1、第一章第一章实验室建设及设备仪器实验室建设及设备仪器 1 1.1 1.1 实验室建设实验室建设 1.2 1.2 实验环境控制实验环境控制1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.4 1.4 常用器皿常用器皿1.5 1.5 型微生物厂主要仪器及设备型微生物厂主要仪器及设备 2 1.1 1.1 实验室建设实验室建设1.1.1 1.1.1 微生物实验室设计微生物实验室设计 微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。 3 1.1 1.1 实验室建设实验室建设1.1
2、.2 1.1.2 微生物实验室基本要求微生物实验室基本要求（一）准备室 准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。（二）洗涤室 洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。 4 1.1 1.1 实验室建设实验室建设（三）灭菌室 灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。（四）无菌室 无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌
3、种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。5 1.1 1.1 实验室建设实验室建设1. 无菌室的设置 无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点：（1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。内间面积22.55m2，外间面积122m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。（2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的
4、位置上。 6 1.1 1.1 实验室建设实验室建设（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都挂对拉的窗扇。（4）无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上（即离工作台最远的位置），最好为双层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启，以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。 7 1.1 1.1 实验室建设实验室建设2. 无菌室内设备和用具（1）无菌室内的工作台，不论是什么材质、用
5、途的，都要求表面光滑和台面水平。（2）在内室和外室各安装一个紫外灯（多为30W）。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方，离地面2m，外室的紫外线灯可安装在外室中央。（3）外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有来苏儿水的瓷盆和毛巾、手持喷雾器和5%石炭酸溶液等。（4）内室应有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀、剪、镊子、70%的酒精棉球、工业酒精、载玻璃片、特种蜡笔、记录本、铅笔、标签纸、胶水、废物筐等。 8 1.1 1.1 实验室建设实验室建设3. 无菌室的灭菌消毒（1）薰蒸：这是无菌室彻底灭菌的措施。无菌室使用了较长时间，污染比较严重时，应进行薰蒸灭菌。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。（2
6、）喷雾：在每次使用无菌室前进行。喷雾可促使空气中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微尘飞场，并有杀菌作用。可用5%石炭酸喷雾。（3）紫外线照射：在每次使用无菌室前进行。紫外线有较好的杀菌效果。通常应开启紫外线灯照射3060min。 9 1.1 1.1 实验室建设实验室建设4. 无菌室工作规程（1）无菌室灭菌。每次使用前开启紫外线灯照射30min以上，或在使用前30min，对内外室用5%石炭酸喷雾。（2）用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室换上已灭菌的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液将手浸洗2分钟。（3）将各种需用物品搬进内室清点、就位，用5%石炭酸在工作台面上方和操作
