生物技术制药专业PPT课件.ppt

上传人(卖家):三亚风情 文档编号:2860998 上传时间:2022-06-05 格式:PPT 页数:85 大小:2.16MB
下载 相关 举报
生物技术制药专业PPT课件.ppt_第1页
第1页 / 共85页
生物技术制药专业PPT课件.ppt_第2页
第2页 / 共85页
生物技术制药专业PPT课件.ppt_第3页
第3页 / 共85页
生物技术制药专业PPT课件.ppt_第4页
第4页 / 共85页
生物技术制药专业PPT课件.ppt_第5页
第5页 / 共85页
点击查看更多>>
资源描述

1、生物技术制药生物技术制药第一章第一章 现代生物技术现代生物技术一、现代生物技术的定义与主要内容一、现代生物技术的定义与主要内容生物技术生物技术(Biotechnology or Bioengineering): 对生物对生物有机体有机体(微生物至高等动、植物)或其(微生物至高等动、植物)或其组组成部分成部分(器官、组织、细胞或细胞器等),运用分子(器官、组织、细胞或细胞器等),运用分子生物学、细胞生物学、生物化学、生物物理学、生物生物学、细胞生物学、生物化学、生物物理学、生物信息学等手段,研究、设计、改造,以信息学等手段,研究、设计、改造,以改良生物改良生物乃至乃至创造新的生物品种创造新的生物

2、品种的一种技术体系。的一种技术体系。现代生物技术包括四个方面:现代生物技术包括四个方面:(1 1)基因工程:基因工程:生物遗传物质生物遗传物质核酸核酸的分离、提取、的分离、提取、体外剪切、拼接重组以及扩增与表达等技术。体外剪切、拼接重组以及扩增与表达等技术。(2)细胞工程:细胞工程:细胞(也包括器官或组织)的离体培细胞(也包括器官或组织)的离体培养、繁殖、再生、融合及细胞核、细胞质及染色体与养、繁殖、再生、融合及细胞核、细胞质及染色体与细胞器(如线粒体、叶绿体等)的细胞器(如线粒体、叶绿体等)的移植与改建移植与改建等操作等操作技术。技术。(3)酶工程:酶工程:利用酶,借助利用酶,借助固定化、生

3、物反应器和生固定化、生物反应器和生物传感器等物传感器等新技术、新装置,高效优质地生产特定产新技术、新装置,高效优质地生产特定产品的技术。品的技术。(4)发酵工程(微生物工程):发酵工程(微生物工程):给微生物提供最适宜给微生物提供最适宜的发酵条件以生产特定产品的技术。的发酵条件以生产特定产品的技术。 生物技术的依据和出发点:生物有机体的种种生物技术的依据和出发点:生物有机体的种种机机能能,是生物在生长、发育与繁殖过程中进行物质合成、,是生物在生长、发育与繁殖过程中进行物质合成、降解和转化的能力(即利用其新陈代谢的能力),降解和转化的能力(即利用其新陈代谢的能力), 反应器、代谢反应、酶、特定的

4、遗传基因反应器、代谢反应、酶、特定的遗传基因核心基础:核心基础:基因工程和细胞工程基因工程和细胞工程“工程菌株工程菌株”或或“工程细胞株工程细胞株” 使酶工程或发酵工程生产出更多、使酶工程或发酵工程生产出更多、更好的产品,发挥出更大的经济效益。更好的产品,发挥出更大的经济效益。酶工程和发酵工程酶工程和发酵工程 现代生物技术产业化,特别是现代生物技术产业化,特别是发展大规模生产的发展大规模生产的最关键环节最关键环节。二、现代生物技术的优越性二、现代生物技术的优越性(一)(一)不可取代性不可取代性植物品种改良植物品种改良 杂交育种杂交育种基因工程改良品种基因工程改良品种基因资源的来源可不受限制基因

5、资源的来源可不受限制 牛牛( (猪猪) ) 生长激素基因生长激素基因鱼鱼 生长、发育快,体重速生长、发育快,体重速增增 人人血红蛋白基因血红蛋白基因猪猪体内体内 生产人的血红蛋白,分离,生产人的血红蛋白,分离,可作为人血液的替代物。可作为人血液的替代物。 生长激素释放抑制因子生长激素释放抑制因子(抑制生长激素不合时宜的(抑制生长激素不合时宜的分泌,分泌, “肢端肥大症肢端肥大症” 的特效药)的特效药) 50万个羊脑万个羊脑 5mg样品,化学法样品,化学法 300多美元多美元/5mg 基因工程基因工程 7.5升大肠杆菌发酵升大肠杆菌发酵 5mg , 成本几十美分。成本几十美分。(二)(二)快速、

