1、第四军医大学西京医院检验科第四军医大学西京医院检验科 概述概述目的目的 按照正确的说明采集和稳妥地运转标本以保证结果的按照正确的说明采集和稳妥地运转标本以保证结果的正确。正确。 质量差的标本：误诊、错误的抗生素治疗质量差的标本：误诊、错误的抗生素治疗实验室责任实验室责任1.提供标本采集和运转手册提供标本采集和运转手册(正确的说明正确的说明)2.与临床医生交流：正确地选择微生物试验，解释结果与临床医生交流：正确地选择微生物试验，解释结果3.检验医师：查房、会诊、选择试验、解释结果检验医师：查房、会诊、选择试验、解释结果 标本采集标本采集 细菌学培养的标本应在疾病发作之后，抗生素开始细菌学培养的标
2、本应在疾病发作之后，抗生素开始治疗之前尽可能快地进行收集。需要采第二份标本是因治疗之前尽可能快地进行收集。需要采第二份标本是因为第一份标本质量差或运转条件不适当，但对诊断一种为第一份标本质量差或运转条件不适当，但对诊断一种急性传染病来讲，其它情况很少要求第二份标本。例外急性传染病来讲，其它情况很少要求第二份标本。例外的情况包括多次收集血标本培养和诊断苛养菌或最初没的情况包括多次收集血标本培养和诊断苛养菌或最初没有怀疑的不常见的病原菌。有怀疑的不常见的病原菌。标本的选择和收集的一般原则标本的选择和收集的一般原则 1选择合适的解剖部位收集标本。选择合适的解剖部位收集标本。 2避免固有菌群污染。正常
3、菌群的细菌生长和报告会使避免固有菌群污染。正常菌群的细菌生长和报告会使 医生和保健机构错误地认为它们引起感染的发生。另医生和保健机构错误地认为它们引起感染的发生。另 外，正常菌群的过度生长会掩盖真正的病原。外，正常菌群的过度生长会掩盖真正的病原。 3抽吸及抽吸后用无菌盐水冲洗和组织活检是怀疑厌氧抽吸及抽吸后用无菌盐水冲洗和组织活检是怀疑厌氧 菌感染时正确的标本采集方法菌感染时正确的标本采集方法(表表2)。用拭子采集标本。用拭子采集标本 最少考虑，因为拭子取样标本量相对较少且容易被邻最少考虑，因为拭子取样标本量相对较少且容易被邻 近的正常菌群污染。培养厌氧菌的标本应储存于室近的正常菌群污染。培养
4、厌氧菌的标本应储存于室 温，不能放冰箱，因为氧较容易扩散到冷的标本中去。温，不能放冰箱，因为氧较容易扩散到冷的标本中去。 一、标本的选择和收集一、标本的选择和收集4收集足够量的标本，使所要求的所有试验都能满意收集足够量的标本，使所要求的所有试验都能满意 地完成。标本量不足可产生假阴性结果。地完成。标本量不足可产生假阴性结果。5每份标本都要标明患者姓名、识别号码、标本来每份标本都要标明患者姓名、识别号码、标本来 源、采集日期和时间、采集者的姓名。源、采集日期和时间、采集者的姓名。6盛标本的容器要有助于病原菌的存活，无泄漏，在盛标本的容器要有助于病原菌的存活，无泄漏，在 运送和处理期间安全。运送和
5、处理期间安全。 表表1 用于细菌培养的常见临床标本的选择用于细菌培养的常见临床标本的选择 解剖部位解剖部位临临 床床 标标 本本正正 确确不不 正正 确确下呼吸道下呼吸道咳出的新鲜粘液和炎性细胞咳出的新鲜粘液和炎性细胞( (脓脓) )，痰，痰唾液、口咽分泌物、从鼻咽部窦唾液、口咽分泌物、从鼻咽部窦内排出物内排出物窦窦直接从窦内抽取或灌洗的分泌物，用内直接从窦内抽取或灌洗的分泌物，用内窥镜检查时刮取的或活检标本窥镜检查时刮取的或活检标本鼻或鼻咽拭子、鼻咽分泌物、痰，鼻或鼻咽拭子、鼻咽分泌物、痰，唾液唾液泌尿道泌尿道中段尿，用中段尿，用“直的直的”插入导管收集的尿，插入导管收集的尿，耻骨上穿刺尿，
6、抽吸，膀胱镜检查或其耻骨上穿刺尿，抽吸，膀胱镜检查或其它外科检查进收集的标本它外科检查进收集的标本FoleyFoley导尿管收集袋中的尿导尿管收集袋中的尿浅表伤浅表伤抽取的脓或局部清洗液抽取的脓或局部清洗液( (无菌盐水无菌盐水) )，源，源自真皮下的脓拭子自真皮下的脓拭子表面物拭子或由于表面物污染的表面物拭子或由于表面物污染的拭子，用含有防腐剂的盐水清洗拭子，用含有防腐剂的盐水清洗液液深部伤深部伤浓性物，坏死组织，或从深部取的组织浓性物，坏死组织，或从深部取的组织表面物质污染的标本表面物质污染的标本胃肠道胃肠道新鲜排出的粪便，内窥镜检查时收集的新鲜排出的粪便，内窥镜检查时收集的洗液或粪便洗液
7、或粪便直肠拭子，如果病人入院直肠拭子，如果病人入院33天后天后发展成腹泻，用于细菌培养发展成腹泻，用于细菌培养静脉血静脉血在抗生素庆用之前，从不同部位静脉穿在抗生素庆用之前，从不同部位静脉穿刺收集刺收集2 23 3份标本，对份标本，对9090磅的人每份血磅的人每份血大约大约20ml20ml；用含碘化合物或洗必汰消毒；用含碘化合物或洗必汰消毒凝固的血，在凝固的血，在24h24h内抽内抽1 1份或份或33份份血标本，每份培养血标本，每份培养20ml2g)(2g)无菌、防漏、宽无菌、防漏、宽口器口器;5ml;5ml无菌、防漏、宽无菌、防漏、宽口容器或口容器或Cary- Cary- BlairBlai