7、员站位空间喷雾，返回外室，510min后再进内室工作。 10 1.1 1.1 实验室建设实验室建设（4）接种操作前，用70%酒精棉球擦手；进行无菌操作时，动作要轻缓，尽量减少空气波动和地面扬尘。（5）工作中应注意安全。如遇棉塞着火，用手紧握或用湿布包裹熄灭，切勿用嘴吹，以免扩大燃烧；如遇有菌培养物洒落或打碎有菌容器时，应用浸润5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸润5%石炭酸的抹布擦拭台面或地面，用酒精棉球擦手后再继续操作。（6）工作结束，立即将台面收拾干净，将不应在无菌室存放的物品和废弃物全部拿出无菌室后，对无菌室用5%石炭酸喷雾，或开紫外线灯照射30min。 11 1.1 1.1 实验室建设实验室
8、建设（五）恒温培养室1. 培养室的设置（1）培养室应有内、外两间，内室是培养室，外室是缓冲室。房间容积不宜大，以利于空气灭菌，内室面积在3.24.414m2左右，外室面积在3.21.86m2左右，高以2.5m左右为宜，都应有天花板。（2）分隔内室与外室的墙壁上部应设带空气过滤装置的通风口。（3）为满足微生物对温度的需要，需安装恒温恒湿机。（4）内外室都应在室中央安装紫外线灯，以供灭菌用。 12 1.1 1.1 实验室建设实验室建设2. 培养室内设备及用具（1）内室通常配备培养架和摇瓶机（摇床）。常用的摇瓶机有旋转式、往复式两种。（2）外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、手持喷雾器和5%石炭酸溶
9、液、70%酒精棉球等。3. 培养室的灭菌、消毒 同无菌室的灭菌、消毒措施。 小规模的培养可不启用恒温培养室，而在恒温培养箱中进行。 13 1.1 1.1 实验室建设实验室建设（六）普通实验室 进行微生物的观察、计数和生理生化测定工作的场所。室内的陈设因工作侧重点不同而有很大的差异。一般均配备实验台、显微镜、柜子及凳子。实验台要求平整、光滑，实验柜要足以容纳日常使用的用具及药品等。（七）实验室其他要求 水、电、气等的容量、布设、性能均应满足实验室工作的需要。返回14 1.2 1.2 实验环境控制实验环境控制 1.2.1 1.2.1 检验的方法检验的方法（一）平板检验法 用培养微生物主要类群的常规
10、培养基，如牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏1号培养基、马丁氏培养基、马铃薯葡萄糖培养基，分别倒成平板，每种两个，都放入无菌室内。检验时，按无菌操作各将其中一个平板的盖子打开，经过预定时间后再行盖好；另外一个不开盖子的作为对照，一起放入30环境培养，48小时后检验有无菌落生长。 15 1.2 1.2 实验环境控制实验环境控制 （二）斜面检验法 将常用的牛肉膏蛋白胨培养基斜面(与上相同)各取2管，放入无菌室。按无菌操作各将其中的一管打开棉塞，将棉塞放入灭菌的培养皿内。经过预定时间后，再将棉塞通过火焰塞好试管。连同对照一起培养，48小时后检验有无杂菌生长。 16 1.2 1.2 实验环境控制实验环境控制
11、 1.2.2 1.2.2 检验时间检验时间（一）空气灭菌后的检验 无菌室用甲醛或其它药剂熏蒸后，在开始使用前30min或1小时打开培养皿盖子，至使用无菌室时盖好，其目的是为了检验无菌室内空气灭菌的效果。（二）紫外线灭菌效果的检验 无菌室用紫外线灯照射后，可在不同高度和不同位置用琼脂平板检验空气中的杂菌，以判断紫外线的灭菌效果。必要时应调整照射时间或紫外线灯的高度。 17 1.2 1.2 实验环境控制实验环境控制 （三）操作过程中空气污染情况的检验 为了检验在使用无菌室的过程中，由于人员的进出、器材的搬放、接种操作的动作等原因造成的空气污染的情况，可在准备工作结束后接种操作开始时打开盖子，经5m
12、in、30min或直到工作结束时再盖好，以检验在不同的使用时间内空气污染的程度。18 1.2 1.2 实验环境控制实验环境控制 1.2.3 1.2.3 检验结果分析检验结果分析 检验用的平板或斜面，在30培养48小时后，检验是否长有菌落、菌落的数量，并由菌落形态判断杂菌的种类。一般要求平板开盖5min者应不超过3个菌落；斜面开塞30min者应不长菌落为合格。从空气中杂菌的种类可以考虑采取有效措施，增进灭菌效果。如霉菌较多，可先用5%石炭酸灭菌后，再用甲醛熏蒸；如细菌较多时，可采用乳酸与甲醛交替熏蒸的办法。 返回19 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.3.1 1.3.