6、精确快速、精确 试剂盒试剂盒 有效的早期诊断(有效的早期诊断( 遗传病、病毒引起的遗传病、病毒引起的 疾病和癌症等)。疾病和癌症等)。McAb检查妇女妊娠检查妇女妊娠 比用比用抗血清法抗血清法检查提高了灵敏度,检查提高了灵敏度,怀孕后怀孕后8天天得知,得知,准确率准确率100(三)(三)低耗、高效低耗、高效 “酶酶”催化化学效应,无需高温、高压和强酸碱等催化化学效应,无需高温、高压和强酸碱等大大降低能耗的成本、能耗。大大降低能耗的成本、能耗。 例:例:L-苹果酸生产(生物技术)苹果酸生产(生物技术)产氨短杆菌产氨短杆菌 收集菌体收集菌体固定化细胞固定化细胞 L-苹果酸苹果酸原理:延胡索酸原理:

7、延胡索酸 L-苹果酸苹果酸成本比化学合成降低几十倍。成本比化学合成降低几十倍。人生长激素(治疗侏儒病)人生长激素(治疗侏儒病)一个患者每年需用量一个患者每年需用量 50个死人的垂体中提取个死人的垂体中提取基因工程生产基因工程生产 价格为价格为14提取,不需依赖死人脑。提取,不需依赖死人脑。 (四)(四)副产物少、不良反应小、安全性好副产物少、不良反应小、安全性好 疫苗的生产疫苗的生产 常规方法常规方法 用血液,成本高,可带来病毒感染的危险性。用血液,成本高,可带来病毒感染的危险性。现代生物技术现代生物技术 用大肠杆菌用大肠杆菌 如乙肝疫苗,凝血因子等如乙肝疫苗,凝血因子等大大改进使用的安全性。

8、大大改进使用的安全性。2. “生物导弹生物导弹” McAb接抗癌药物接抗癌药物体内体内McAb只与该肿瘤细胞特异只与该肿瘤细胞特异性结合性结合抗癌药物专一、靶向到肿瘤细胞抗癌药物专一、靶向到肿瘤细胞 小鼠的免疫球蛋白小鼠的免疫球蛋白 McAb免疫球蛋白分子中含有人免疫球蛋白分子片段免疫球蛋白分子中含有人免疫球蛋白分子片段三、现代生物技术在医药领域的应用三、现代生物技术在医药领域的应用()在疾病诊断与治疗中的应用)在疾病诊断与治疗中的应用1. 单克隆抗体与疾病诊断单克隆抗体与疾病诊断 妊娠试验妊娠试验 FDA批准上市的批准上市的McAb产品产品 已有几十种。已有几十种。3. 基因诊断基因诊断 核

9、酸分子杂交技术核酸分子杂交技术 80年代中期年代中期 聚合酶链反应聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)体外扩增基因的方法)体外扩增基因的方法产前和症状前基因诊断产前和症状前基因诊断:苯丙酮尿症、珠蛋白合成障碍性苯丙酮尿症、珠蛋白合成障碍性贫血、假肥大型肌营养不良、甲型血友病、乙型血友病、贫血、假肥大型肌营养不良、甲型血友病、乙型血友病、成年型多囊肾、慢性进行性舞蹈病等遗传病成年型多囊肾、慢性进行性舞蹈病等遗传病4. 基因治疗基因治疗 因单一结构基因即编码蛋白质的基因缺陷因单一结构基因即编码蛋白质的基因缺陷所引起的遗传病。所引起的遗传病。 治疗治疗:导入正

10、常基因导入正常基因校正缺陷基校正缺陷基因因引起的引起的DNA代谢代谢异常及细胞突变异常及细胞突变使之恢复正常功能。使之恢复正常功能。(二)未来医药卫生领域中的生物技术展望(二)未来医药卫生领域中的生物技术展望1. 转基因动物生产的转基因动物生产的“转基因药物转基因药物” 1978年年 把人把人tPA基因转入小鼠受精卵发育成转基因小鼠基因转入小鼠受精卵发育成转基因小鼠并证明在其乳汁中能得到并证明在其乳汁中能得到tPA 美国美国DNx公司的公司的“制药工厂制药工厂” 转基因猪转基因猪 环球基因药物公司环球基因药物公司 转基因奶牛转基因奶牛 基因酶公司基因酶公司 转基因山羊转基因山羊 英国药物蛋白公

11、司英国药物蛋白公司 转基因绵羊转基因绵羊“转基因药物转基因药物”与基因工程药物相比与基因工程药物相比, 产量高,成本低产量高,成本低, 具有与人体自身产生的蛋白相同的具有与人体自身产生的蛋白相同的生物学活性。乳腺细胞能进行一系列的翻译后修饰作生物学活性。乳腺细胞能进行一系列的翻译后修饰作用,包括糖基化作用等,正确地产生人体蛋白。用,包括糖基化作用等,正确地产生人体蛋白。2. 人型人型McAb(monoclonal antibody)的制备的制备 技术路线:技术路线: 鼠型鼠型McAb分子中更换一段人抗体分子中与抗原结分子中更换一段人抗体分子中与抗原结合的链段(用蛋白质工程的方法);合的链段(用