8、r培基培基(2g)(2g)无菌、防漏、宽无菌、防漏、宽口容器或用口容器或用10%10%福尔马林和福尔马林和/ /或或PVA;2mlPVA;2ml拭子转运拭子转运未防腐未防腐: : 1h,RT1h,RT运转培养基运转培养基24h,RT24h,RT21h,RT21h,RT1h,RT1h,RT1 124h,24h,4,24h,4,24h,-20-20或更冷或更冷未防腐未防腐: : 1h,RT1h,RT拭子转运系统拭子转运系统24h,RT24h,RT或或44未防腐未防腐1h,RT1h,RT福尔马林福尔马林/PVA/PVA时间无限定时间无限定, , RTRT2h,RT2h,RT24h24h4448h48
9、hRTRT或或44培养培养: 2d, : 2d, 443d43d4或更长时间或更长时间-70-70用于用于毒素检测毒素检测24h,24h,4448h48hRTRT24h,24h,44时间无限定时间无限定, RT, RT24h,24h,RTRT1/d1/d1 1或或2d2d标标本可测出本可测出低水平毒低水平毒素素1/d1/d1/d1/d1/d1/d住院超过住院超过3d3d或入院诊断不或入院诊断不是胃肠炎的患者未经医师是胃肠炎的患者未经医师会诊不做常规粪便培养。会诊不做常规粪便培养。对这些患者应考虑进行艰对这些患者应考虑进行艰难梭菌的检测。难梭菌的检测。除婴儿外不推荐用拭子做除婴儿外不推荐用拭子做
10、常规病原检测常规病原检测患者应是每患者应是每24h24h排泄液体或排泄液体或软大便软大便5 5次的患者。成形次的患者。成形或硬大便，不推荐。或硬大便，不推荐。-20-20或以上冷冻易于使细胞毒或以上冷冻易于使细胞毒素活性快速丢失素活性快速丢失有腹部痉挛的患者在发病有腹部痉挛的患者在发病6d6d内采集到的血或液状便内采集到的血或液状便的阳性率最高，所有的阳性率最高，所有EHECEHEC血清型检测志贺毒素比仅血清型检测志贺毒素比仅用于山梨醇用于山梨醇MacConkeyMacConkey培养培养O157:H7O157:H7好。好。该步骤不鼓励使用，因为该步骤不鼓励使用，因为它提供不了什么临床价值它提
11、供不了什么临床价值，且易误导。革兰或简单，且易误导。革兰或简单的亚甲基蓝染色可用于观的亚甲基蓝染色可用于观察白细胞。也有一些商业察白细胞。也有一些商业检测方法检测方法对淋球菌、志贺氏菌、弯对淋球菌、志贺氏菌、弯曲菌、单纯疱疹病毒、及曲菌、单纯疱疹病毒、及肛门携带的肛门携带的B B群链球菌或别群链球菌或别的溶血链球菌的检测，或的溶血链球菌的检测，或不能留样的患者，是保留不能留样的患者，是保留方法方法表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南瘘管瘘管见脓肿见脓肿液体：腹液体：腹部的、羊部的、羊膜的、腹膜的、腹水、胆汁、水、胆汁、关节穿刺关节穿刺液、心包液、心包的、腹膜的、腹膜
12、的、胸膜的、胸膜的、滑膜的、滑膜的、胸腔的、胸腔穿刺液穿刺液1.1.用碘酊充分消毒皮用碘酊充分消毒皮肤肤2.2.经穿刺抽吸或外科经穿刺抽吸或外科获取标本获取标本3.3.立即转运实验室立即转运实验室4.4.尽量多呈送液体；尽量多呈送液体；不要将拭子浸入液体不要将拭子浸入液体内转运内转运用于细菌和酵用于细菌和酵母的血培养瓶母的血培养瓶或无菌旋帽管或无菌旋帽管或厌氧转运系或厌氧转运系统统细菌细菌1ml1ml真菌真菌10ml10ml分枝杆菌分枝杆菌10ml10ml15min,15min,RTRT24h24h，RTRT心包液或心包液或用于真菌用于真菌培养的液培养的液体，体，24h,24h,44无无羊水和
13、后穹隆穿刺液应用羊水和后穹隆穿刺液应用厌氧系统送检，革兰染色厌氧系统送检，革兰染色前不需离心。其他液体检前不需离心。其他液体检测最好用细胞离心制备法测最好用细胞离心制备法做革兰染色做革兰染色坏疽组织坏疽组织见脓肿见脓肿胃的洗液胃的洗液或灌洗液或灌洗液检测分枝检测分枝杆菌杆菌幽门螺杆幽门螺杆菌活检组菌活检组织织患者早晨未进食，并患者早晨未进食，并卧床，采样卧床，采样1.1.用鼻胃管进入胃用鼻胃管进入胃2.2.用用25-50ml25-50ml冷却的无冷却的无菌蒸馏水灌洗菌蒸馏水灌洗3.3.获得标本并放入到获得标本并放入到防漏无菌容器防漏无菌容器4.4.在去除管子之前，在去除管子之前，停止抽吸，并钳
