1、2022-4-251课件药品微生物限度检测技术课件药品微生物限度检测技术 目录1 12 23 3药品微生物限度检测概述药品微生物限度检测条件药品微生物限度检测方法一、药品微生物限度检测概述药品微生物限度检查定义药品微生物限度检查定义药品微生物限度检查意义药品微生物限度检查意义药品微生物限度检测的内容药品微生物限度检测的内容药品微生物限度检查适用剂型药品微生物限度检查适用剂型药品微生物限药品微生物限度检测概述度检测概述1.1药品微生物限度检查定义微生物限度检查方法是检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。微生物的种类和数微生物的种类和数量必须限制在一定量必须限制在一定的范围内或不
2、得检的范围内或不得检出出。1.2药品微生物限度检查 适用剂型部分口服给药制剂:口服液、酊剂、中药丸剂、糖浆剂、散剂、特殊部位使用的片剂（口腔帖片、阴道片、阴道泡腾片、外用可溶片） 含中药原粉、豆豉、神曲、动物组织等口服制剂鼻用制剂洗剂灌肠剂等 非规定灭菌非规定灭菌制剂及其原、制剂及其原、辅料辅料1.3药品微生物限度检查意义确定药物是否污染或其污染程度，控制药品的质量；确定药物是否污染或其污染程度，控制药品的质量；保证用药的有效性和安全性保证用药的有效性和安全性可作为衡量药品生产全过程卫生水平的根据之一可作为衡量药品生产全过程卫生水平的根据之一1.4药品微生物限度检测的内容微生物限度检查微生物限
3、度检查微生物总数检查微生物总数检查控制菌检查控制菌检查细菌数检查细菌数检查霉菌和酵母菌检查霉菌和酵母菌检查大肠埃希菌大肠埃希菌大肠菌群大肠菌群沙门菌沙门菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌梭菌梭菌白色念珠菌白色念珠菌非全检，检查种类与非全检，检查种类与剂型、给药途径、原剂型、给药途径、原料来源等有关。料来源等有关。 给药途径口服给药制剂细菌数每1g不得过1000个。每1ml不得过1000个。霉菌和酵母数（每1g、1ml或10cm2）不得过100个大肠埃希菌（每1g、1ml或10cm2）不得检出金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌沙门菌（每10g或10ml）含动物组织（包括提取物）的口服
4、制剂，不得检出 霉变、长螨 不合格给药途径眼部给药制剂细菌数每1g或1ml不得过10个霉菌和酵母数（每1g、1ml或10cm2）不得检出大肠埃希菌（每1g、1ml或10cm2）不得检出金黄色葡萄球菌（每1g、1ml或10cm2）不得检出铜绿假单胞菌（每1g、1ml或10cm2）不得检出沙门菌 霉变、长螨 不合格给药途径给药途径直肠给药制剂直肠给药制剂细菌数细菌数每每1g1g不得过不得过10001000个，每个，每1ml1ml不不得过得过100100个。个。霉菌和酵母数（每霉菌和酵母数（每1g1g、1ml1ml或或10cm10cm2 2） 不得过不得过100100个个大肠埃希菌大肠埃希菌（每（每
5、1g1g、1ml1ml或或10cm10cm2 2）不得检出不得检出金黄色葡萄球菌（每金黄色葡萄球菌（每1g1g、1ml1ml或或10cm10cm2 2）不得检出不得检出铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌（每（每1g1g、1ml1ml或或10cm10cm2 2）不得检出不得检出沙门菌沙门菌 霉变、长螨霉变、长螨 不合格不合格二、药品微生物限度检测条件检查检查环境环境和人和人员要员要求求A环境要求环境要求: :无菌室内进行。背景洁净度无菌室内进行。背景洁净度10,00010,000级下的局部级下的局部100100级，单向流空气。级，单向流空气。 操作人员：卫生、着装符合要求。操作人员：卫生、着装符合要求。
6、操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。 二、药品微生物限度检测条件方方法法验验证证B 由于某些供试品具有抗菌活性，在建由于某些供试品具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。进行验证。二、药品微生物限度检测条件正正确确抽抽样样C1.1.抽样方法抽样方法随机随机优先抽有疑问样品优先抽有疑问样品抽样量：检测用量的抽样量：检测用量的3535倍倍二、药品微生物限度检