13、1 显微镜显微镜（一）显微镜的基本结构 普通光学显微镜由机械和光学两大部分组成。机械部分包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒和调节器等；光学部分包括目镜、物镜、聚光器、虹彩光圈及反光镜。显微镜结构的各部分见图1-1。 20 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 图1-1 显微镜构造示意图 1.物镜转换器；2.物镜；3.游标卡尺；4.载物台；5.聚光器；6.虹彩光圈7.光源；8.镜座；9.点源开关；10.光源滑动变阻器；11.粗调螺旋； 12.微调螺旋；13.镜臂；14.镜筒；15.目镜；16.标本移动螺旋 21 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领
14、1. 镜筒 镜筒上端装目镜，下端接转换器。镜筒有单筒和双筒两种。单筒有直立式和后倾式两种。双筒全是倾斜式的，其中一个筒有屈光度调节装置，以备两眼视力不同者调节使用。两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不同者调节使用。2. 物镜转换器 转换器装在镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个或5个孔，用于安装不同规格的物镜。 22 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 3. 载物台 又称镜台，是放置标本的地方，多数为方形和圆形的平台，中央有一通光孔；载物台上有移动器，作用是夹住和移动标本，转动螺旋可使标本前后和左右移动，其上的刻度标尺可指明标本所在位置。4. 镜臂 镜臂支撑镜筒、载物台、聚
15、光器和调节器。镜臂有固定式和活动式（可改变倾斜度）两种。 23 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 5. 镜座 镜座连接镜臂，支撑整台显微镜，其上有反光镜。6. 调焦装置 调节物镜和被观察物体之间距离的机件。有镜臂调节器和镜台调节器两种，前者通过升降镜臂来调焦距，后者通过升降载物台来调焦距。包括大、小螺旋调节器各一个，前者又称粗调节器，后者也叫微调节器，通过调节器调焦，可清晰地观察到标本。 24 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 7. 物镜 是接近被观察物品（标本）的镜头，亦称接物镜。根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，分为低倍物镜、高倍物镜和油镜
16、三种，低倍物镜有4、10、20；高倍物镜有40和45；油镜有90、95和100等。数字越大，放大倍数越高。8. 目镜 是接近观察者的眼睛的镜头，亦称接目镜。把经物镜放大的实像再放大一次，并映入观察者的眼中。通常有5、10、16等规格。 25 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 9. 聚光器 安装在载物台下，能将平行的光线聚焦于标本，增强照明度。聚光器可以升降。10. 反光镜 是普通光学显微镜的取光设备，使光线射向聚光镜，分平、凹两面。11. 内光源 是较好的光学显微镜自身带有的照明装置，安装在镜座内部，由强光灯泡发出光线，通过安装在镜座的集光镜射入聚光镜。 26 1.3
17、1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 （二） 显微镜的使用方法1. 显微镜的放置 从显微镜箱或柜内取出或放入显微镜时，应一手提镜臂，另一手托镜座，让显微镜直立，防止目镜从镜筒中脱落。显微镜应直立放置在桌上。离桌缘3cm，检查各部件是否完好，镜身、镜头必须清洁。 2 .标本放置 下降载物台或升高镜筒，使物镜远离载物台，将标本玻片置于载物台上，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处在物镜的正下方。 27 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 3 .低倍镜观察 将低倍镜对正下方，侧面注视，用粗调节器调节上升载物台或下降镜筒，使物镜与玻片接近，距离约0.5cm处，开放光圈
18、，下降聚光器。如有内置光源灯可通过调节电压以获取适当的照明亮度；如使用反光镜采集自然光或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数，选用凹面或平面反光镜并调节其角度。 再由目镜观察，同时转动粗调节器下降载物台或升高镜筒使物镜缓缓远离玻片，标本在视野中显现后，再使用微调节器调节至图像清晰。28 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 4 .高倍镜观察 在低倍镜下找到合适的目标并将其移至视野中心后，侧面注视，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至正下方。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后，用微调节器使物像清晰，利用推进器移动标本仔细观察并记录所观察到的结果。 在一般情况下
