1、性病的实验室诊断性病的实验室诊断1. 有实验室负责人，实验人员分工明确2. 实验室人员应该定期参加培训、进修或专业研讨会3. 有实验室各项管理制度4. 制定常规实验室标准操作程序（SOP）性病实验室的组织管理性病实验室的组织管理性病实验室质量管理性病实验室质量管理n1仪器、设备 实验室所有使用仪器应有使用、保养及维修记录有温控的仪器需每天记录温度n2培养基及试剂 严格按配方及技术要求配制培养基及试剂 对配制的培养基及试剂应有质检 购买的试剂盒应为经国家有关部门检验 合格的产品（附有关证明） 所有培养基及试剂的保存都应符合要求性病实验室质量管理性病实验室质量管理3质控（1）实验室开展室内质控，包
2、括使用阳性 对照和阴性对照质控品（2）定期进行室间质控和参加外部质控4性病实验室诊断技术性病实验室诊断技术 性病是一组传染病，主要通过性的接触传染。 包括细菌、真菌、病毒、衣原体、支原体、螺 旋体、原虫和寄生虫等 性病实验室诊断有着及其重要的作用 正确诊断提供科学依据5病原体病原体淋球菌梅毒螺旋体生殖器疱疹病毒生殖道沙眼衣原体乳头瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血杆菌衣原体念珠菌滴虫疥虫阴虱肝炎病毒病病 种种淋病梅毒:生殖器疱疹:生殖道沙眼衣原体感染:尖锐湿疣:HIV感染/艾滋病:软下疳:性病性淋巴肉芽肿:念珠菌性阴道炎:滴虫性阴道病:疥疮:阴虱病:肝炎（乙、丙）：性传播疾病性传播疾病(STD)/(S
3、TD)/性传播感染性传播感染(STI)(STI) 主要常见性病实验室检测介绍主要常见性病实验室检测介绍n梅毒梅毒n淋病n生殖道沙眼衣原体感染常用梅毒检测方法常用梅毒检测方法n病原学检测病原学检测n血清学检测血清学检测病原学检查病原学检查n原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。n方法：病原学检查的主要方法有暗视野显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查标本采集部位：标本采集部位：一期或二期梅毒的皮肤或粘膜
4、损害一期或二期梅毒的皮肤或粘膜损害 有痂者去痂，先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水，将皮损拭净，轻压皮有痂者去痂，先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水，将皮损拭净，轻压皮损至渗液（避免出血）。然后用载玻片印取渗液，立即检查，未破损至渗液（避免出血）。然后用载玻片印取渗液，立即检查，未破溃者用手术刀刮破皮疹，取渗出液。溃者用手术刀刮破皮疹，取渗出液。淋巴结穿刺液淋巴结穿刺液 以无菌操作法用注射器吸取以无菌操作法用注射器吸取0.3-0.50.3-0.5mlml生理盐水，穿刺入淋巴结，再生理盐水，穿刺入淋巴结，再回吸数次，最后将吸取液涂玻片上，立即检查。回吸数次，最后将吸取液涂玻片上，立即检查。暗视野显微镜检查暗
5、视野显微镜检查n制片制片标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖玻片，在玻片，在暗室中暗室中于暗视野显微镜上油镜观察于暗视野显微镜上油镜观察n观察观察先用低倍镜，再转至高倍镜先用低倍镜，再转至高倍镜梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光，螺旋整齐，梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光，螺旋整齐，运动规律（运动规律（旋转、伸缩或蛇行旋转、伸缩或蛇行运动）运动）梅毒螺旋体特征梅毒螺旋体特征n螺旋整齐，数目固定螺旋整齐，数目固定n折光性强，较其他螺旋体亮折光性强，较其他螺旋体亮n运动缓慢而有规律，有三种运动方式运动缓慢而有规律，有三种运动方式n围绕其长轴旋转运动围绕其长轴旋
6、转运动n伸缩其螺旋间距离移动伸缩其螺旋间距离移动n弯曲扭动如蛇行弯曲扭动如蛇行病原学检查的临床意义病原学检查的临床意义n病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。n螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。n如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查n结果解释阴性结果不能排除梅毒，可能是：阴性结果不能排除梅毒，可能是：螺旋体数量不足螺旋体数量不足已用过抗生素或某些外用药已用过抗生素或某些外用药 损害接近自然消退损害接近自然消退15n非梅毒螺旋体抗原血清试
7、验非梅毒螺旋体抗原血清试验n梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测方法梅毒实验室操作要求梅毒实验室操作要求梅毒血清学试验操作和结果分析梅毒血清学试验操作和结果分析标本的采集和分离标本的采集和分离编号或姓名登记编号或姓名登记采血、分离血清和贮存采血、分离血清和贮存16梅毒实验室操作要求梅毒实验室操作要求试剂准备试剂准备温度、器具的校正温度、器具的校正试剂、血清和反应板恢复到试验温度试剂、血清和反应板恢复到试验温度试剂鉴定试剂鉴定17梅毒实验室操作要求梅毒实验室操作要求试验操作试验操作血清量的控制血清量的控制试剂量的控制试剂量的控制旋转仪速度和时间的控制旋转仪