7、测条件正正确确抽抽样样C2.2.检测用量检测用量2 2个最小包装个最小包装大蜜丸大蜜丸4 4丸丸膜剂膜剂4 4片片3.3.检测量检测量半半/ /固体制剂：固体制剂：10g10g液体制剂：液体制剂：10ml10ml膜剂：膜剂：100cm100cm二、药品微生物限度检测条件仪器仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。力蒸汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。用具用具 试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精密精密pH试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无菌试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无
8、菌服、牛皮纸等。服、牛皮纸等。环境清洁，表面消毒（环境清洁，表面消毒（ 75%(V/V)乙醇、新乙醇、新洁尔灭洁尔灭(1：1000)溶液或其他适宜消毒溶液）溶液或其他适宜消毒溶液）空气过滤系统，紫外灯或臭氧空气消毒仪空气过滤系统，紫外灯或臭氧空气消毒仪E环环境境准准备备实实验验器器具具D二、药品微生物限度检测条件培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应按各培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应按各种培养基要求准确测定调节种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生值。多数细菌生长的适宜长的适宜pH值为值为7.27.6。酵母菌霉菌。酵母菌霉菌（6.06.5）。）。培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基
9、培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果及不损失培养基的规定进行，以保证灭菌效果及不损失培养基的必需营养成分。的必需营养成分。 。湿热：湿热：115 121 ，15min30min 物品切勿立即取出置冷处，以免急速冷却，物品切勿立即取出置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，以致染菌。使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，以致染菌。干热：干热：160 170 ，2h 适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭菌。适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭菌。 灭菌程序需要经过验证灭菌程序需要经过验证灭灭菌菌方方式式G培培养养基基F计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查细菌、
10、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查菌种大肠埃希菌 CMCC（B）44 102金黄色葡萄球菌CMCC（B） 26 003枯草芽孢杆菌 CMCC（B） 63 501白色念珠菌 CMCC(F) 98 001黑曲霉 CMCC(F) 98 003验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查菌液制备 细菌新鲜培养物（一般18h24h，白念24h48h ，黑曲霉 57
11、天 ），用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数50cfu100cfu的菌悬液 （黑曲霉用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液）菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2 8可以在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2 8，在验证过的贮存期内使用。计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查培养基接种 金黄色葡萄球菌2个平皿营养琼脂培养基 大肠埃希菌2个平皿 枯草芽孢杆菌2个个皿 玫瑰红钠琼脂培养基 白色念珠菌2个平皿 黑典霉2个平皿酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基：白色念珠菌2个平皿计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查结果判定 若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的