19、，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦状态，这种现象称为物镜的同焦。29 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 5 .油镜观察 使用同焦显微镜时，在高倍镜或低倍镜下找到要观察的区域后，移开镜头，在待观察的区域滴加12镜油，将油镜转至油中，调节光强，使视野的亮度合适，用微调节器调节物像清晰为止。 对于不等焦的显微镜，用粗调节器下降载物台或升高镜筒使物镜逐渐远离玻片，在标本观察区滴加镜油，然后将油镜转至镜筒下方，须在侧面注视下，用粗调节器调节上升载物台或下降镜筒，使物镜与玻片接近，将油镜前端浸入镜油中，并几乎与标本相
20、接30 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 6 .显微镜用毕后的处理 用粗调节器使物镜远离玻片，取下载玻片。 用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许镜头清洗液擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的镜头清洗液。 切忌用手或其它纸擦拭镜头，以免使镜头沾上污渍或产生划痕，影响观察。 用擦镜纸清洁其它物镜及目镜；用绸布清洁显微镜的金属部件。31 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 （三）显微镜的维护和保养 显微镜是贵重精密的光学仪器，正确的使用、维护与保养，不但观察物体清晰，而且延长显微镜的使用寿命。1 .显微镜应放置在通风干燥，灰尘少，
21、不受阳光直接曝晒的地方。不使用时，用有机玻璃或塑料布防尘罩罩起来。也可套上布罩后放入显微镜箱内或显微镜柜内，并在箱或柜内放置干燥剂。2 .显微镜要避免与酸、碱及易挥发具腐蚀性的化学物品放在一起，以免显微镜受损。 32 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 3 .显微镜应防止震动和暴力。粗、微调节螺旋、聚光器螺旋和标本移动器等机械部分要灵活而不松动，如不灵活可在滑动部位滴加少许润滑油。4 .透镜表面有污垢时，可用清洁的脱脂纱布或擦镜纸，沾上少许镜头清洗液（二甲苯或石油精）揩拭，切忌用酒精，否则透镜上的胶将被溶解，而使透镜脱落。5 .用油镜观察后，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后
22、用擦镜纸沾少许镜头清洗液擦拭，最后用干净的擦镜纸擦干。 33 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 6 .当显微镜以灯泡为光源，且需要更换时，可将仪器底部翻转，抓住灯座反时针转90取下灯座，拔下灯泡换上新的灯泡，然后把接插件卡脚对准底座上两槽口，顺时针转90即可。7.换保险丝时，握住保险丝座，反时针旋下保险丝座，换上好的保险丝，顺时针旋上保险丝座即可。8.仪器长期使用后应注意在各转动部分加些润滑脂，所用油脂宜应黏度适当，避免酸性。9.显微镜结构精密，零件不宜随意拆卸。遇故障可送厂家或有关仪器厂修理。 34 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.3.2
23、 1.3.2 恒温培养箱恒温培养箱 恒温培养箱可分为两大类：即直热式恒温培养箱和隔水式恒温培养箱。（一）直热式恒温培养箱 为直接加热空气方式的培养箱，采用“继电器控温电加热空气”技术，结构为：保温板材箱内装继电器控温电加热器。这种培养箱造价低，制造工艺简单，但恒温效果较差，温度波动大。 35 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 （二）隔水式恒温培养箱 为间接加热空气方式的培养箱，采用“继电器控温电加热水控制空气温度”技术，结构为：簿钢板外壳内衬玻璃棉，内置紫铜板水箱，水箱内装继电器控温电加热器，设双层门。这种培养箱制造工艺复杂，造价高，但由于先用电加热水层，再由水传热至箱
24、内空气，因而温度上升和下降缓慢，加之可通过双层门的玻璃内门观察，对箱内温度影响小，故恒温效果好，调温为20600.5，很适于微生物培养之用。见图1-2。 36 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 图1-2 培养箱 37 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 使用注意事项： 1. 箱内不应放入过热过冷的东西，以免箱内温度急剧变化，阻碍培养物的生长。2. 箱内应放入水容器一只，以维持培养箱内湿度或减少培养物中水分的大量蒸发。3. 培养箱底部因接近电源，温度较高，故培养物不宜放在底层。4. 箱内培养物不宜太挤，以免温空气不能流通，而使箱内温度不匀。5. 箱内
25、要保持清洁，并经常用3%来苏儿液消毒，再用清洁抹布擦净。 38 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.3.3 1.3.3 灭菌器灭菌器（一）干热灭菌箱 灭菌箱正面的侧边，装有温度指针，用于定温；温度指针下面有指示灯，用于指示是否达到定温；箱内有感温探头，用于探测温度。指针、指示灯、探头、电加热器均连接于“温度调节器”，通过温度调节器使箱内保持一定温度。如温度未达定温，电加热器工作，箱内温度上升，如温度超过定温，“温度调节器”自动切断电加热器的电源，停止加热，箱内温度即可下降。39 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 图1-3 干热灭菌箱 40 1.