8、速度和时间的控制18非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验1、原理： 梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂抗原的抗体，可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体 2、方法：n 快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)n 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）n 性病研究实验室试验 (VDRL)RPR定性试验n在纸卡圆圈中加入50L待检血清，涂满整待检血清，涂满整个圆圈个圆圈n使用滴管和专用针头（60滴滴/mL），加），加1滴抗原悬液滴抗原悬液n旋转100rpm8minn立即判断结果RPR定量试验n待检血清用等渗盐水在纸卡圆圈中作6个个稀释度：原血清，稀释度：原血清，1:2，1:4，1:8，1
9、:16，1:32n按定性试验步骤操作，以出现阳性反应的最高稀释度报告结果RPR定量试验定量试验n中等至大的凝块为阳性（圈4和7）有明确但很小的凝块为弱阳性（圈2和3）颗粒均匀分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）为阴性非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点：优点： *敏感性特异性好敏感性特异性好 *不需要昂贵设备，简单易行不需要昂贵设备，简单易行 *适用于大量人群的血清筛查适用于大量人群的血清筛查 *有效治疗后血清滴度可下降并阴转，故可作疗效观察、有效治疗后血清滴度可下降并阴转，故可作疗效观察、判愈、复发。判愈、复发。 *20分钟可获得实验结果。分钟可获得实验结果
10、。 *试剂与方法均已标化，各实验室间结果可比较。试剂与方法均已标化，各实验室间结果可比较。 *试验可被内部质控和外部质控监控进行。试验可被内部质控和外部质控监控进行。缺点：缺点： *敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验，敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验，BFP反应和前带反应和前带现象现象 非特异性血清试验的假阴性：非特异性血清试验的假阴性：1）有）有25%40%的未治梅毒在晚期隐性期可自然逆转的未治梅毒在晚期隐性期可自然逆转为阴性，约为阴性，约30%的心血管和神经梅毒呈阴性。的心血管和神经梅毒呈阴性。2）前带现象（）前带现象（the prozonphenomenon）, 即为抗即为抗原抗体量比例不
11、适，抑制阳性反应。一般易发生在滴原抗体量比例不适，抑制阳性反应。一般易发生在滴度在度在1：500以上的标本中。以上的标本中。 1%的的II期梅毒会出现前期梅毒会出现前带现象。带现象。3）操作人员应注意实验的温度，试剂盒从冰箱取出）操作人员应注意实验的温度，试剂盒从冰箱取出后应恢复至室温，室温过低（后应恢复至室温，室温过低（10）可能出现假阴）可能出现假阴性或结果不准确。性或结果不准确。 非特异性血清试验生物学假阳性非特异性血清试验生物学假阳性 0.25%0.86%阳性标本为生物学假阳性，主要出现阳性标本为生物学假阳性，主要出现在自身免疫疾病（所有在自身免疫疾病（所有BFP反应的反应的14%）的
12、患者、其它）的患者、其它病原体感染（病毒性肺炎、恶性肿瘤和麻风）、妊娠病原体感染（病毒性肺炎、恶性肿瘤和麻风）、妊娠妇女。妇女。 应排除技术性、生理性和生物学假阳性，并用特应排除技术性、生理性和生物学假阳性，并用特异性试验来证实。异性试验来证实。非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义n非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。n早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。n经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验1 1、原理：原理：用梅毒螺旋体特异蛋
13、白为抗原，检测梅毒患者血中用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中 特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体 2 2、方法：方法：n 梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) (TPPA)n 梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA)(TPHA)n 梅毒酶联免疫吸附试验（梅毒酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）n 梅毒免疫层析法梅毒免疫层析法- -梅毒快速检测梅毒快速检测 (RT) (RT)n 荧光螺旋体抗体吸收试验（荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABSFTA-ABS）n 化学发光免疫分析法（化学发光免疫分析法（CLIACLIA）n