12、菌落平均数的70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。2.2药品微生物限度检测的基本条件检查菌检查菌培养基培养基培养温度培养温度培养时间培养时间细菌数细菌数营养琼脂营养琼脂303035353 days3 days真菌数真菌数玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂232328285 days5 days酵母菌数酵母菌数酵母浸出粉胨葡酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂萄糖琼脂232328285 days5 days控制菌控制菌细菌：细菌：30303535真菌：真菌：23232828培培养养条条件件H2.2药品微生物限度检测的基本条件供试品检出控制菌或其它致病菌时，按一次检供试品检出控
13、制菌或其它致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。出结果为准，不再复试。 供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以中随机抽样，独立复试两次，以3 3次结果的平均次结果的平均值报告菌数。值报告菌数。 供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试
14、品不符合规定。的规定，判供试品不符合规定。 结结果果判判断断I2424三、药品微生物限度检测方法 细菌数、霉菌和酵母菌数检查细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.1细菌数、霉菌和酵母菌数检查1.1.平皿法平皿法数据数据处理处理混合平板混合平板的制备的制备细 菌 、 真细 菌 、 真菌的培养菌的培养检查结果、检查结果、观察与计数观察与计数供试液供试液的制备的制备书写检验书写检验记录单记录单3.1细菌数、霉菌和酵母菌数检查1.1.平皿法平皿法1010-2-21010-2-21010-2-21010-2-21010-3-31010-3-31010-3-31010-3-3倒置培养倒置培养3d3d营养琼脂营养琼
15、脂培养基培养基30353035玫 瑰 红 钠玫 瑰 红 钠琼 脂 培 养琼 脂 培 养基基倒置培养倒置培养5d5d23282328 对照对照对照对照对照对照对照对照1.0ml1.0ml9.0ml9.0ml 稀释液稀释液10g/ml 10g/ml 供试品供试品 9.0ml9.0ml1010-2-21010-1-11.0ml1.0ml 9.0ml9.0ml1010-3-31.0ml1.0ml1010-1-11010-1-11010-1-11010-1-11010倍递增稀释法倍递增稀释法3.1细菌数、霉菌和酵母菌数检查10g10g或或10ml10ml 供试品供试品 10101 1供试液供试液取相当于
16、取相当于1g1g或或1ml1ml供试液用滤膜过滤、供试液用滤膜过滤、冲洗冲洗取下滤膜，菌面朝取下滤膜，菌面朝上放培养基上培养上放培养基上培养结果观察结果观察 与计数与计数数据数据处理处理书 写 检 验书 写 检 验记录单记录单2.2.薄膜过滤法薄膜过滤法282829293030313132323.1细菌数、霉菌和酵母菌数检查（薄膜过滤法）薄膜过滤法）阴性对照： 取供试品微生物限度检查相应的溶剂和稀释液同法操作，阴性对照不得长菌3.1细菌数、霉菌和酵母菌数检查薄膜过滤法薄膜过滤法结果判断细菌总数真菌总数符合药典该品种项下限度规定符合药典该品种项下限度规定判定药物的细菌、判定药物的细菌、真菌总数检