14、紧停止抽吸，并钳紧由消化科专家用内镜由消化科专家用内镜采样采样无菌、防漏容无菌、防漏容器器运输培基无菌运输培基无菌管管15min,15min,RTRT或在采集或在采集1h1h内中和内中和1h,RT1h,RT24h,24h,4424h,24h,441/d1/d1/d1/d标本必须立即处理，因为标本必须立即处理，因为分枝杆菌在胃灌洗中死亡分枝杆菌在胃灌洗中死亡很快。当运转达很快。当运转达1h1h时用时用碳酸氢钠中和碳酸氢钠中和为抗菌试验可能需培养为抗菌试验可能需培养表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南生殖器生殖器: :女女性，羊水性，羊水1.1.经羊膜穿刺或剖腹经羊膜穿
15、刺或剖腹产产厌氧转运系统厌氧转运系统, ,1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT无无不能接受用拭子采集或抽不能接受用拭子采集或抽吸的阴道分泌物标本，因吸的阴道分泌物标本，因为有潜在的阴道共生菌群为有潜在的阴道共生菌群的污染的污染前庭大腺前庭大腺分泌物分泌物1.1.用碘制剂消毒皮肤用碘制剂消毒皮肤2.2.由导管抽吸液体由导管抽吸液体厌氧转运系统厌氧转运系统, ,1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d宫颈分泌宫颈分泌物物1.1.用无润滑剂的扩阴用无润滑剂的扩阴器使宫颈可见器使宫颈可见2.2.用拭子从宫颈上拭用拭子从宫颈上拭去粘液和分泌物，丢去粘液和分
16、泌物，丢掉拭子掉拭子3.3.用新的无菌拭子紧用新的无菌拭子紧贴宫颈内道稳固地但贴宫颈内道稳固地但轻轻地采样轻轻地采样拭子转运拭子转运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d参阅关于针对衣原体和淋参阅关于针对衣原体和淋球菌采集和转运的教村球菌采集和转运的教村后穹隆液后穹隆液送抽吸物或液送抽吸物或液厌氧培养系统厌氧培养系统1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d子宫内膜子宫内膜组织和分组织和分泌物泌物1.1.通过望远镜导管经通过望远镜导管经宫颈采样宫颈采样2.2.将样本全量转入厌将样本全量转入厌氧转运系统氧转运系统厌氧培养系统厌氧培养系统1ml1ml2h
17、,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南妊娠产物妊娠产物1.1.将组织的一部分送入将组织的一部分送入无菌容器无菌容器2.2.如果从剖宫产获得如果从剖宫产获得, ,立立即转入厌氧转运系统即转入厌氧转运系统无菌管或无菌管或厌氧转运厌氧转运系统系统2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d不要处理恶露，该标本不要处理恶露，该标本的培养，可能会有误导的培养，可能会有误导作用作用尿道分泌物尿道分泌物患者排尿至少患者排尿至少1h1h后采集后采集1.1.拭去尿道口的渗出物拭去尿道口的渗出物2.2.用拭子按摩尿道，采用拭
18、子按摩尿道，采集排泄物，对女性病人集排泄物，对女性病人通过阴道靠着耻骨联合通过阴道靠着耻骨联合按摩尿道按摩尿道拭子转运拭子转运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d如未获得排泄物，用如未获得排泄物，用BetadineBetadine皂洗外尿道，皂洗外尿道，并用水冲洗，用泌尿生并用水冲洗，用泌尿生殖道拭子插入尿道殖道拭子插入尿道2-4cm2-4cm，旋转拭子，至少放置旋转拭子，至少放置2s2s抽出，以便吸收抽出，以便吸收阴道分泌物阴道分泌物1.1.擦除过多的分泌物和擦除过多的分泌物和排出液排出液2.2.用无菌拭子或吸管从用无菌拭子或吸管从阴道穹隆部粘膜处获取阴道穹隆部粘膜处获取
19、分泌物分泌物3.3.如果需要涂片，再用如果需要涂片，再用一个拭子一个拭子拭子转运拭子转运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d对于子宫内装置，将全对于子宫内装置，将全装置放入无菌容器并室装置放入无菌容器并室温转运。推荐用革兰染温转运。推荐用革兰染色方法而不是培养，诊色方法而不是培养，诊断细菌性阴道病断细菌性阴道病生殖生殖: :女性女性或男性，损或男性，损伤伤1.1.用无菌盐水清洗损伤用无菌盐水清洗损伤处，用解剖刀刃切去损处，用解剖刀刃切去损伤表面伤表面2.2.使渗出液积聚使渗出液积聚3.3.按压损伤底部，用无按压损伤底部，用无菌拭子用力擦底部采渗菌拭子用力擦底部采渗出液出液拭