14、梅毒梅毒IgMIgM抗体检测（抗体检测（IgMIgM）n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WBWB）梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验原理：用经纯化及超声裂解处理的梅毒螺原理：用经纯化及超声裂解处理的梅毒螺旋体为抗原，或重组抗原包被固相，检旋体为抗原，或重组抗原包被固相，检测特异性梅毒螺旋体抗体测特异性梅毒螺旋体抗体n其敏感性和特异性有待进一步评价其敏感性和特异性有待进一步评价快速试验快速试验-免疫渗滤法免疫渗滤法n在试纸条上包被螺旋体特异性抗原成份，在试纸条上包被螺旋体特异性抗原成份，如如47kD、15kD抗原，利用免疫渗滤技抗原，利用免疫渗滤技术，将试纸条
15、插入待测血清，观察血清术，将试纸条插入待测血清，观察血清与特定抗原成份的反应与特定抗原成份的反应n可在可在10分钟之内得到结果，快速、方分钟之内得到结果，快速、方便便n是特异性螺旋体实验是特异性螺旋体实验n需要进一步验证方可用于临床诊断需要进一步验证方可用于临床诊断梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验：用整菌和其梅毒螺旋体颗粒凝集试验：用整菌和其片断做抗原致敏的明胶颗粒，此致敏颗片断做抗原致敏的明胶颗粒，此致敏颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见的凝集反应。敏感结合，产生肉眼可见的凝集反应。敏感性和特异性接近最佳
16、，分别为性和特异性接近最佳，分别为95%和和99.9%。容许做梅毒的精确诊断。容许做梅毒的精确诊断。30 注意事项注意事项 新溶解的新溶解的“C”“D”应置应置30分钟以上才能使用，已溶解的分钟以上才能使用，已溶解的“C”“D”液用前需恢复至室温并充分摇匀。专用滴管应标液用前需恢复至室温并充分摇匀。专用滴管应标明不能混用，不能用来稀释血清。明不能混用，不能用来稀释血清。未致敏孔不发生凝集，否则试验无效。如果标本与非致未致敏孔不发生凝集，否则试验无效。如果标本与非致敏和致敏颗粒均产生凝集，需作重吸收试验。敏和致敏颗粒均产生凝集，需作重吸收试验。反应板要清洁干净，孔内无异物。反应板要清洁干净，孔内
17、无异物。试剂保存于试剂保存于210，不可冻结，不同批号试剂间不可混，不可冻结，不同批号试剂间不可混用。用。梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义n作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如TRUST等)初筛阳性标本的确证试验。n梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体抗体试验仍可阳性，故TPPA等试验阳性不能作为疗效观察的指标。nTPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。讨论讨论nRPR检测抗心磷脂检测抗心磷脂IgM/IgG抗体抗体nTPPA检测抗梅毒螺旋体检测抗梅毒螺旋体IgM/IgG抗体抗体nTP-IgM-ELISA试验检测抗梅毒
18、螺旋体试验检测抗梅毒螺旋体IgM抗抗体体nIgM抗体最早产生并随疾病的治疗而逐渐下降抗体最早产生并随疾病的治疗而逐渐下降或消失或消失nIgM试验可用早期诊断试验可用早期诊断33梅毒血清学试验结果的临床意义总汇梅毒血清学试验结果的临床意义总汇 _ _ _ _ 排除梅毒排除梅毒 一期梅毒的早期一期梅毒的早期 + + + + 现症梅毒现症梅毒( (梅毒孕妇所生梅毒孕妇所生 的婴儿除外的婴儿除外) ) + - + - 生物学假阳性生物学假阳性 - + - + 早期梅毒经治疗后早期梅毒经治疗后以临床诊断为目的的检测策略一以临床诊断为目的的检测策略一 非非梅毒螺旋体抗体试验梅毒螺旋体抗体试验（具体方法）（
19、具体方法）阴性阴性报告检测方法及阴报告检测方法及阴性结果性结果阳性阳性报告检测报告检测方法及阳方法及阳性结果性结果梅毒螺旋梅毒螺旋体试验体试验（具（具体方法）体方法）阴性阴性报告检测方法及阴报告检测方法及阴性结果性结果阳性阳性报告检测方法及阳报告检测方法及阳性结果性结果非非梅毒螺旋梅毒螺旋体体定量定量试试验验报告检测报告检测方法及定方法及定量结果量结果以临床诊断为目的的检测策略二以临床诊断为目的的检测策略二梅毒螺旋体抗体试验梅毒螺旋体抗体试验（具体方法）（具体方法）阴性阴性报告检测方法及报告检测方法及阴性结果阴性结果阳性阳性报告检测报告检测方法及阳方法及阳性结果性结果非非梅毒螺旋梅毒螺旋体抗体
20、体抗体（具（具体方法）体方法）阴性阴性报告检测方法及报告检测方法及阴性结果阴性结果阳性阳性报告检测报告检测方法及阳方法及阳性结果性结果非非梅毒螺旋体定梅毒螺旋体定量试验？量试验？报告检测方法及报告检测方法及定量结果定量结果二、淋二、淋 病病淋病的实验室诊断淋病的实验室诊断n淋病在我国的发病人数是最多的性病淋病在我国的发病人数是最多的性病n由淋病奈瑟氏菌引起的泌尿生殖道的化由淋病奈瑟氏菌引起的泌尿生殖道的化脓性感脓性感 染淋菌性尿道炎、淋菌性宫颈炎染淋菌性尿道炎、淋菌性宫颈炎等等n实验室诊断本病主要为常规方法和分子实验室诊断本病主要为常规方法和分子生物学方法生物学方法常用淋病检测方法常用淋病检测
21、方法n直接显微镜检查n分离培养淋球菌直接显微镜检查直接显微镜检查n原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黄白色脓性分泌物，其多形核白细胞内可找到革兰染色阴性的双球菌。n方法：革兰染色为一传统方法，革兰染色将菌分为二大类，即染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。直接显微镜检查的临床意义直接显微镜检查的临床意义n男性淋菌性尿道炎的尿道标本男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达敏感性及特异性可高达95%95%99%99%，具诊断价值。，具诊断价值。n宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅敏感性仅404070%70%。n不推荐直接