17、验合格真菌总数检验合格否则因从同一批次产品中重新抽样，独立复试否则因从同一批次产品中重新抽样，独立复试三次，以三次结果的平均值报告菌数三次，以三次结果的平均值报告菌数3.1细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.3.操作注意事项操作注意事项1.1.尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。 2.2.为防止细菌增殖及产生菌苔，制为防止细菌增殖及产生菌苔，制成供试液后，应尽快稀释，注皿。成供试液后，应尽快稀释，注皿。一般稀释后应在一般稀释后应在1 1小时内操作完毕。小时内操作完毕。 36363.1细菌数
18、、霉菌和酵母菌数检查3.3.操作注意事项操作注意事项3.3.使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附的溶液混入其中。的溶液混入其中。 4.4.注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落少。而高释释度时菌落数反而增大。遇此情少。而高释释度时菌落数反而增大。遇此情况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操作技术误差。作技术误差。 3.1细菌数、霉菌和酵母菌数检查
19、3.3.操作注意事项操作注意事项5.5.为检查和控制灭菌效果，应做空白对照，为检查和控制灭菌效果，应做空白对照，以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过程是否无菌操作。程是否无菌操作。 6.6.为便于区别药品中的颗粒与菌落，可在为便于区别药品中的颗粒与菌落，可在每每100mL 100mL 营养琼脂中加入营养琼脂中加入1mL0.51mL0.5的的TTC TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而药品的颗粒颜色无变化。而药品的颗粒颜色无变化。3.1细菌数、霉菌和酵母菌数检查4.4.菌落计数及报告方法菌落计数及报告方法宜
20、选取细菌、酵母菌平均菌落数小于宜选取细菌、酵母菌平均菌落数小于300 cfu300 cfu、霉菌平均、霉菌平均菌落数小于菌落数小于100 cfu100 cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。数字）的依据。（1 1）以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告）以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g1g，1ml1ml供试品中所含的菌数。供试品中所含的菌数。（2 2）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1 1时，以时，以1 1乘以
21、最低乘以最低稀释倍数的值报告菌数。稀释倍数的值报告菌数。 3.2控制菌检查检查项目（1 1）阴性对照阴性对照试验：取稀释液试验：取稀释液10ml10ml按相应按相应供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。（2 2）阳性对照阳性对照试验：供试品试验：供试品+10100CFU +10100CFU 阳阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。 （3 3）供试品供试品控制菌检查：依相应的检查方控制菌检查：依相应的检查方法进行。法进行。 3.2控制菌检查检查流程供试品供试品增菌培养增菌培养分离培养分离培养纯培养纯培养染色镜检染色镜检生化反应试验
22、生化反应试验报告结果报告结果3.2控制菌检查检查流程1.1.增菌培养目增菌培养目的的由于药品在生产过程中，常受到由于药品在生产过程中，常受到加热、干燥等加工步骤的影响，加热、干燥等加工步骤的影响，药品中污染的药品中污染的微生物微生物可可能能受到损受到损伤或呈休眠状态，先进行增菌，伤或呈休眠状态，先进行增菌，以修复受损细菌，恢复其生长繁以修复受损细菌，恢复其生长繁殖能力，使菌体数增加，提高检殖能力，使菌体数增加，提高检出率出率，避免出现漏检。避免出现漏检。3.2控制菌检查检查流程2.2.分离培分离培养目的养目的经增殖培养后经增殖培养后, ,被检菌大被检菌大量繁殖，同时其他一些量繁殖，同时其他一些
23、杂菌也出现增殖。因此杂菌也出现增殖。因此分离培养能使目的菌从分离培养能使目的菌从混合菌中分离出来。混合菌中分离出来。3.2控制菌检查检查流程3.3.纯培养目的纯培养目的大量增殖被检菌，用于大量增殖被检菌，用于后面的进一步检验。后面的进一步检验。3.2控制菌检查检查流程4.4.染色镜染色镜检目的检目的初步鉴定，观察细菌的初步鉴定，观察细菌的形态大小。形态大小。3.2控制菌检查检查流程5.5.生化试验生化试验目的目的最终的鉴定依据，最终的鉴定依据，结合染色镜检得出结合染色镜检得出实验结果，填写检实验结果，填写检验报告。验报告。3.2.1控制菌检查大肠埃希菌检查大肠埃希菌大肠埃希菌 俗称大肠杆菌，属