20、子转运拭子转运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d用暗视野检查来辨认梅用暗视野检查来辨认梅毒螺旋体，用载玻片接毒螺旋体，用载玻片接触渗出液，加盖玻片，触渗出液，加盖玻片，放在保湿盒里，放在保湿盒里，( (平皿用平皿用湿纱布湿纱布) )，立即转运到实，立即转运到实验室，梅毒不能用人工验室，梅毒不能用人工培基培养培基培养表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南生殖生殖: :男性男性前列腺前列腺尿道尿道1.1.用肥皂和水清洗阴茎用肥皂和水清洗阴茎头头2.2.通过直肠按摩前列腺通过直肠按摩前列腺3.3.用无菌拭子收集液体用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内
21、或使液体进入无菌管内用泌尿生殖道拭子插入用泌尿生殖道拭子插入尿道腔尿道腔2-4cm2-4cm，旋转拭，旋转拭子，至少停留子，至少停留2s2s，而使，而使之容易吸收之容易吸收拭子转运或无菌拭子转运或无菌管管拭子转运拭子转运2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT24h,24h,RTRT1/d1/d1/d1/d前列腺分泌物的病原菌可前列腺分泌物的病原菌可通过按摩前后的尿标本定通过按摩前后的尿标本定量培养鉴定。精液也可以量培养鉴定。精液也可以培养培养下呼吸道下呼吸道下支气管下支气管肺泡灌洗肺泡灌洗、支气管、支气管刷或洗液刷或洗液、气管抽、气管抽吸物吸物痰，咳出痰，咳出痰，诱导
22、痰，诱导性性1.1.将抽吸物或洗出物放将抽吸物或洗出物放入痰采集器入痰采集器2.2.将刷出物放入有将刷出物放入有1ml1ml盐水的无菌容器内盐水的无菌容器内1.1.在医生或护士的直接在医生或护士的直接监视下采集标本监视下采集标本2.2.让患者清洗或漱口让患者清洗或漱口, ,去除口腔过多菌群去除口腔过多菌群3.3.指导患者深咳，产生指导患者深咳，产生下呼吸道标本下呼吸道标本( (非鼻后非鼻后液液) )。采集到无菌容器。采集到无菌容器内内1.1.刷完牙龈和舌头后让刷完牙龈和舌头后让患得用水漱口患得用水漱口2.2.借助喷雾器使患者吸借助喷雾器使患者吸入约入约25ml 3%-10%25ml 3%-10
23、%的无的无菌盐水菌盐水3.3.采集诱导的痰到无菌采集诱导的痰到无菌容器内容器内无菌容器无菌容器1ml1ml无菌溶器无菌溶器1ml1ml最最小量小量: :细菌细菌, , 1ml1ml无菌容器无菌容器1ml1ml2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT1/d1/d1/d1/d1/d1/d定量分析需定量分析需40-80ml40-80ml液体量，液体量，做刷出物的定量分析，可做刷出物的定量分析，可将刷出物放入将刷出物放入1ml1ml盐水中盐水中对于不能产生标本的儿科对于不能产生标本的儿科患者，呼吸道
24、治疗师应经患者，呼吸道治疗师应经抽吸获得标本，最好的标抽吸获得标本，最好的标本应本应1010个鳞状细胞个鳞状细胞/100/100视野视野(10(10物镜和物镜和1010目镜目镜) )同上同上表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南上呼吸道上呼吸道鼻鼻鼻咽鼻咽喉或咽喉或咽1.1.用拭子拭去损伤表面用拭子拭去损伤表面的分泌物和碎片，并丢的分泌物和碎片，并丢弃弃2.2.用第二个拭子用力在用第二个拭子用力在损伤处采样，避免接触损伤处采样，避免接触正常组织正常组织1.1.用预先被无菌盐水湿用预先被无菌盐水湿润的拭子插入鼻孔约润的拭子插入鼻孔约1-1-2cm2cm2.2.对着鼻粘膜
25、用力旋转对着鼻粘膜用力旋转1.1.用藻酸钙拭子经鼻轻用藻酸钙拭子经鼻轻轻插入鼻咽后部轻插入鼻咽后部2.2.慢慢旋转拭子慢慢旋转拭子5s5s以吸以吸收分泌物收分泌物3.3.移去拭子，在床边或移去拭子，在床边或检查桌上接种培养基，检查桌上接种培养基，或将拭子转入转运培养或将拭子转入转运培养基基1.1.用压舌板压舌用压舌板压舌2.2.用无菌拭子从咽后、用无菌拭子从咽后、扁桃体和发炎区域采样扁桃体和发炎区域采样拭子转运拭子转运拭子转运拭子转运直接培养基接种直接培养基接种或拭子转运或拭子转运拭子转运拭子转运2h,RT2h,RT2h, RT2h, RT平皿平皿: : 15min,RT15min,RT拭子拭
