1、 1.情境激趣情境激趣2.温故知新温故知新基本技术基本技术1.制备培养基2.接种技术3.无菌技术2.温故知新温故知新制备培养基制备培养基定容定容称量称量溶化溶化分装分装调调pH包扎包扎灭菌灭菌倒平板倒平板称量称量计算计算2.温故知新温故知新接种技术接种技术平板划线法平板划线法2.温故知新温故知新接种技术接种技术稀释涂布平板稀释涂布平板法法2.温故知新温故知新无菌技术无菌技术消毒：煮沸消毒法、消毒：煮沸消毒法、 巴巴氏消毒法氏消毒法 、化学药剂消、化学药剂消毒法、紫外线消毒法毒法、紫外线消毒法 灭菌：灼烧灭菌、高压灭菌：灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、干热灭菌蒸汽灭菌、干热灭菌（一）筛选菌株（一）筛选菌
2、株1 1、实例：、实例： DNA DNA多聚酶链式反应多聚酶链式反应是一种在体外将是一种在体外将少量少量DNADNA大量复制大量复制的技术，此项技术要求使用的技术，此项技术要求使用耐高温（耐高温（93 93 ）的的DNADNA聚合酶。聚合酶。启示：启示：寻找目的菌种时要寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，到相应的环境中去寻找。原因：原因：因为热泉温度因为热泉温度707080 80 ，淘汰了绝大多数微生物，淘汰了绝大多数微生物只有只有TaqTaq细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。3.理论指导理论指导3.理论指导理论指导筛选菌株筛选菌株原理原理人为提供
3、有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止抑制或阻止其他种类微生物生长。3.理论指导理论指导筛选菌株筛选菌株选择培养基选择培养基一种氨基糖苷类药，其作用机制是作用于细菌体内的核糖体，抑制抑制细菌细菌蛋白质合成，并破坏细菌细胞膜的完整性。选择性抑菌剂，可抑制细菌抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长。孟加拉红又叫虎红孟加拉红又叫虎红3.理论指导理论指导筛选菌株筛选菌株选择培养基选择培养基概念：将允许特定种类特定种类的微生物生长，同时抑抑制或阻止制或阻止其他种类微生物生长的培养基。3.理论指导理论指导筛选菌株筛选菌株选择培养基选择培养基 方
4、法a加入特殊物质 方法b改变营养物质 方法c改变培养条件营养构成：碳源、氮源、水、无机盐生长条件：pH、特殊物质、气体要求 圆褐固氮菌生活于土壤中，能以氮气作为氮源。请探圆褐固氮菌生活于土壤中，能以氮气作为氮源。请探讨、交流实验室分离圆褐固氮菌的方法。讨、交流实验室分离圆褐固氮菌的方法。 提示：提示：配制无氮培养基作为选择培养基。配制无氮培养基作为选择培养基。4.理论指导理论指导生物科学社生物科学社 2.2106株克株克统计菌落数目统计菌落数目3.理论指导理论指导统计菌落数目统计菌落数目方法稀释涂布平板法，当样品的稀释度足够高稀释度足够高时，聚集的菌种被分散开来。培养基表面生长的一个菌落菌落，
5、来源于样品稀释液中的一个活菌活菌。原理3.理论指导理论指导统计菌落数目统计菌落数目菌落数目的选择稀释度的确定30300不同微生物采用不同不同稀释度第一次选择范围宽泛3.理论指导理论指导统计菌落数目统计菌落数目数据处理2.34109株克株克平均数：234稀释倍数：106接种量：0.1ml3.理论指导理论指导统计菌落数目统计菌落数目每克样品中的菌落数=（CV）M其中，C代表某一稀释度下平板生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍数。 3.理论指导理论指导 生物科学社生物科学社设置对照设置对照 2.2106株克株克可信度 3.理论指导理论指导设置对照设置对照空白对照
6、对比对照证明未被污染牛肉膏蛋白胨培养基证明选择作用3.理论指导理论指导生物科学社生物科学社培养与观察培养与观察真菌真菌 28 3天天3.理论指导理论指导生物科学社生物科学社培养与观察培养与观察3.理论指导理论指导生物科学社生物科学社培养与观察培养与观察大小、颜色、形态、突起、边缘3.理论指导理论指导初步鉴定初步鉴定预实验预实验阴性阳性对照3.理论指导理论指导初步鉴定初步鉴定原理原理pH6.6：黄色pH8.4：红色4.实验流程实验流程准备工作取样样品稀释涂布平板培养观察与记录数据处理初步鉴定 3-8cm 大小、颜色、形态、突起、边缘 跟随名师跟随名师解疑难解疑难 1操作中的注意事项操作中的注意事项 (1)无菌操作：铁铲和信封都要灭菌。称取土壤、将称无菌操作：铁铲和信封都要灭菌。称取土壤、将称好的土样倒入锥形瓶、稀释土壤溶液，每一步都要在酒精好的土样倒入锥形瓶、稀释土壤溶液，每一步都要在酒精灯的火焰旁进行。灯的火焰旁进行。 (2)做好标记：如在培养皿上注明培养基种类、培养日做好标记：如在培养皿上注明培养基种类、培养日期以及培养样品的稀释度等。期以及培养样品的稀释度等。 5.走近科学走近科学追寻科学家足迹铸就新科技梦想