24、肠杆俗称大肠杆菌，属肠杆菌科埃希菌属，菌科埃希菌属，革兰阴性杆革兰阴性杆菌，兼性厌氧菌，能发酵多菌，兼性厌氧菌，能发酵多种糖产酸产气。种糖产酸产气。3.2.1控制菌检查大肠埃希菌检查大肠埃希菌检查意义大肠埃希菌检查意义 大肠埃希菌为条件致病菌，当人体免疫力低下或大肠埃希菌为条件致病菌，当人体免疫力低下或是侵入肠外组织、器官，可引起肠外感染，乃至败是侵入肠外组织、器官，可引起肠外感染，乃至败血症。也可随人和动物的粪便排出体外，污染环境，血症。也可随人和动物的粪便排出体外，污染环境，一旦食品、药品、水等物品中检出该菌，说明已受一旦食品、药品、水等物品中检出该菌，说明已受粪便污染，可能存在其他肠道致
25、病菌和寄生虫卵，粪便污染，可能存在其他肠道致病菌和寄生虫卵，人们饮用或服用它们则可能引起消化道传染病。人们饮用或服用它们则可能引起消化道传染病。3.2.1控制菌检查大肠埃希菌检查书写检验书写检验记录单记录单双阳或双阴性双阳或双阴性增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备检查检查结果结果判断判断配培配培养基养基和稀和稀释液释液靛基质试验靛基质试验荧光检查荧光检查一阴一阴一阳一阳分分离离纯纯化化最终结最终结果判断果判断大肠埃希菌检查流程图大肠埃希菌检查流程图胆盐乳糖胆盐乳糖蓝白萤光蓝白萤光玫瑰红色液面玫瑰红色液面EMBEMB琼脂琼脂/ /麦麦康凯琼脂康凯琼脂菌落特征菌落特征革兰染色、镜检革兰染色、
26、镜检 生化试验生化试验: :乳糖发酵乳糖发酵试验、试验、IMViCIMViC试验试验MUGMUG培养基培养基 366nm366nm紫外灯紫外灯EMB琼脂培养基琼脂培养基靛基质试验靛基质试验紫黑色紫黑色金属光金属光泽泽玫瑰红玫瑰红色液面色液面大肠埃希菌大肠埃希菌产气杆菌产气杆菌 I M Vi C I M Vi C试验试验 大肠埃希菌大肠埃希菌 +(+(或或- -） + - -+ - - 产气杆菌产气杆菌 - - + +- - + +3.2.1控制菌检查大肠埃希菌检查大肠埃希菌检查结果报告大肠埃希菌检查结果报告检出大肠检出大肠埃希菌埃希菌MUGMUG阳性，靛基质阳性阳性，靛基质阳性MUGMUG阳性
27、，靛基质阴性，阳性，靛基质阴性，IMViCIMViC为，为，G G- -MUGMUG阴性，靛基质阳性，阴性，靛基质阳性，IMViCIMViC为，为，G G- -3.2.2控制菌检查大肠菌群检查大肠菌群大肠菌群 大肠菌群是指大肠菌群是指3737生长时生长时能能发酵乳糖发酵乳糖，在，在24h24h内内产酸产气产酸产气的革兰阴性无芽胞需氧及兼性的革兰阴性无芽胞需氧及兼性厌氧杆菌。厌氧杆菌。3.2.2控制菌检查大肠菌群检查大肠菌群检查意义大肠菌群检查意义 大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随粪便排出体外后可直接污染药品，若产品中粪便排出体外后可直接污染药品，若产品中
28、检出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可检出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，以此作为粪能存在肠道致病菌并引起疾病，以此作为粪便指示菌比大肠埃希菌更具广泛卫生学意义，便指示菌比大肠埃希菌更具广泛卫生学意义，是评价化妆品卫生质量的重要指标之一。是评价化妆品卫生质量的重要指标之一。3.2.2控制菌检查大肠菌群检查产酸：黄色产酸：黄色产气：气泡产气：气泡产酸产气产酸产气书写检验书写检验记录单记录单不产酸不产气不产酸不产气增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备配培配培养基养基和稀和稀释液释液检查检查结果结果判断判断30-3530-3518-24h18-24h分离培养分离培养