26、3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 使用方法：1. 适宜用干热灭菌箱灭菌的物品是玻璃器皿和金属器皿，而塑料制品、橡皮制品、天然和化学纤维制品、培养基等，均不适用干热灭菌。2进箱，物品放在干热灭菌箱中的铁搁板上，关箱门。3. 定温，常用灭菌温度为160或170。4. 灭菌，接通电源，干热灭菌箱升温至定温灭菌，160维持2h，170维持11.5h。5. 出箱，关断电源，待温度下降至50左右，开箱门取出被灭菌的物品。 41 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 注意：1、灭菌时，温度不宜超过170，以免易燃物，如棉塞、包扎纸等被烧焦。2、高温时，切勿开箱门，以免
27、冷空气骤然进入使灭菌的玻璃器皿炸裂。3、绝不允许先将温度上升到100以上再放器皿，以免玻璃器皿骤然在高温下炸裂。 干热灭菌箱用于烘干玻璃器皿时，定温120，持续30min即可。须打开顶部气孔，以利水蒸气散出。可启动箱内鼓风设备，加速干燥。 42 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 （二）高压蒸汽灭菌器 高压蒸汽灭菌器的灭菌效果比干热灭菌箱好，适用所有物品灭菌，通常用于培养基、生理盐水、废弃培养物、耐高热高压的药品、纱布等灭菌。高压蒸汽灭菌器有手提式、直立式和横卧式几种，它们的构造和灭菌原理是一样的，仅是容量不同而已。手提式高压蒸汽灭菌器容积最小，业务小的实验室大多使用它；
28、横卧式高压蒸汽灭菌器容积大，只有大型实验室或生产上使用。一般实验室常使用直立式高压蒸汽灭菌器。直立式高压蒸汽灭菌器见图1-4。 43 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 图1-4 高压蒸汽灭菌器 44 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 使用方法：1. 加水 立式锅可直接加水至锅内底部隔板以下2/3高处；有加水口和水位窗者，由加水口加水至止水线处。2. 装锅 把需灭菌的器物放入锅内（器物不要装得太满，以免影响灭菌效果），盖好锅盖，将螺旋柄拧紧（对角式均匀拧紧），打开排气阀。3. 点火 启动开关，电加热器工作。4. 排放冷空气 锅内水沸腾后，蒸汽逐渐驱
29、赶锅内冷空气，当温度计指针指向100时，证明锅内已充满蒸汽，冷空气被驱尽，关闭排气阀。45 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 5. 升压、保压与灭菌 关闭排气阀以后，锅内成为密闭系统，蒸汽不断增多，压力计和温度计的指针上升，当压力达到0.1MPa，温度为121时，开始灭菌计时；控制热源，维持0.1Mpa、12130min即完成灭菌。6. 降压与排气 完成灭菌后停止加热，任灭菌锅自然冷却降压。当压力降至0.025MPa以下后，可打开排气阀排除余汽。7. 出锅 待锅内压力降至大气压时揭开锅盖，取出器物，排掉锅内剩余水。 46 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其
30、使用要领 1.3.4 1.3.4 冰箱冰箱 用于储存培养基和培养物的设备，储存病毒必须使用低温冰箱，储存一般培养基和培养物用普通冰箱即可。 低温冰箱整个箱壁内侧围绕冷却管，可保持2070左右的低温。 使用冰箱时，必须注意以下事项：1.冰箱适用电压与所供电压一致。如所供电压为220V，而冰箱适用110V电压时，必须用变压器调压。2.供电线路和保险丝满足冰箱的工作电流要求。 47 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 3.使用时，应将温度调节至所需要的温度。一般应使水在冷却室中结冰，使储藏箱下部温度为510左右。 4.当冰箱冷却室结冰太厚时，会导致温度调节器的不灵敏，此时，必须
31、停电融冰后，再投入使用。 5.冰箱门打开时间愈短愈好，打开次数越少越好。6. 不宜将温度过高的物品放入冰箱内，以免消耗电能过大、机件工作时间过长，缩短冰箱使用寿命。7. 冰箱内应保持整洁，如箱内有霉菌生长，应清洗并用福尔马林熏蒸消毒。8. 保存烈性病菌、病毒的冰箱，要专人保管，并要加锁。 48 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.3.5 1.3.5 水浴锅水浴锅 水浴箱也叫水温箱，用于融化培养基和各种保温操作。该设备是金属制成的长方形箱，箱内盛水，箱底装有电热丝，并有自动调节温度装置控制温度恒定。如图1-5所示。 49 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其