26、子: 2h, : 2h, RTRT2h, RT2h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT24h, RT1/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d对细菌学评价，不能采表浅对细菌学评价，不能采表浅组织，应选择组织活检标本组织，应选择组织活检标本或针抽吸物或针抽吸物先前的鼻培养应保存，以用先前的鼻培养应保存，以用于链球菌和链球菌携带者或于链球菌和链球菌携带者或鼻损伤的检测鼻损伤的检测喉拭子培养不能用于会厌发喉拭子培养不能用于会厌发炎的患者，检测淋球菌的拭炎的患者，检测淋球菌的拭子应放入含碳的转运培养基子应放入含碳的转运培养基，
27、采集后，采集后12h12h内接种平皿。内接种平皿。JEMBECJEMBEC、BiobagsBiobags、GonoPakGonoPak宜于室温下转运宜于室温下转运组织组织外科手术或皮肤活检程外科手术或皮肤活检程序收集序收集厌氧转运系统或厌氧转运系统或无菌旋帽瓶，需无菌旋帽瓶，需要加几滴盐水保要加几滴盐水保持组织潮湿持组织潮湿15min, RT15min, RT24h,24h,RTRT无无呈送组织的量尽可能多，如呈送组织的量尽可能多，如可能在可能在-70-70保存一定量的保存一定量的外科组织以应进一步研究之外科组织以应进一步研究之需，不要呈送在表面简单磨需，不要呈送在表面简单磨擦的拭子，对于定量
28、研究擦的拭子，对于定量研究1cm1cm3 3的样本是适宜的的样本是适宜的表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南尿尿女性女性, ,中段中段男性，中男性，中段段直导管直导管导管内导管内1.1.用肥皂和水完全清洗用肥皂和水完全清洗尿道区域尿道区域2.2.用湿纱布垫漂洗用湿纱布垫漂洗3.3.分开阴唇，开始排泄分开阴唇，开始排泄4.4.排出几毫升后，不停排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿止尿流，采集中段尿1.1.用肥皂和水清洗阴茎用肥皂和水清洗阴茎头头2.2.用湿纱布垫漂洗用湿纱布垫漂洗3.3.回缩包皮，开始排泄回缩包皮，开始排泄4.4.排出几毫升后，不停排出几毫升后，不停止
29、尿流，采集中段尿，止尿流，采集中段尿，用于细菌培养用于细菌培养1.1.用肥皂和水完全清洗用肥皂和水完全清洗尿道区域尿道区域2.2.用湿纱布垫漂洗用湿纱布垫漂洗3.3.将导管无菌插入膀胱将导管无菌插入膀胱4.4.流过流过15ml15ml尿之后，采尿之后，采集尿入无菌容器内集尿入无菌容器内1.1.用用70%70%乙醇消毒导管采乙醇消毒导管采集部分集部分2.2.用针头和注射器无菌用针头和注射器无菌采集采集5-10ml5-10ml尿尿3.3.转入无菌管或容器内转入无菌管或容器内无菌广口容器，无菌广口容器，1ml1ml，或尿，或尿转运试剂盒转运试剂盒无菌宽口容器无菌宽口容器, 1ml, 1ml，或，或尿
30、转运试剂盒尿转运试剂盒无菌防漏容器无菌防漏容器无菌防漏容器无菌防漏容器未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT未防腐未防腐: :2h, RT2h, RT防腐：防腐：24h, RT24h, RT24h 424h 424h 424h 424h 424h 424h 424h 41/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d女性尿中的衣原体抗原检女性尿中的衣原体抗原检测的敏感性可能较男性低。测的敏
31、感性可能较男性低。尿对细胞系有毒，因而不尿对细胞系有毒，因而不能用于衣原体培养之标本。能用于衣原体培养之标本。中段尿部分用于细菌培养中段尿部分用于细菌培养首段尿用于衣原体的探针首段尿用于衣原体的探针和抗原检测。收集探针和和抗原检测。收集探针和抗原检测的标本待最后一抗原检测的标本待最后一次排尿至少次排尿至少2h2h后后该程序可能导致尿道菌落该程序可能导致尿道菌落进入膀胱并增加医源性感进入膀胱并增加医源性感染的危险染的危险留管的病人膀胱内总是有留管的病人膀胱内总是有细菌的。除非他们有症状细菌的。除非他们有症状，不要从这些病人收集尿，不要从这些病人收集尿标本标本伤口伤口见脓肿见脓肿AFB：抗酸杆菌；