29、乳糖发酵乳糖发酵验证试验验证试验最终结最终结果判断果判断30-3530-3524-48h24-48h特特征征菌菌落落36361 1 1824h1824h胆盐乳糖发酵管胆盐乳糖发酵管产酸：黄色产酸：黄色产气：气泡产气：气泡紫黑色紫黑色/ /桃桃红色红色大肠菌群检查流程图大肠菌群检查流程图EMBEMB琼脂琼脂/ /麦康麦康凯琼脂平板凯琼脂平板3.2.2控制菌检查大肠菌群检查各供试品量的检出结果各供试品量的检出结果最可能的大肠菌群数最可能的大肠菌群数N N（个（个/g/g或或mlml）1.0g1.0g或或1.0ml1.0ml0.1g0.1g或或0.1ml0.1ml0.01g0.01g或或0.01ml
30、0.01ml+ + + +10102 2+ + +- -1010N N 10102 2+ +- - -1 1N N1010- - - -1 1大肠菌群检查结果报告大肠菌群大肠菌群检查结果报告大肠菌群MPNMPN表表3.2.3控制菌检查沙门菌检查沙门菌沙门菌 沙门菌是指一群寄生于人沙门菌是指一群寄生于人类和动物肠道内的类和动物肠道内的革兰阴性兼革兰阴性兼性厌氧杆菌性厌氧杆菌，不发酵乳糖和蔗，不发酵乳糖和蔗糖，发酵葡萄糖和甘露醇。糖，发酵葡萄糖和甘露醇。3.2.3控制菌检查沙门菌检查沙门菌检查意义沙门菌检查意义 沙门菌是肠杆菌科的重要致病沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌，可随粪便或带菌者接触污染药菌，
31、可随粪便或带菌者接触污染药品原辅料、制药用水、设备、半成品原辅料、制药用水、设备、半成品、成品，尤其是动物脏器为原料品、成品，尤其是动物脏器为原料的药物，服用后有引起人类伤寒、的药物，服用后有引起人类伤寒、副伤寒、急性肠炎即败血症等疾病副伤寒、急性肠炎即败血症等疾病的危险。的危险。583.2.3控制菌检查沙门菌检查沙门菌检查流程图沙门菌检查流程图 靛基质试验靛基质试验 脲酶试验脲酶试验生化试验生化试验 氰化钾试验氰化钾试验 赖氨酸脱羧酶试验赖氨酸脱羧酶试验 动力试验动力试验 血清学凝聚试验血清学凝聚试验有特征菌落有特征菌落三糖铁琼三糖铁琼脂培养基脂培养基穿刺接种穿刺接种最终结最终结果判断果判断
32、增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备书写检验书写检验记录单记录单分分离离纯纯化化无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落配培配培养基养基和稀和稀释液释液预预增增菌菌营养肉汤营养肉汤四硫磺酸钠四硫磺酸钠亮绿培养基亮绿培养基SSSS琼脂琼脂麦康凯琼脂麦康凯琼脂黑色黑色半透明半透明初步鉴别初步鉴别四硫磺酸钠亮绿四硫磺酸钠亮绿培养基培养基SS培养基培养基黑色黑色菌落菌落麦康凯培麦康凯培养基养基半透明半透明菌落菌落三糖铁斜面三糖铁斜面疑似菌落疑似菌落赖氨酸脱羧酶培养基赖氨酸脱羧酶培养基紫色紫色半固体营养琼脂培养基半固体营养琼脂培养基血清血清凝集凝集3.2.3控制菌检查沙门菌检查沙门菌检查结果报告沙门菌检
33、查结果报告检出沙门菌检出沙门菌革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌三糖铁反应及生化反应符合沙门菌属反应三糖铁反应及生化反应符合沙门菌属反应血清凝集试验阳性反应血清凝集试验阳性反应3.2.4控制菌检查铜绿假单胞菌检查铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌属于假铜绿假单胞菌属于假单胞菌属，为单胞菌属，为革兰氏阴性革兰氏阴性杆菌，杆菌，氧化酶阳性氧化酶阳性，能产，能产生生绿脓菌素绿脓菌素。此外还能。此外还能液液化明胶，还原硝酸盐化明胶，还原硝酸盐为亚为亚硝酸盐，在硝酸盐，在424211条条件下能生长。件下能生长。3.2.4控制菌检查铜绿假单胞菌检查铜绿假单胞菌检查意义铜绿假单胞菌检查意义 铜绿假单胞菌在特殊情铜
34、绿假单胞菌在特殊情况下可引起皮肤化脓感染、况下可引起皮肤化脓感染、泌尿道感染、中耳炎等。外泌尿道感染、中耳炎等。外伤及烧伤患者感染后最易引伤及烧伤患者感染后最易引起化脓，并引起败血症。为起化脓，并引起败血症。为保证消费者安全，化妆品中保证消费者安全，化妆品中不得检出铜绿假单胞菌。不得检出铜绿假单胞菌。3.2.4控制菌检查铜绿假单胞菌检查最终结最终结果判断果判断增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备书写检验书写检验记录单记录单分分离离纯纯化化无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落配培配培养基养基和稀和稀释液释液革兰染色、镜检革兰染色、镜检 氧化酶试验氧化酶试验 绿脓菌素试验绿脓菌素试验生化试验生
