宜温度为实验环境适宜温度为23232929；抗原应保存；抗原应保存在在44冰箱；应防止冻结，以免破坏；实验前抗原冰箱；应
26、防止冻结，以免破坏；实验前抗原恢复到室温。恢复到室温。 2 2校准针头，校准针头，RPRRPR、TRUSTTRUST等抗原等抗原( (用用9 9号针头号针头) )为为60601 1滴滴/ml/ml，USRUSR抗原抗原( (用用1212号针头号针头) )为为45451 1滴滴/m1/m1。一 般 试 剂 盒 内 已 有 配 套 专 用 针 头 。一 般 试 剂 盒 内 已 有 配 套 专 用 针 头 。 3 3 用 用 旋 转 式 摇 床旋 转 式 摇 床 ， 不 用 平 衡 式 振 荡 仪 。， 不 用 平 衡 式 振 荡 仪 。 4 4 试 验 完 毕 ， 立 即 观 察 结 果 。 试
27、验 完 毕 ， 立 即 观 察 结 果 。 5 5 为 防 假 阴 性 ， 试 验 最 好 用 纯 血 清 。 为 防 假 阴 性 ， 试 验 最 好 用 纯 血 清 。 6 6初筛试验阳性特别是初诊患者，应做确证试验以排除生物学假阳性。初筛试验阳性特别是初诊患者，应做确证试验以排除生物学假阳性。 7 7避免出现避免出现“前带前带”现象现象，对可疑者应将血清稀释后测定。，对可疑者应将血清稀释后测定。 8 8定性试验阳性都必须做定量试验，阳性者需了解抗体效价的高低，定性试验阳性都必须做定量试验，阳性者需了解抗体效价的高低，以便监视疾病活动情况和观察疗效。定量试验还可排除以便监视疾病活动情况和观察
28、疗效。定量试验还可排除 前带现象前带现象 。四种初试验筛方法的比较VDRLUSRRPRTRUST抗原成分心磷脂、卵磷脂、 胆固醇同前+EDTA+氯化胆碱同前+EDTA+氯化胆碱+活性炭同前+EDTA+氯化胆碱+甲苯胺红抗原稳定性不稳定,1天稳定4 8 保存12个月稳定4 8 保存12个月稳定4 8 保存12个月血清试验前处理需灭活不需灭活不需灭活不需灭活反应板及结果判断玻片，肉眼或显微镜玻片，肉眼或显微镜纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼注释唯一用于检查脑脊液的试验，诊断神经梅毒结果容易判断结果容易判断一期敏感性（未经治疗）74%-87%77%-88%77%-99%77%-99%二期敏感性（未经治疗）1
29、00%100%100%100%四种初筛方法四种初筛方法 原理：相同原理：相同 目的：相同目的：相同 临床意义：相同临床意义：相同 不同：方法学上改良不同：方法学上改良四种初筛方法四种初筛方法原理：原理： 当人体感染梅毒螺旋体当人体感染梅毒螺旋体4 4周周1010周左右后，血清中可产生一定数量的周左右后，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体( (主要是主要是IgMIgM和和IgG) IgG) 目的：目的： 检测检测 抗抗- -脂质抗体脂质抗体四种初筛方法四种初筛方法方法：方法：定性法定性法-意义局限意义局限定量定量抗体的效价抗体的效价滴度滴度（倍
30、比稀释）（倍比稀释）通过看化验单可判别定量或定性通过看化验单可判别定量或定性阳性阳性原倍、原倍、1 1：2/12/1：4/14/1：8/1:648/1:64梅毒初筛试验定性定量梅毒初筛试验定性定量 阴性阴性 原倍原倍 1 1：2 12 1：4 41 1：8 81 1：16161 1：32321 1：6464- -+梅毒血清学初筛实验临床意义梅毒血清学初筛实验临床意义1.1.辅助诊断梅毒辅助诊断梅毒 初筛实验有较高的敏感性和特异性初筛实验有较高的敏感性和特异性2.2.观察滴度变化可用于疗效观察观察滴度变化可用于疗效观察3.3.鉴别早期或晚期梅毒鉴别早期或晚期梅毒（前滴度（前滴度快后慢快后慢）4.