32、使用要领 图1-5 水浴箱 50 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.3.6 1.3.6 细菌过滤器细菌过滤器 目前常用的滤器有混合材质和全玻材质。如图1-6所示。（一）蔡氏滤器 蔡氏滤器为金属制成的杯状漏斗，在杯的底部夹一层石棉滤板，滤板下有一块金属筛板，防止抽气时石棉滤板下陷。按滤孔的大小，石棉板分为三种：1. K号，滤孔最大，可滤除一般颗粒物。2. KK号，滤孔较小，为滤除大多数细菌。3. EKS号，滤孔更小，可滤除较大病毒。51 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 图1-6 细菌过滤器 52 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及
33、其使用要领 （二）玻璃滤器 该器组件全部为玻璃质，其中，滤板由玻璃细纱加热压成，分1、2、3、4、5、6共六级。号码愈大，孔径愈小，孔径0.152.0m不等，5和6级可阻止细菌通过。 玻璃滤器用后要立即处理。过滤病原微生物后的滤器，要先用不凝固蛋白质的消毒药剂浸泡3天，以免堵塞滤孔；消毒后的滤器，用蒸馏水倒抽；再在滤器内加入三分之二洗涤液，自然流出氧化残留物；再先后用自来水、蒸馏水抽吸过滤至滤液呈中性为止。 53 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 如果滤器的滤孔被凝固的蛋白质颗粒堵塞，可将滤器浸泡于37的1%胰蛋白酶溶液（pH7.47.6）中消化24h，再按上法抽洗清洁
34、。 滤器为负压过滤，需要连接一抽滤瓶，将滤瓶嘴用橡皮管连接于抽气机上抽气过滤。过滤负压不宜低于（46.666.6）KPa（350500mmHg），可用水银真空计指示，也可观察滤瓶内滤出液情况判断。如滤液出现大量气泡，说明负压过高，宜关闭抽气机，停止抽气，待气泡消逝后再抽。抽滤瓶的嘴应塞入少量棉花，以防放气时空气中细菌冲入瓶内。 54 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.3.7 1.3.7 超净工作台超净工作台 用于创造局部无菌环境的设备。超净工作台是一个由预过滤器、高效过滤器、空气幕风机有效排除空气中的悬浮灰尘、微生物，由紫外灯或喷雾灭菌，装有照明灯、操作台面板、配电
35、装置，并有消音、减震设备的箱体，如图1-7所示。超净工作台是没有建设无菌室的微生物实验室的必备设备，也可用于有更严格无菌要求或其他小环境条件要求的微生物接种、分离和鉴定等操作。 55 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 图1-7 超净工作台 56 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 使用超净工作台应注意以下几点：1清除工作台内的灰尘、杂物。2在使用超净工作台进行无菌操作前30min启动过滤、通风装置，检测操作区气流速度、洁净度，并灭菌。3穿紧口工作服，戴紧口帽。4. 严禁在超净工作台前做任何可能增加空气灰尘量的动作。5. 必须在超净工作台内使用的物品
36、要放在下风侧。6. 在超净工作台内使用的物品必须是不易起纤尘的。 7. 在全部无菌操作结束后，才能停止工作台运转。8. 定期进行性能检测。 57 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.3.8 1.3.8 电动抽气机电动抽气机 电动抽气机又叫真空泵，由电动机转轮、轮带和偏心轮等组成。通电后，电动机带动偏心轮，即可将与其相关的容器内的空气抽出。如图1-8所示。 电动抽气机主要供细菌过滤器、厌氧培养、培养基过滤和真空干燥时抽气用。使用抽气机时，应注意以下事项：1. 抽气机的适用电压要与所供电压一致，否则，要经变压器变压后才能使用。 58 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常
