1、一 实验原理双翅类昆虫（摇蚊、果蝇等）幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体(salivary chromosome)。唾腺染色体的特征：1. 唾腺细胞发育成熟后停滞于永久性有丝分裂前永久性有丝分裂前期。期。2. 2. 体细胞同源染色体配对体细胞同源染色体配对，所以染色体只有半数（n）。各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心染色中心（chromocenter.）3. 唾腺染色体经过多次复制而并不分开，大约有10004000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染多线染色体色体（polytene chromosome）。 4. 这种染色体较普通染色体大得多，宽约5m，长约400m
2、，相当于普通染色体的100150倍，又称为巨大染色体。 5. 多线染色体经染色后，出现深浅、密深浅、密疏不同的横纹，疏不同的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。如染色体有缺失、重复、倒位、易位等，在其上很容易被识别出来。二 实验目的 练习取出果蝇等幼虫唾腺的技术和制作唾腺染色体标本的方法。 观察多线染色体的特征： a. 体细胞配对，所以染色体只有半数（n）；各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心(chromocenter）; b.多线性和巨大性； c. 横纹有深浅、疏密的不同，可作为染色体的识别标志。 把观察到的好图像画下来。三 实验材料 黑腹果蝇
3、的三龄幼虫。这种材料易饲养又易取得唾腺，但为了得到更好的染色体标本，需要在2025和营养良好的条件下饲养幼虫。选择行动迟缓肥大，爬上管壁的三龄幼虫（就要化蛹了）做标本最佳。四 实验器具和药品 用具：双筒解剖镜，显微镜，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，吸水纸。 药品：改良苯酚品红，生理盐水。五 实验步骤1.把载玻片置于解剖镜下。载玻片上滴一滴生理盐水，取三龄幼虫放在其上，操作者两手各握一只解剖针，一只解剖针压住幼虫后段1/31/2 处，固定幼虫。一只解剖针按住幼虫头部口器，用力向前拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出，唾腺是一对透明的棒状腺体一对透明的棒状腺体。2.在载玻片上除去幼虫其他组织部分，把
4、唾腺周围的白色脂肪剥离干净，再把唾腺移到干净的载玻片上。3.染色10分钟后，盖上干净的盖玻片，用滤纸先轻轻压一下，吸去多余的染液。然后放在平的桌子上，用大拇指用力压片。用力方向可因人而异，多做几次，可得较好的片子。 4.制成的片子在显微镜下观察。5. 如得到片子完整良好，而且没有气泡，可在冰箱中保持数日。也可以制成永久片，步骤如下：先剔出封蜡，放入固定液（冰醋酸：酒精=1：3）中，待盖玻片脱落，再把有材料的载玻片和盖玻片通过下列顺序：95%酒精1分钟，纯酒精1分钟，再经纯酒精1分钟，再经过几次不同比例的酒精和二甲苯混合液（3：1；2：1；1：1等），最后到纯二甲苯，取出后用加拿大树胶封片。再取
5、出盖玻片盖上即可。六 观察标本 1.先用低倍镜观察片子，找到好的染色体图像后，放到视野中心，再用高倍镜观察。 2.黑腹果蝇的唾腺染色体是2n=24=8（图）,但因体细胞配对，又因短小的第4染色体和X染色体的着丝粒在端部，所以染色体的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一条线状和点状染色体。只有第2和第3染色体的着丝粒在中央，它们从染色体以V字形向外伸出（2L,2R,3L,3R）,因此共有6条。 在显微镜下，短小的第4染色体有时不易观察到。雄果蝇的Y染色体几乎包含在染色中心里，因为是异染色质,看起来染色可能淡些。有经验的人可以发现雄果蝇的X染色体要细些，因为雄体只有一条X染色体。 3.唾腺染色体
6、上的横纹宽窄、浓淡是一定的，但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不连续的膨胀，这称为疏松区（puff），目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。 返回黑腹果蝇黑腹果蝇(D rosophila m elanogaster)唾腺染色唾腺染色体体6条臂末端的特征。条臂末端的特征。 箭头指的是箭头指的是X染色体上染色体上永久性的蓬突与永久性的蓬突与3L上的缢上的缢缩缩; 星号是染色较深的带纹星号是染色较深的带纹;小圆是着色较浅的带纹小圆是着色较浅的带纹(引引自自Graff, 1992) 。 第第4 臂最短臂最短; X末端末端有一个永久性的膨大有一个永久性的膨大节段节段,称蓬突称蓬突(puff,或或 “胀泡胀泡”,这是它特征这是它特征性的标志性的标志) ,这是最易这是最易识别的两条臂。识别的两条臂。 其他各臂的末端的其他各臂的末端的形状请见图。形状请见图。