35、化试验 硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 4242生长试验生长试验 明胶液化试验明胶液化试验铜绿假单胞菌检查流程图铜绿假单胞菌检查流程图胆盐乳糖培养基胆盐乳糖培养基十六烷三甲基十六烷三甲基溴化铵琼脂溴化铵琼脂30-3530-351824h1824h30-3530-351824h1824h特征菌落特征菌落灰白色、扁平、灰白色、扁平、周围有水溶性周围有水溶性蓝绿色素蓝绿色素十六烷三甲基溴化铵平板十六烷三甲基溴化铵平板胆盐乳糖培养基胆盐乳糖培养基黄绿色黄绿色菌膜菌膜灰白色灰白色湿润湿润氧化酶试验氧化酶试验粉红粉红/紫红色紫红色绿脓菌素试验绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色氯仿层呈蓝绿
36、色硝酸盐还原产气试验硝酸盐还原产气试验N2明胶液化明胶液化试验试验明胶培养基（高层）明胶培养基（高层）明胶液化明胶液化3.2.4控制菌检查铜绿假单胞菌检查铜绿假单胞菌检查结果报告铜绿假单胞菌检查结果报告 被检样品经增菌分离培养后，经证实为革被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和酸盐还原产气和4242生长试验三者皆为阳性生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品
37、中检出铜绿假单胞菌。时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。3.2.5控制菌检查金黄色葡萄球菌检查金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌为金黄色葡萄球菌为革兰氏革兰氏阳性球菌阳性球菌，呈葡萄状排列，无，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。血浆凝固酶阳性。3.2.5控制菌检查金黄色葡萄球菌检查金黄色葡萄球菌检查意义金黄色葡萄球菌检查意义 金黄色葡萄球菌在外界分金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化脏性病灶，严重起人体局部化脏性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品时可导致败血症，因此化妆品中检
38、验金黄色葡萄球菌有重要中检验金黄色葡萄球菌有重要意义。意义。3.2.5控制菌检查金黄色葡萄球菌检查革兰染色、镜检革兰染色、镜检 生化试验生化试验: :血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验最终结最终结果判断果判断增增菌菌培培养养供试供试品的品的处理处理书写检验书写检验记录单记录单分分离离纯纯化化无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落配培配培养基养基和稀和稀释液释液30-3530-3530-3530-35营养肉汤培养基营养肉汤培养基或亚碲酸钠肉汤或亚碲酸钠肉汤18-24h18-24h卵黄氯化钠或甘卵黄氯化钠或甘露醇氯化钠琼脂露醇氯化钠琼脂24-72h24-72h特征菌落特征菌落金黄色、边缘金黄色、边缘有浑浊
39、带有浑浊带金黄色葡萄球菌检查流程图金黄色葡萄球菌检查流程图卵黄氯化钠琼脂卵黄氯化钠琼脂金黄色，有金黄色，有乳浊圈乳浊圈甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验血浆凝块血浆凝块液态血浆液态血浆3.2.5控制菌检查金黄色葡萄球菌检查金黄色葡萄球菌检查结果报告金黄色葡萄球菌检查结果报告 凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。出金黄色葡萄球菌。3.2.6控制菌检查梭菌检查增增菌菌培培养养供
40、试供试液的液的制备制备书写检验书写检验记录单记录单不出现浑浊、产气、不出现浑浊、产气、消化碎肉、臭气消化碎肉、臭气配培配培养基养基和稀和稀释液释液其他其他分分离离纯纯化化最终结最终结果判断果判断革兰染色、镜检革兰染色、镜检 生化试验：过氧化酶试验生化试验：过氧化酶试验梭菌梭菌增菌增菌培养培养含庆大霉素的含庆大霉素的哥伦比亚琼脂哥伦比亚琼脂厌氧厌氧35-37度，度，48h3.2.7控制菌检查白色念珠菌检查有特征菌落有特征菌落念珠菌念珠菌显色培显色培养基养基最终结最终结果判断果判断革兰染色、革兰染色、镜检镜检芽管试验芽管试验增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备书写检验书写检验记录单记录单分分离