31、4.鉴别先天性梅毒鉴别先天性梅毒（被动出生（被动出生3-43-4月转阴，不降反升）月转阴，不降反升）5.5.发现复发或再感染病人复发或再感染时发现复发或再感染病人复发或再感染时 血清阳转或滴度上升，定血清阳转或滴度上升，定量试验量试验2 2次结果，滴度上升次结果，滴度上升2 2个稀释度以上（个稀释度以上（ 1:21:81:21:8以以上上 ）才可判断为上升，要排除技术性因素，）才可判断为上升，要排除技术性因素，相同的实验方相同的实验方法才能进行滴度比较法才能进行滴度比较6.6.梅毒的筛查试验梅毒的筛查试验注意事项注意事项假阳性假阳性 ： 1 1生理性生理性 孕妇孕妇0.4%0.4%2 2胶原性
32、或自身免疫性病胶原性或自身免疫性病 麻风、系统红斑狼疮麻风、系统红斑狼疮3 3某些急性发热病某些急性发热病 后后 风疹、疟疾、水痘、肺炎风疹、疟疾、水痘、肺炎4 4免疫接种免疫接种鉴别方法：鉴别方法：抗体效价抗体效价 特异性试验证实特异性试验证实 特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验目的目的: : 检测特异性抗梅毒螺旋体抗体检测特异性抗梅毒螺旋体抗体- -特异性强原理：原理：(FTA-ABS)(FTA-ABS) 完整的梅毒螺旋体作抗原完整的梅毒螺旋体作抗原TPHA/TPPATPHA/TPPA 超声裂解梅毒螺旋体超声裂解梅毒螺旋体提取抗原族致敏载提取抗原族致敏载体体致敏的
33、载体致敏的载体抗梅毒抗体抗梅毒抗体/ /免疫血清免疫血清适宜条件适宜条件下下肉眼可见凝集肉眼可见凝集特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验方法：方法：1.1.梅毒螺旋体血球凝集试验（梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHATPHA）2.2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPATPPA） 快速、简便、准确而青睐快速、简便、准确而青睐3.3.荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)(FTA-ABS) WHO WHO推荐金标准推荐金标准特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验4. 4. 梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验
34、梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验 TP-ELISATP-ELISA： TP-AbTP-Ab是一种通过基因工程经利用梅毒螺旋是一种通过基因工程经利用梅毒螺旋体多肽抗原（体多肽抗原（KD47KD47、 KD42/KD15KD42/KD15）包被于反应板）包被于反应板的试验。它用双抗原夹心法，同时检测的试验。它用双抗原夹心法，同时检测IgM/IgGIgM/IgG抗抗体，故可用于早期诊断，并避免了单片段抗原混体，故可用于早期诊断，并避免了单片段抗原混合干扰合干扰 5.PCR5.PCR方法（略）方法（略）用于诊断梅毒试验方法选择用于诊断梅毒试验方法选择要求要求准确率（特异性） TPHATPHA在各期梅毒的