32、：抗酸杆菌；BAP：血琼脂平板；：血琼脂平板；BHI：心脑浸液；：心脑浸液；CHOC：巧克力琼脂；：巧克力琼脂；CSF：脑脊液；：脑脊液；CVP：中心静脉压；：中心静脉压；EtOH：乙醇；：乙醇；I.V：静脉内；：静脉内；PVA：聚乙烯乙醇固定液；：聚乙烯乙醇固定液；RT：室温：室温 表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南二、标本的转运二、标本的转运 用于细菌培养的标本应立即转运至实验室。过度延长用于细菌培养的标本应立即转运至实验室。过度延长或将标本暴露于极端温度会危及结果，必须避免。转运一或将标本暴露于极端温度会危及结果，必须避免。转运一般原则如下：般原则如下：1标
33、本必须及时送至实验室。如果运送时间大于标本必须及时送至实验室。如果运送时间大于2h， 需用特殊运送培养基或要求冷藏温度需用特殊运送培养基或要求冷藏温度(表表3)。2细菌培养标本储存不要超过细菌培养标本储存不要超过24h，即使合适的运送培，即使合适的运送培 基或冷藏温度。基或冷藏温度。 3用于细菌学培养的临床标本转运最合适的时间取决于获得的用于细菌学培养的临床标本转运最合适的时间取决于获得的 材料的体积。小体积的液体材料的体积。小体积的液体(1ml)或组织或组织(1cm3)应在应在15 30min内提交，以避免蒸发、干燥或暴露于周围条件下。大内提交，以避免蒸发、干燥或暴露于周围条件下。大体体 积
34、和在运送培基内的标本可储存长至积和在运送培基内的标本可储存长至24h。4对周围条件特别敏感的细菌包括志贺菌、淋病奈瑟菌、脑膜对周围条件特别敏感的细菌包括志贺菌、淋病奈瑟菌、脑膜 炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和厌氧菌。通过培养炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和厌氧菌。通过培养 进行志贺菌的可靠检测要求及时进行。流感嗜血杆菌对低温进行志贺菌的可靠检测要求及时进行。流感嗜血杆菌对低温 敏感。决不能冷冻脑脊液、生殖器、眼或中耳标本。敏感。决不能冷冻脑脊液、生殖器、眼或中耳标本。5从一个实验室到另一个实验室转运临床标本和传染性物质，从一个实验室到另一个实验室转运临床标本和传染性物质， 不管距离远
35、近，都要严格注意标本包装和标记说明。运送期不管距离远近，都要严格注意标本包装和标记说明。运送期 间，被运送的物质必需适当地标记、包装和保护。间，被运送的物质必需适当地标记、包装和保护。特殊标本运送指南见表特殊标本运送指南见表3。 三、不常见细菌标本三、不常见细菌标本 某些引起传染病的细菌很少碰到，要求特殊运某些引起传染病的细菌很少碰到，要求特殊运送条件或运送培养基。在许多情况下，这些标本需送条件或运送培养基。在许多情况下，这些标本需要送到参考实验室，则需要相对长的时间。表要送到参考实验室，则需要相对长的时间。表4列出列出了这些标本和这些细菌的转运条件。了这些标本和这些细菌的转运条件。 表表4
36、不常见菌的标本处理不常见菌的标本处理 细菌细菌( (疾病疾病) )标本选择标本选择转运条件转运条件注注 释释巴通体属巴通体属( (猫抓热猫抓热) )血、组织、淋巴结抽出物血、组织、淋巴结抽出物4141周，周，-70-70长期长期用用GiemsaGiemsa染色可在红细胞内或上看见菌体。组织用染色可在红细胞内或上看见菌体。组织用WarthinWarthin- Starry- Starry银染色。银染色。SPSSPS有毒性有毒性伯氏疏螺旋体伯氏疏螺旋体( (莱姆病莱姆病) )皮损周围活检，血、皮损周围活检，血、CSFCSF保持组织潮湿和无菌；如保持组织潮湿和无菌；如果可能亲自送到实验室果可能亲自送
37、到实验室除培养外，考虑除培养外，考虑PCRPCR，培养阳性率低。，培养阳性率低。WarthinWarthin- -StarryStarry银染组织。银染组织。AOAO和和GiemsaGiemsa染色用于血液和染色用于血液和CSFCSF回归热螺旋体回归热螺旋体( (回归热回归热) )血涂片血涂片( (血血) )如可能亲自送交实验室如可能亲自送交实验室盐水湿片直接用暗视野显微镜观察。用盐水湿片直接用暗视野显微镜观察。用WrighrsWrighrs或或GiemsaGiemsa染色。血培养不可靠染色。血培养不可靠布氏杆菌布氏杆菌血、骨髓血、骨髓室温运送；儿科溶解室温运送；儿科溶解- -离心离心试管有帮
38、助试管有帮助如维持如维持3030天可用常规血培养瓶。可能需盲传。关节天可用常规血培养瓶。可能需盲传。关节炎用关节液培养。怀疑布氏菌病通知实验室炎用关节液培养。怀疑布氏菌病通知实验室克雷伯肉芽肿杆菌克雷伯肉芽肿杆菌( (腹股腹股沟肉芽肿；杜诺凡肉芽肿沟肉芽肿；杜诺凡肉芽肿) )组织、表面下刮片组织、表面下刮片室温运送室温运送主要是一种热带疾病，主要是一种热带疾病，WrightsWrights或或GiemsaGiemsa染色。仅染色。仅上皮是不够的，细菌不能培养上皮是不够的，细菌不能培养柯克斯体柯克斯体(Q(Q热热) )立克次体立克次体( (斑点热、斑疹伤寒斑点热、斑疹伤寒) )血清、血液、组织血