41、离纯纯化化配培配培养基养基和稀和稀释液释液无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落有特征菌落有特征菌落1%1%聚山梨聚山梨酯酯80-80-玉米玉米培养基培养基3.2.83.2.8活螨检查活螨检查1 1简述简述螨，属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨目。种类螨，属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨目。种类繁多，分布甚广。繁多，分布甚广。 其生活习性各异，分为自由其生活习性各异，分为自由生活和寄生生活两种类型。在土壤、池沼、江生活和寄生生活两种类型。在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品中，都可能有它们的存在。中，都可能有它们的存在。3.2.83.2.8活螨检
42、查活螨检查药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。存、销售等条件不良，受到螨的污染。螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效，并可直螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效，并可直接危害人体或传播疾病。能引起皮炎及消化系接危害人体或传播疾病。能引起皮炎及消化系统、泌尿系统、呼吸系统等的疾病。因此，药统、泌尿系统、呼吸系统等的疾病。因此，药品特别是中成药，必须进行活螨检查。品特别是中成药，必须进行活螨检查。一般分为：直接法、漂浮法和分离法三种。一般分为：直接法、漂浮法和分离法三种。 谢谢！13. 我不去想是否能够成功，既然选择了远方，便只
43、顾风雨兼程!12. 男子汉应该是一种内在的品质，而不是靠化妆和表演就能显现出来的!15. 火柴如果躲避燃烧的痛苦，它的一生都将黯淡无光。（ ）13. 既不懈地追求生活，又不敢奢望生活过多地酬报和宠爱，理智而清醒地面对现实。2. 选择了自由，就得忍受孤寂。13. 要无条件自信，即使在做错的时候。12. 原以为“得不到”和“已失去”是最珍贵的，可原来把握眼前才是最重要的。3. 时间乃是最大的革新家。8. 当你用烦恼心来面对事物时，你会觉得一切都是业障，世界也会变得丑陋可恨。4. 信念的力量在于即使身处逆境，亦能帮助你鼓起前进的船帆;信念的魅力在于即使遇到险运，亦能召唤你鼓起生活的勇气;信念的伟大在
44、于即使遭遇不幸，亦能促使你保持崇高的心灵。8. 向着目标奔跑，何必在意折翼的翅膀，只要信心不死，就看的见方向，顺风适合行走，逆风更适合飞翔，人生路上什么都不怕，就怕自己投降。11. 虽然现实生活中，不是所有的梦想都能开花结果，也不是所有的人都能梦想成真。但每一个梦想都是绚烂多姿，每一个人都因追逐梦想而生活得更加精彩。14. 他依稀听见一支用口哨吹出的充满活力的歌在若耳边回想。这是赞美青春和生命的歌。5. 为明天做准备的最好方法就是集中你所有智慧，所有的热忱，把今天的工作做得尽善尽美，这就是你能应付未来的唯一方法。11. 虽然现实生活中，不是所有的梦想都能开花结果，也不是所有的人都能梦想成真。但
45、每一个梦想都是绚烂多姿，每一个人都因追逐梦想而生活得更加精彩。12. 这世上的一切都借希望而完成，农夫不会剥下一粒玉米，如果他不曾希望它长成种粒;单身汉不会娶妻，如果他不曾希望有孩子;商人也不会去工作，如果他不曾希望因此而有收益。16. 我的财富并不是因为我拥有很多，而是我要求的很少。1. 人生一世，除了亲情、爱情外，友情是决不可缺的，因为亲情是一种深度，爱情是一种纯度，而友情是一种广度。15. 孤独是空气，你呼吸着它而感觉到自己存在。7. 很多事先天注定，那是“命”;但你可以可以决定怎么面对，那是“运”!4、人生伟业的建立 ，不在能知，乃在能行。6. 只要再坚持一下下，我们就能到幸福的彼岸。14. 这个社会是存在不公平的，不要抱怨，因为没有用!人总是在反省中进步的!14. 生命的美丽，永远展现在她的进取之中;就像大树的美丽，是展现在它负势向上高耸入云的蓬勃生机中;像雄鹰的美丽，是展现在它搏风击雨如苍天之魂的翱翔中;像江河的美丽，是展现在它波涛汹。