35、特异性为在各期梅毒的特异性为98%98%99%99%，敏感性敏感性 治疗前一期：治疗前一期：69% 69% 90%90%；二期；二期100%100%；潜；潜伏期伏期97%97%100%100%；晚期；晚期94%94%1.1.梅毒螺旋体血球凝集试验（梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHATPHA）2.2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPATPPA）敏感性强，特异度高，现为梅毒诊断的金标准敏感性强，特异度高，现为梅毒诊断的金标准 梅毒特异性试验的临床意义梅毒特异性试验的临床意义1.1.诊断梅毒诊断梅毒 敏感性高、特异性强，是梅毒较好的确证实验敏感性高、特异性强，是梅毒较好的确证实验
36、2.2.早期诊断梅毒（早期诊断梅毒（19S 19S IgMIgM ） 一期梅毒特异性试验比非特异性试验早一周出现，梅毒一期梅毒特异性试验比非特异性试验早一周出现，梅毒感染后第二周就可从血清中测出抗体感染后第二周就可从血清中测出抗体IgMIgM，而，而IgGIgG要在感染要在感染后后4 4周方可测出周方可测出梅毒特异性试验的注意事项梅毒特异性试验的注意事项1.1.定性试验定性试验 一般定性试验阳性即可确诊，定性抗体效价一般定性试验阳性即可确诊，定性抗体效价1 1：80802.2.不能作疗效观察指标不能作疗效观察指标 由于记忆细胞抗体复制能力强，特异性敏感性高，即使经由于记忆细胞抗体复制能力强，特
37、异性敏感性高，即使经 抗梅治疗也终生阳性（阳性现症或既往）抗梅治疗也终生阳性（阳性现症或既往）3.1%3.1%生物学假阳性存在生物学假阳性存在 麻风、传单（嗜异性抗体）麻风、传单（嗜异性抗体）TPPATPPA假阳性，红斑狼疮假阳性，红斑狼疮 FA-ABS FA-ABS呈假阳性呈假阳性不主张叫确证试验不主张叫确证试验梅毒血清学试验选择梅毒血清学试验选择一、用于筛查：一、用于筛查：首选首选-TP-ELISA-TP-ELISA其次其次-初筛试验初筛试验二、由于诊断梅毒（首次）：必须二、由于诊断梅毒（首次）：必须1.1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验/ /梅毒初筛试验梅毒初筛试验
38、 有效价有效价2.2.梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验/TPPA/TPHA/TPPA/TPHA梅毒血清学试验选择梅毒血清学试验选择三、用于疗效观察、治疗后随访：三、用于疗效观察、治疗后随访：非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验/ /梅毒初筛试验梅毒初筛试验 有效价有效价一张完善的检验单报告部分：一张完善的检验单报告部分： 结果：结果： 梅毒血清学初筛试验梅毒血清学初筛试验TRUST 1:16TRUST 1:16阳性阳性（梅毒螺旋体抗原血清学试验）（梅毒螺旋体抗原血清学试验）TPPA TPPA 阳性阳性 签名签名 XXX XXX 日期日期XXXXXXXXXX 其他
39、实验其他实验免疫印迹法：免疫印迹法： 是一种诊断梅毒感染的特异性实验，是一种诊断梅毒感染的特异性实验，胶体金免疫结合技术（胶体金免疫结合技术（TPTPAbAb）：）： 是在酶免结合技术基础上发展起来的是在酶免结合技术基础上发展起来的, , 具有简单、快速、不需任何仪具有简单、快速、不需任何仪器的特点。器的特点。 PCRPCR试验：试验： 多聚酶链反应检测梅毒螺旋体多聚酶链反应检测梅毒螺旋体DNA DNA 三、淋病三、淋病(gonorrhea)(gonorrhea)的实验室诊断的实验室诊断淋病：是我国目前检测八种主要性病中发病人数最淋病：是我国目前检测八种主要性病中发病人数最 多的一种多的一种病