39、清、血液、组织血液和组织冷冻于血液和组织冷冻于-70-70直直到运送到运送分离送参考实验室，优先选择血清学诊断分离送参考实验室，优先选择血清学诊断埃立克体属埃立克体属血涂片，皮肤活检，血液血涂片，皮肤活检，血液( (用肝素或用肝素或EDTAEDTA抗凝抗凝) )，CSFCSF，血清血清培养材料在冰上运送；保培养材料在冰上运送；保持组织湿润和无菌，保存持组织湿润和无菌，保存于于4 42020直到检测或直到检测或- -7070运送；运送；PCRPCR检测需在冰检测需在冰上或冷冻运送上或冷冻运送优先选择血清学诊断，用甲醇固定涂片，用优先选择血清学诊断，用甲醇固定涂片，用FAFA或或GimenezGi
40、menez染色，分离送参考实验室。染色，分离送参考实验室。CSFCSF直接检测或直接检测或PCRPCR弗朗西斯菌属弗朗西斯菌属( (土拉热土拉热) )淋巴结抽吸物、刮片，病淋巴结抽吸物、刮片，病损活、血液、痰损活、血液、痰迅速转送实验室或冷冻；迅速转送实验室或冷冻；在干冰上运送在干冰上运送送参考实验室，血清学实验帮助。组织送参考实验室，血清学实验帮助。组织GramGram染色无染色无效。效。IFAIFA可用。当时培养有效性可用。当时培养有效性10%10%钩端螺旋体属钩端螺旋体属血清，血液血清，血液( (枸橼酸盐抗凝枸橼酸盐抗凝剂不能用剂不能用) )，CSF(CSF(第第1 1周周) )，尿尿(
41、1(1周后周后) )血血1h1h；尿；尿1h1h或用或用1%1%牛血牛血清白蛋白清白蛋白1:101:10稀释储存于稀释储存于4 42020，或用碳氢钠中和，或用碳氢钠中和血清学试验最有帮助。酸性尿有害。暗视野显微镜血清学试验最有帮助。酸性尿有害。暗视野显微镜和直接和直接FAFA可用。组织用可用。组织用WarthinWarthin-Starry-Starry银染色银染色链杆菌属链杆菌属( (鼠咬热哈佛希鼠咬热哈佛希尔热尔热) )血、抽取关节液血、抽取关节液优选高容量瓶优选高容量瓶不能冷冻。生长需血、血清或腹水。禁用不能冷冻。生长需血、血清或腹水。禁用SPSSPS。AOAO染染色有帮助色有帮助 A
42、O吖啶橙吖啶橙;SPS：多聚茴者脑黄酸钠：多聚茴者脑黄酸钠 四、标本的处理四、标本的处理(检测检测) 细菌标本的检测包括：染色，培养，免疫学细菌标本的检测包括：染色，培养，免疫学方法检测抗原和分子生物学技术检测核酸序列。方法检测抗原和分子生物学技术检测核酸序列。推荐方法见表推荐方法见表5. (一一)常见细菌标本革兰染色和接种培养基的建议常见细菌标本革兰染色和接种培养基的建议 见表见表5表表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议 标本或微生物标本或微生物革兰染色革兰染色需氧培养基需氧培养基厌氧培养基厌氧培养基备备 注注 体腔液体腔液脑脊液脑脊液( (常规常规
43、) )脑脊液脑脊液( (分流分流) )心包心包胸腔胸腔腹腔腹腔慢性非卧床腹膜透析慢性非卧床腹膜透析滑液滑液骨髓骨髓导管头导管头外耳液外耳液/ /拭子拭子内耳液内耳液眼眼X XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XB CB CB C ThB C ThB CB CB C MacB C MacB CB CB C ThB C ThB CB CB CB CB BB C MacB C MacB CB CB CB CBBABBABBABBABBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CANBBABBABBABBABBABBA可使用血液培养瓶培养所有体可使用血液培养瓶培养所有体
44、腔液大体积标本液腔液大体积标本液消化道消化道粪便粪便直肠拭子直肠拭子泌尿生殖道泌尿生殖道阴道阴道/ /宫颈宫颈尿道尿道/ /阴茎阴茎其它其它X XX XB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca EBEBEBB TMB TMB C Mac TM B C Mac TM BBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN对所有消化道标本，空对所有消化道标本，空/ /大肠大肠弯曲菌在弯曲菌在5%O5%O2 2-10%CO-10%CO2 2-85%N2-85%N2， 4242培养培养B B组链球菌筛选组链球菌筛选选择肉汤传代培养