37、用仪器及其使用要领 2. 要保持机油箱内的油量，防止机器损坏。3. 必须使用硬质的连接管，保证气路畅通以确保器皿内抽真空效果。4被抽气的器皿，必须有良好的抗压性能，以防内部真空后被外部空气破碎。5如果在抽滤过程中滤液出现大量气泡，可以暂时停机，待气泡消失后，再开机继续抽气。6如果要作冷冻干燥，则需用精密度高、功率大的抽气机。 59 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 图1-8 电动抽气机 60 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.3.9 1.3.9 电动离心机电动离心机 离心机为进行病菌病毒检验鉴定中不可缺少的工具。离心机的种类很多，实验室常用小
38、型倾斜电动离心机。小型倾斜电动离心机机顶正中有孔盖，以便放入和取出离心试管，内有离心管座四或六个，均匀地绕离心轴排列，底座上装有开关和调速器。如图1-9所示。 61 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 图1-9 小型倾斜电动离心器A-离心机断面1.转速调节器 2.电动机 3.金属套管 4.护盖 5.玻管； B-离心器全形 6.盖62 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 使用离心机时应注意：1. 应放在平稳的地方，并保持水平。2将装有标本的离心试管放入离心管座的金属套管内，两两成对，每个重量基本平衡。3放好试管后，盖上孔盖。4开启电源开关，先用最低转速
39、，逐渐调节到最高转速。5. 达到离心时间后，逐步降低转速，待降到最低转速后，关闭电源开关。6待离心机自然停止转动，打开孔盖，取出离心试管。7. 离心试管须加棉塞时，离心前应将棉塞上端用橡皮圈扎紧在试管外或用大头针别住，以免离心时棉塞沉入管内。8. 应经常保持转轴润滑。 63 1.3 1.3 常用仪器及其使用要领常用仪器及其使用要领 1.3.10 1.3.10 天平天平(一)粗天平 粗天平又称工业天平或药物天平，是用于粗略称量的仪器。常用的有100g、200g、500g、1000g四种，感量为千分之一，供配制普通试剂和粗略称量之用。(二)电子天平 这类天平只有一个盘，构造比一般天平复杂，但使用起
40、来却十分方便。 返回64 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 1.4.1 1.4.1 常用的玻璃器皿常用的玻璃器皿 微生物实验室常用的玻璃器皿见表1-1所示。 表1-1 常用的玻璃器皿 名称规 格试 管18180mm，15150mm，10100mm，还有反应管(杜氏小管)，以厚管壁为宜培养皿常用的培养皿直径为900mm，高为15mm吸 管0.1mL，0.2mL，0.5mL，1.0mL，5.0mL，10.0mL的刻度吸管量 筒10.0mL，50.0mL，100mL，500mL，1000mL漏 斗直径3.0cm，6.0cm，10.0cm烧 杯50 mL，100mL，250 mL，500 mL，800
41、 mL，1000 mL容量瓶各种容量试剂瓶各种容量(白色和棕色)滴 瓶一般用125mL(白色和棕色)载玻片2.5cm7.5cm，厚0.010.13cm盖玻片1.8cm1.8cm，厚0.17cm干燥器不同直径的普通干燥器65 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 1.4.2 1.4.2 常用的玻璃器皿的洗涤与消毒常用的玻璃器皿的洗涤与消毒 微生物学实验中常用的培养皿、试管和三角瓶等的洗涤、消毒质量，直接影响实验结果，因此，这项工作不容忽视。（一）新玻璃器皿的洗涤法新购置的玻璃器皿含有游离碱，应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，再用水充分冲洗干净。 66 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 （二）含有琼脂培养