40、因：淋病奈瑟菌病因：淋病奈瑟菌亲和性：人类是唯一宿主，嗜人类泌尿生殖道的柱亲和性：人类是唯一宿主，嗜人类泌尿生殖道的柱 状上皮细胞状上皮细胞特点：局部化脓性感染特点：局部化脓性感染 细菌和毒素细菌和毒素粘膜坏死、脱落、神粘膜坏死、脱落、神 经末梢暴露、炎性浸润、组织液渗出经末梢暴露、炎性浸润、组织液渗出所致疾病所致疾病 主要是泌尿生殖道局部化脓性感染主要是泌尿生殖道局部化脓性感染-淋病淋病 不及时治疗可入侵泌尿生殖道其他部位不及时治疗可入侵泌尿生殖道其他部位附睾、附睾、前列腺炎、前列腺炎、输卵管炎及盆腔炎输卵管炎及盆腔炎 甚至经血液传播全身其他部位淋菌性关节炎、心甚至经血液传播全身其他部位淋菌
41、性关节炎、心内膜炎及脑膜炎等内膜炎及脑膜炎等淋菌性尿道炎淋菌性尿道炎诊断淋病的实验室检查诊断淋病的实验室检查男性患者：男性患者：急性期典型病例急性期典型病例-尿频、尿急、尿痛，局部流脓尿频、尿急、尿痛，局部流脓首选：首选： 试验方法试验方法-分泌物涂片革兰染色分泌物涂片革兰染色 试验目的试验目的-找革兰阴性双球菌找革兰阴性双球菌女性女性可拒绝用此法可拒绝用此法分泌物涂片革兰染色分泌物涂片革兰染色原理：原理：1 1急性患者尿道有大量脓性分泌物急性患者尿道有大量脓性分泌物 2 2淋球菌呈革兰阴性反应，具特殊形态淋球菌呈革兰阴性反应，具特殊形态 3 3有些脓细胞内可有许多淋球菌有些脓细胞内可有许多淋
42、球菌临床意义：临床意义：1.1.镜检结果阳性可初步诊断淋病镜检结果阳性可初步诊断淋病2.2.用于新生儿、婴儿脓漏眼诊断用于新生儿、婴儿脓漏眼诊断 镜检白细胞中吞噬有阴性双球菌者为阳性新生儿淋菌性结膜炎新生儿淋菌性结膜炎 常常在出生常常在出生2 23 3天后双眼出现脓性分天后双眼出现脓性分泌物，剧烈肿胀发红，不能睁眼，如泌物，剧烈肿胀发红，不能睁眼，如不及时治疗还可侵犯到角膜，如角膜不及时治疗还可侵犯到角膜，如角膜发生穿孔会导致失明发生穿孔会导致失明 诊断淋病的实验室检查诊断淋病的实验室检查女性患者及症状不典型的男性患者：女性患者及症状不典型的男性患者：经典方法：经典方法： 淋球菌分离培养淋球菌
43、分离培养原理：原理：1 1标本中有淋球菌标本中有淋球菌 2 2合适的培养基（合适的培养基（T-MT-M选择性培养基）选择性培养基） 3 3生长呈特征性菌落（生长呈特征性菌落（24H24H36H36H） 4 4菌苔氧化酶呈阳性，糖发酵试验符合菌苔氧化酶呈阳性，糖发酵试验符合 5 5菌苔涂片革兰染色呈阴性，菌体形态菌苔涂片革兰染色呈阴性，菌体形态 具特殊性具特殊性淋球菌培养淋球菌培养临床意义临床意义1.1.诊断淋病（金标准）诊断淋病（金标准）2.2.适用于男性女性标本，适用于男性女性标本，WHOWHO推荐的筛查淋病的唯推荐的筛查淋病的唯一方法一方法3.3.判断病人治愈判断病人治愈依据只可选择依据只
44、可选择此方法此方法4.4.-内酰胺酶内酰胺酶阳性：表明该菌阳性：表明该菌对对PG PG ，氨苄西，氨苄西林和阿莫西林林和阿莫西林耐药耐药 淋病病人实验室诊断步骤淋病病人实验室诊断步骤淋菌感染 男性患者 女性患者尿频、尿急、尿道分泌物 脓性宫颈分泌物/无症状 脓性分泌物涂片G-染色 拒绝做 G-双球菌细胞内 取宫颈分泌物 初步诊断 MTM培养基培养 治疗 典型菌落形态 G-双球菌、OX(+)、糖发酵试验 确诊关于取材关于取材正确采集标本是试验结果成功的关键环节正确采集标本是试验结果成功的关键环节涂片取材：涂片取材： 清洁尿道口清洁尿道口 手指由后向前挤出脓液手指由后向前挤出脓液 轻轻涂布玻片上轻
45、轻涂布玻片上 排尿前或排尿后排尿前或排尿后2 23 3小时采集小时采集培养标本采集培养标本采集关键是深度一定要够关键是深度一定要够男性取材：拭子深入尿道男性取材：拭子深入尿道2cm-4cm2cm-4cm处并转动处并转动 蘸取少量粘膜蘸取少量粘膜女性取材：女性取材：子插入宫颈子插入宫颈1 12 2厘米处稍转动并停留厘米处稍转动并停留1010秒秒3030秒，以获得上皮秒，以获得上皮细胞，取出棉拭子时细胞，取出棉拭子时不要碰到阴道壁避免受阴道分泌物污染不要碰到阴道壁避免受阴道分泌物污染其他相关试验其他相关试验1.1.直接免疫银光染色直接免疫银光染色2.SPA2.SPA协同实验协同实验3.3.酶反应酶
