1、大型溞活动抑制实验大型溞活动抑制实验内内 容容简介简介1实验目的与内容实验目的与内容2实验原理实验原理3实验材料与方法实验材料与方法4习题或思考习题或思考8实验步骤实验步骤5注意事项注意事项7结果与讨论结果与讨论61.简介简介 大型溞大型溞( (Daphnia MagnaDaphnia Magna) )是水生生态系统食物是水生生态系统食物链的重要环节，以其为指示生物评价污染物毒性具链的重要环节，以其为指示生物评价污染物毒性具有灵敏度高、繁殖率高、重复性好等优点，已被广有灵敏度高、繁殖率高、重复性好等优点，已被广泛采纳为标准水生指示生物，而且实验测定方法国泛采纳为标准水生指示生物，而且实验测定方
2、法国际上比较规范。际上比较规范。 1.简介简介 大型溞大型溞( (Daphnia magnaDaphnia magna) )的生命周期分为：卵、的生命周期分为：卵、幼溞、青年溞、成溞，其寿命依赖条件有很大的变化，幼溞、青年溞、成溞，其寿命依赖条件有很大的变化，每年的大多数时期，种群几乎完全是由雌性组成。每年的大多数时期，种群几乎完全是由雌性组成。图图1 大型溞雌性与雄性个体照片大型溞雌性与雄性个体照片 2.实验目的与内容实验目的与内容观察正常大型溞游动的情况观察正常大型溞游动的情况使用倒置显微镜观察正常大型溞结构和雌雄的区别使用倒置显微镜观察正常大型溞结构和雌雄的区别测定化合物对大型溞的测定化
3、合物对大型溞的24 h24 h活动抑制的活动抑制的ECEC5050值值实验目的实验目的 实验内容实验内容 了解大型溞的生命周期变化了解大型溞的生命周期变化观察正常和畸形大型溞的结构观察正常和畸形大型溞的结构掌握大型溞急性毒性实验方法掌握大型溞急性毒性实验方法3.实验原理实验原理 剂量反应关系剂量反应关系指不同剂量外源化学物质与其引起的效应发生指不同剂量外源化学物质与其引起的效应发生率之间的关系。量反应关系曲线有直线型、抛物线型和率之间的关系。量反应关系曲线有直线型、抛物线型和S S曲线型，曲线型，见图见图2 2。S S曲线型较为常见曲线型较为常见 。 4.实验材料与方法实验材料与方法根据具体情
4、况选择受试化合物根据具体情况选择受试化合物( (农药、医药等农药、医药等) )。氯化钙；硫酸镁；碳酸氢钠；氯化钾；盐酸；氢氧化钠。氯化钙；硫酸镁；碳酸氢钠；氯化钾；盐酸；氢氧化钠。实验仪器实验仪器 实验试剂实验试剂 溶解氧测定仪、水硬度仪、生化培养箱、倒置显微镜、溶解氧测定仪、水硬度仪、生化培养箱、倒置显微镜、超声波清洗仪、超声波清洗仪、pHpH计、烧杯等计、烧杯等 4.实验材料与方法实验材料与方法毒性实验方法毒性实验方法 本实验参照采用国际标准本实验参照采用国际标准ISO 6341-1982ISO 6341-1982和和OECD 202OECD 202的大型溞活动抑制测定方法，测定物质的大型
5、溞活动抑制测定方法，测定物质或废水对大型溞的半数效应浓度或废水对大型溞的半数效应浓度(24 h-(24 h-ECEC5050) )，用，用于判断物质和废水的毒性程度。于判断物质和废水的毒性程度。5.实验步骤实验步骤 1234准准备备实实验验化化合合物物的的配配制制预预实实验验正正式式实实验验 5.实验步骤实验步骤准备实验准备实验试验用水：适于培养溞类的任何水，无论是天然水或标准稀试验用水：适于培养溞类的任何水，无论是天然水或标准稀释水，都可用于测试试验。释水，都可用于测试试验。化合物的配制化合物的配制配制贮备液时，难溶于水的物质可用适当的方法将其溶解配制贮备液时，难溶于水的物质可用适当的方法将
6、其溶解或分散，包括采用超声波装置和使用对溞低毒的助溶剂，或分散，包括采用超声波装置和使用对溞低毒的助溶剂，并应加设助溶剂对照试验。并应加设助溶剂对照试验。 预试验预试验在正式实验之前，先进行较大范围浓度系列的初步试验，在正式实验之前，先进行较大范围浓度系列的初步试验，为正式试验设置受试物的浓度提供依据。为正式试验设置受试物的浓度提供依据。 5.实验步骤实验步骤 正式实验正式实验 根据预试验的结果，至少设五个浓度组，必须设置根据预试验的结果，至少设五个浓度组，必须设置空白对照。空白对照。 每个浓度组和对照组要用每个浓度组和对照组要用2525只溞，分成只溞，分成5 5组，每组组，每组5 5只。实验
7、温度只。实验温度1822 1822 。在自然光照下进行，光暗比。在自然光照下进行，光暗比为为12:1212:12。记录。记录24 h24 h溞类累计活动抑制数。溞类累计活动抑制数。 在实验开始和结束时，应测定实验用水的在实验开始和结束时，应测定实验用水的pHpH值，溶值，溶解氧，硬度等。解氧，硬度等。 6.结果与讨论结果与讨论以表格形式记录预实验和正式实验的结果。以表格形式记录预实验和正式实验的结果。概率单位图解法估算概率单位图解法估算ECEC5050，并，并利用统计分析软件利用统计分析软件的概率回归分析方法计算的概率回归分析方法计算ECEC5050和和9595置信区间置信区间 。 7.注意事
8、项注意事项为了保证大型溞对毒物良好的敏感性，溞龄最好在为了保证大型溞对毒物良好的敏感性，溞龄最好在6-24 h6-24 h之间。之间。实验结束时，实验溶液中的溶解氧浓度应高于空气饱和值的实验结束时，实验溶液中的溶解氧浓度应高于空气饱和值的6060。实验结束时，对照组中活动受抑制溞类数应少于实验结束时，对照组中活动受抑制溞类数应少于1010。 受试物实测浓度不能低于设置浓度的受试物实测浓度不能低于设置浓度的8080。定期测定参比物的定期测定参比物的24 h 24 h ECEC5050，以检查供试溞的敏感性。满足参比，以检查供试溞的敏感性。满足参比 物质重铬酸钾的物质重铬酸钾的24 h 24 h ECEC5050值值2.0 mg/L2.0 mg/L，溞敏感度符合要求。，溞敏感度符合要求。 8.习题与思考习题与思考1.1.ECEC5050是否还有其它的计算方法？如果有，是否还有其它的计算方法？如果有，哪种更好一些？哪种更好一些？2. 2. 对于水溶解性差的物质，助溶剂的使用是对于水溶解性差的物质，助溶剂的使用是否能保证数据的可靠性？否能保证数据的可靠性？