45、选择肉汤传代培养到到B B下呼吸道下呼吸道痰痰气管吸出物气管吸出物支气管肺泡灌洗液支气管肺泡灌洗液支气管镜刷清洗液支气管镜刷清洗液X XX XX XX XB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacBBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN进行厌氧培养要求对支气管镜进行厌氧培养要求对支气管镜刷保护刷保护组织组织X XB C MacThB C MacThBBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN上呼吸道上呼吸道鼻咽鼻咽鼻鼻喉喉B CB CB BB B或或SSASSA会厌需要增加巧克力琼脂会厌需
46、要增加巧克力琼脂尿液尿液B MacB Mac伤口或脓肿伤口或脓肿拭子拭子吸取物吸取物X XX XB C MacB C MacB C MacB C MacBBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN拭子不推荐厌氧培养拭子不推荐厌氧培养百日咳和副百日咳博百日咳和副百日咳博德特氏菌德特氏菌Regan LoweRegan Lowe布鲁氏菌布鲁氏菌B CB C白喉杆菌白喉杆菌胱氨酸胱氨酸- -亚碲酸盐亚碲酸盐或吕氟勒血清或吕氟勒血清艰难梭菌艰难梭菌CCFACCFA大肠杆菌大肠杆菌O157:H7O157:H7山梨醇山梨醇-Mac-Mac志贺毒素志贺毒素EIAEIA比较敏感比较敏感土拉热弗朗
47、西丝氏菌土拉热弗朗西丝氏菌C C或或BCYEBCYE表表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议B B型群链球菌型群链球菌LIMLIM肉汤肉汤革兰染色象革兰染色象”鱼群鱼群”杜克莱氏嗜血杆菌杜克莱氏嗜血杆菌C+C+万古霉素万古霉素(3g/mll)(3g/mll)幽门螺杆菌幽门螺杆菌X XB B弯曲菌气体环境弯曲菌气体环境35353737军团菌军团菌BCYEBCYE钩端螺旋体钩端螺旋体FletchersFletchers培养培养基或基或EMJHEMJH3030培养至培养至13WK13WK淋球菌淋球菌TMTM弧菌弧菌TCBSTCBS耶尔森氏菌属耶尔森氏菌属CIN
48、CINB：血液琼脂平板；：血液琼脂平板；C：巧克力琼脂平板；：巧克力琼脂平板；Mac：麦康凯琼脂；：麦康凯琼脂；Th：巯基乙酸培养基；：巯基乙酸培养基；Ca：弯曲菌琼脂；：弯曲菌琼脂；HE：Hektoen氏培养基；氏培养基；EB：增：增菌肉汤；菌肉汤；SSA：A型链球菌选择性琼脂平板；型链球菌选择性琼脂平板；TM：Thayer-Martin;BCYE：平衡活性炭酵母抽提物；：平衡活性炭酵母抽提物；TCBS：硫代硫酸：硫代硫酸-柠檬酸柠檬酸-胆盐蔗糖琼脂；胆盐蔗糖琼脂；CIN：cefsulodin-irgasan-novobiocin;BBA：布鲁氏菌血琼脂；：布鲁氏菌血琼脂；LKV：含卡那霉素
49、和万古霉素的可溶羊血；：含卡那霉素和万古霉素的可溶羊血；BBE：拟杆菌胆汁七叶苷：拟杆菌胆汁七叶苷(bacteroides bile esculin)；CAN：厌氧性多粘菌素：厌氧性多粘菌素E-萘啶酸；萘啶酸；CCFA：环丝氨酸：环丝氨酸-头孢噻吩头孢噻吩-果糖琼脂；果糖琼脂；CAPD：慢性非卧床腹膜透析体液：慢性非卧床腹膜透析体液如果标本采集正确，根据需要进行厌氧培养。如果标本采集正确，根据需要进行厌氧培养。 表表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议革兰染色无论何时都推荐：革兰染色无论何时都推荐：快速染色结果对病人防治是需要的；快速染色结果对病人防治是
50、需要的；细胞组成分析用于决定标本是否适当；细胞组成分析用于决定标本是否适当；结果有助于解释培养结果。结果有助于解释培养结果。 厌氧菌培养应仅仅包括规定好的合适的标本来源厌氧菌培养应仅仅包括规定好的合适的标本来源(表表2)和无氧容器运转并没有被皮肤粘膜正常菌群污染的和无氧容器运转并没有被皮肤粘膜正常菌群污染的标本。标本。 (二二)标本处理一般原则标本处理一般原则 1安全安全2及时送往实验室，要求见表及时送往实验室，要求见表33标本标记和试验医嘱要求标本标记和试验医嘱要求 (1)记录标本到达实验室的时间记录标本到达实验室的时间 (2)记录标本接种的时间记录标本接种的时间 (3)接受标本时仔细检查标