46、反应4.4.白细胞脂酶快速法白细胞脂酶快速法5.5.固相酶免疫试验固相酶免疫试验小结小结诊断淋病诊断淋病1 1泌尿生殖道泌尿生殖道分泌物涂片革兰染色分泌物涂片革兰染色找阴性双球菌找阴性双球菌2 2泌尿生殖道分泌物泌尿生殖道分泌物淋球菌分离培养淋球菌分离培养3 3其他方法不能作为常规诊断应用其他方法不能作为常规诊断应用注意标本采集注意标本采集四、非淋菌性尿道炎四、非淋菌性尿道炎-NGU-NGU临床：尿道炎表现，分泌物查不到淋球菌临床：尿道炎表现，分泌物查不到淋球菌临床合并症：临床合并症： 附睾炎、输卵管炎、宫外孕、不孕症等附睾炎、输卵管炎、宫外孕、不孕症等 威胁人们健康威胁人们健康流行病学：流行
47、病学： 西方国家自西方国家自6060年代发病年代发病超过淋病跃超过淋病跃 居居STDSTD首位，国内发病不断增加已占首位，国内发病不断增加已占STDSTD的的 第三位第三位非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎-NGU-NGU病因：病因： 沙眼衣原体沙眼衣原体CTCT（D DK K）40%40%50%50% 支原体支原体（UUUU、MHMH）20%20%30%30% 阴道滴虫、白念和单疱病毒阴道滴虫、白念和单疱病毒10%10%20%20%NGU-CTNGU-CT检测检测生活史特性：严格细胞内寄生生活史特性：严格细胞内寄生亲和性：亲和性： 泌尿生殖道柱状上皮细胞泌尿生殖道柱状上皮细胞血清学试验对诊断衣原体
48、感染价值有限血清学试验对诊断衣原体感染价值有限1.1.迄今止尚无哪一种试验完全适合所有种类的迄今止尚无哪一种试验完全适合所有种类的CTCT的检测的检测2.CT2.CT感染轻微，潜伏期长，影响急性期采血时间配对血清难感染轻微，潜伏期长，影响急性期采血时间配对血清难 以得到以得到3.3.血清抗体持续时间长，单一血清标本只能显示曾经感以前血清抗体持续时间长，单一血清标本只能显示曾经感以前染过染过CTCT4.4.双份血清效价比有双份血清效价比有4 4倍增高才有临床意义倍增高才有临床意义 临床标本直接检查临床标本直接检查- -目前最合适的方法目前最合适的方法NGU-CTNGU-CT检测方法检测方法1.1
49、.细胞涂片的吉姆萨染色细胞涂片的吉姆萨染色- -发现一定数量的包涵体（发现一定数量的包涵体（原体呈紫色，包原体呈紫色，包涵体呈金黄色涵体呈金黄色）不适用于不适用于NGUNGUNGU-CTNGU-CT检测方法检测方法2.2.涂片碘染色法：涂片碘染色法：包涵体中有糖原遇碘呈棕色敏感性包涵体中有糖原遇碘呈棕色敏感性 差，不适用于差，不适用于NGUNGU3.3.直接免疫荧光法染色：直接免疫荧光法染色：敏感性敏感性93%93%，特异性，特异性9696与与 培养并列为金标准对试剂，显微镜质量要求培养并列为金标准对试剂，显微镜质量要求很高，很高， 操作人员技术要求高，价格昂贵操作人员技术要求高，价格昂贵4.
50、4.衣原体酶免疫测定衣原体酶免疫测定EIAEIA：抗：抗CTCT单抗包被固相载体单抗包被固相载体+ + 标本再标本再+ +多克隆抗体多克隆抗体+IgG+IgG酶标抗体酶标抗体酶标仪酶标仪检测检测 适用于批量筛查适用于批量筛查NGUNGU衣原体感染衣原体感染5.5.衣原体分离培养：衣原体分离培养：McCoyMcCoy、HelaHela、 BHK-21BHK-21细胞培养细胞培养NGU-CTNGU-CT检测方法检测方法6.PCR6.PCR7.“7.“立明立明“（Clearview)Clearview)衣原体快速免疫测定法：衣原体快速免疫测定法：原理：沙眼衣原体检测试剂盒采用高特异性的抗体原理：沙眼