22、显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。 亦亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。直接显微镜检查的临床意义直接显微镜检查的临床意义n女性病人敏感性低，其影响因素较多。女性病人敏感性低，其影响因素较多。宫颈分泌物中杂菌较多，有的在形态上宫颈分泌物中杂菌较多，有的在形态上类似于淋球菌类似于淋球菌n简便、有效、价格低廉简便、有效、价格低廉淋球菌的生物学特性淋球菌的生物学特性 n淋球菌为需氧生长菌淋球菌为需氧生长菌n用普通培养基不
23、易培养成功用普通培养基不易培养成功n营养要求高营养要求高,需在含有动物蛋白的培养基需在含有动物蛋白的培养基中能生长好中能生长好n生长时的营养要求不一生长时的营养要求不一n营养需要不同的原因在于不同的菌株其营养需要不同的原因在于不同的菌株其生物合成酶有缺陷生物合成酶有缺陷43淋球菌的生物学特性淋球菌的生物学特性 n淋球菌喜潮怕干，干燥的条件下淋球菌喜潮怕干，干燥的条件下1小时就小时就死亡死亡n不完全干燥的条件下，附着衣服或被褥中生存不完全干燥的条件下，附着衣服或被褥中生存1824hn室温则室温则12天内死亡天内死亡n -30可保寸可保寸23个月个月n-70为为6个月个月nph：7.07.544淋
24、球菌培养淋球菌培养1原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。2、方法特点：n敏感性 81100%。n 特异性 100% 淋球菌培养淋球菌培养n培养条件 ： 35 36，含5%10% CO2，湿润（70%湿度）的环境。nCO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。n培养时间：2448小时淋球菌的初步鉴定淋球菌的初步鉴定初步鉴定淋球菌的依据n菌落特征n氧化酶试验n革兰染色3 细菌培养细菌培养 选择性培养基上培养选择性培养基
25、上培养典型典型菌落菌落氧化酶试验阳性氧化酶试验阳性镜检革镜检革兰氏阴性双球菌兰氏阴性双球菌。淋球菌培养的临床意义淋球菌培养的临床意义n培养法为诊断淋病的金标准.n用于女性感染者、亚临床感染者、以及来自直肠和咽部的感染的确诊试验。生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染常用生殖道衣原体感染检测方法常用生殖道衣原体感染检测方法n抗原检测抗原检测 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISAELISA） 免疫层析快速检测免疫层析快速检测n核酸检测核酸检测酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验1、原理：与衣原体特异性单克隆抗体形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测衣原体抗原。2、方法特点n 敏感性：79
26、97n 特异性: 9799n试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故n结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原体感染的检测。n在沙眼衣原体高流行率的人群临床和健康体检；低流行率（小于5%）的人群中应用时，结果解释应慎重。酶联免疫吸附试验临床意义酶联免疫吸附试验临床意义抗原快速检测抗原快速检测1、 原理：利用免疫层析法原理，采用胶体金标记的沙眼衣原体抗体滤纸条或卡，快速检测标本中的沙眼衣原体抗原。2、方法特点n简易，方便，快速，尤其适用于基层单位n标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果抗原快速检测临床意义抗原快速检测临床意义n该方法主
27、要适用于女性患者宫颈标本的检测，敏感性较低。n该法快速、简便，无需特殊仪器，因此，较适合基层实验室开展。核酸扩增检测核酸扩增检测1、原理：核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原体。2、方法包括聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、等温链置换扩增技术（SDA）、转录介导扩增技术（TMA）等。目前国内广泛使用的有实时荧光PCR。核酸扩增检测临床意义核酸扩增检测临床意义n核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金标准”。n核酸扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。 n开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床核酸检测技术资格证。方法评价方法评价n核酸检测 是目前为止最好的检测方法但存在检测敏感性上的局限性nELISA抗原检测 严格按操作说明进行操作是非常好的检测方法高通量，自动化n快速抗原检测 操作时间短，单人份操作，但敏感性极低敬请敬请批评指教！批评指教！