42、基的玻璃器皿的洗涤法 先用小刀或铁丝将器皿中的琼脂培养基刮下。如果琼脂培养基已经干燥，可将器皿放在水中蒸煮，使琼脂熔化后趁热倒出，用水洗涤，并用刷子沾肥皂擦洗内壁，然后用自来水洗去肥皂。是否已将油垢完全除去，可以这样检查：即将瓶子或试管的外壁擦干，如果水在内壁是均匀地分布一薄层，可以认为是将油垢除去了。如果经过这样洗涤的器皿，油垢还未洗净，就需用洗涤液来清洗。 67 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 （三）载玻片及盖玻片的洗涤法 新载玻片和盖玻片先在2%的盐酸溶液中浸1h，以后用自来水冲洗23次，最后用蒸馏水换洗23次。也可用1%的洗衣粉洗涤，新载玻片用洗衣粉洗涤时，先将洗衣粉液煮沸，然后将要
43、洗的新载玻片散入煮沸液中，持续煮沸1520min(注意煮沸液一定要浸没玻片，否则会使玻片钙化变质)，待冷后用自来水冲洗至中性。新盖玻片用洗衣粉洗涤时，将盖玻片散入1%的洗衣粉液中，煮沸lmin，待沸点泡平下后，再煮沸1min，。68 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 1.4.3 1.4.3 常用的玻璃器皿的包装常用的玻璃器皿的包装 玻璃器皿使用前必须经过灭菌，而灭菌前应预先将玻璃器皿包装好。（一）棉塞的制作常见的做法有：将棉花铺成方形，对角方向不完全对折，垂直于对折线方向卷起来，如图1-10所示；或将棉花铺成方形，于其中央衬以小块棉花，再将四边棉花包拢。制作好的棉塞最好用纱布包好，以利于使用和
44、保存。另外，也可根据需要，购买市售的泡沫塑料塞。 69 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 图1-10 棉塞的制作过程 70 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 制作质量好的棉塞的形状、大小、松紧，应与试管口(或三角瓶口)完全适合。过紧会妨碍空气流通，不便塞拔，过松则达不到滤菌的目的。棉塞过大，塞不进试管口(或三角瓶口)，过小则容易掉进试管内。正确的棉塞，塞头较大，约占棉塞总长的1/3，留在管外，塞体约占棉塞总长的2/3，塞在管内，如图1-11所示。 棉塞应塞在试管内，用报纸或牛皮纸包装后一道灭菌。 71 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 图1-11 试管帽和棉塞 1.试管帽；2.正确的棉塞；3.
45、4.不正确的棉塞72 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 （二）吸管的包扎 将非脱脂棉塞入管尾，长度约2cm，后端距尾口1.5cm，松紧要适当，以吹气时通气流畅而不滑动为度。将吸管尖端以30角放在宽45cm、长55cm的纸条(报纸或牛皮纸)的一端，折返纸头包住管尖后，以螺旋形式包裹吸管，将包裹卷紧的纸棒在管尾端打一个结，以防吸管脱出。如图1-12所示，包好后等待灭菌。 73 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 图1-12 单支刻度吸管的包扎 74 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 （三）培养皿的包扎 培养皿可按4套或8套为一叠，用纸包扎好，如图1-13所示，待灭菌。或直接将培养皿装入金属筒内进行干
46、热杀菌。 图1-13 培养皿的包扎 返回75 1.5 1.5 小型微生物厂主要仪器及设备小型微生物厂主要仪器及设备 小型微生物厂的主要仪器及设备见表1-2。表1-2 小型微生物厂的主要仪器及设备一览表名称数量规模制造材料备注无菌柜1长110120厘米，宽80厘米，高70厘米摇瓶机1往复式或旋转式，能放500mL三角瓶20个钢木须放在恒温室内显微镜1放大10001500倍须带血球计数板，载玻片和盖玻片分析天平11/1000恒温箱110013080cm可自制电冰箱1恒温干燥箱1鼓风机种子罐2立式圆筒形蝶底盖具夹套及搅拌发酵罐3立式圆筒形蝶底盖具夹套及搅拌76 1.5 1.5 小型微生物厂主要仪器及设备小型微生物厂主要仪器及设备 表1-2(续)小型微生物厂的主要仪器及设备一览表空压机2固定水冷式压力23kg/cm2，风量0.4m3/min两台轮换使用总空气过滤器2立式圆筒形3601200钢锅炉1蒸发量0.3吨时，压力4公斤厘米2消毒柜1柜式容积1米3钢每4小时消一柜，每柜400斤，每日两班其他温度表、酒精灯、小天平、试管、试管架(自制)、漏斗架、吸管(毫升)、三角瓶、培养皿、烧杯、量筒、玻璃棒、牛皮纸、夹子、小骨勺，橡皮管，紫外线、钟表，石棉网、洗瓶刷等。77