12、蛋白质工程的方法); 从人鼠杂交瘤细胞中直接克隆人抗体基因,并使从人鼠杂交瘤细胞中直接克隆人抗体基因,并使之在细菌中得到表达;之在细菌中得到表达; 将人免疫球蛋白重链将人免疫球蛋白重链C区基因转入小鼠受精卵,发区基因转入小鼠受精卵,发育成转基因小鼠,用特定抗原免疫育成转基因小鼠,用特定抗原免疫得人型化得人型化McAb 。3. 基因治疗基因治疗 “基因打靶基因打靶”技术技术 将外源基因定点整合到细胞基因组的某一确定位将外源基因定点整合到细胞基因组的某一确定位点上,因而能对缺陷基因进行原位修复。点上,因而能对缺陷基因进行原位修复。聚合酶链反应及其他不断涌现的分子生物学新技术聚合酶链反应及其他不断涌

13、现的分子生物学新技术 将得到广泛应用。将得到广泛应用。在细菌、酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞等不同的在细菌、酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞等不同的细胞内能得到高效表达的载体细胞内能得到高效表达的载体 将不断地构建成功,大幅提高基因工程的生产效率。将不断地构建成功,大幅提高基因工程的生产效率。生物技术后处理工程和蛋白质工程生物技术后处理工程和蛋白质工程 将迅速发展将迅速发展有目的地修饰、改造乃至重新组建有目的地修饰、改造乃至重新组建4.生物技术的各个环节生物技术的各个环节第一节第一节 生物药物生物药物(biopharmaceutics) 一、概念一、概念 利用利用生物体及其成分生物体及其成分综合

14、利用生物学、生物化学、微生物学、生物组织免综合利用生物学、生物化学、微生物学、生物组织免疫学、物理化学、药学原理、方法加工制造的疫学、物理化学、药学原理、方法加工制造的 预防预防 诊断疾病的制品诊断疾病的制品 治疗治疗第二章第二章 生物药物与生物技术生物药物与生物技术药物概述药物概述(一)按来源和制造方法(一)按来源和制造方法1.动物来源动物来源 动物脏器动物脏器 资源丰富资源丰富 家畜:家畜: 猪、马、牛、羊猪、马、牛、羊 家禽:家禽: 鸡、鸭鸡、鸭 海洋生物:海带、鲨鱼、海蛇海洋生物:海带、鲨鱼、海蛇二、分类二、分类2. 2. 微生物来源发酵法微生物来源发酵法优点:优点:1 1)微生物及其

15、代谢物资源丰富、开发潜力大)微生物及其代谢物资源丰富、开发潜力大2 2)培养、繁殖快、产量高、成本低,)培养、繁殖快、产量高、成本低, 便于大规模工业生产,便于大规模工业生产, 不受原料、运输、保存、季节和资源供应影响不受原料、运输、保存、季节和资源供应影响3 3)生产的生物药物可综合利用)生产的生物药物可综合利用 代谢物和菌丝体代谢物和菌丝体; ;诱变选育良种诱变选育良种; ;加入前体培养法加入前体培养法4 4)体内酶的转化作用,使复杂、难反应能专一、迅速)体内酶的转化作用,使复杂、难反应能专一、迅速4. 4. 化学合成化学合成 氨基酸、多肽、核酸降解物及其衍生物、维氨基酸、多肽、核酸降解物

16、及其衍生物、维生素、激素生素、激素 结构改造以高效,长效和高专一性结构改造以高效,长效和高专一性3. 3. 植物来源植物来源 植物中的蛋白质、多糖、脂类、核酸等植物中的蛋白质、多糖、脂类、核酸等 生物大分子的研究和利用生物大分子的研究和利用5. 现代生物技术产品现代生物技术产品基因工程技术生产的重组活性多肽基因工程技术生产的重组活性多肽 活性蛋白质类活性蛋白质类 基因工程疫苗基因工程疫苗 McAb 多种细胞生长因子多种细胞生长因子利用转基因动、植物生产的生物药物利用转基因动、植物生产的生物药物 利用蛋白质工程技术改造天然蛋白质创造自然利用蛋白质工程技术改造天然蛋白质创造自然界没有的而功能上更优

17、良的蛋白质类生物药物界没有的而功能上更优良的蛋白质类生物药物生物技术药物生物技术药物(基因工程药物,(基因工程药物,Biotech Drugs):以以DNA重组技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)重组技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长因子类药物。细胞生长因子类药物。1. 细胞因子干扰素类:细胞因子干扰素类:IFN- 、 IFN-和和IFN- 。 IFN- 有有 lb, 2a, 2b等等2. 细胞因子白介素类和肿瘤坏死因子类:细胞因子白介素类和肿瘤坏死因子类:IL-2和突变型白介素和

18、突变型白介素-2;TNF- 和和TNF受体。受体。二、生物技术药物的主要类型二、生物技术药物的主要类型第二节第二节 生物技术药物生物技术药物一、概念一、概念3. 造血系统生长因子类造血系统生长因子类: 粒细胞集落刺激因子(粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞集落)、巨噬细胞集落刺激因子(刺激因子(M-CSF)、巨噬细胞粒细胞集落刺激因子)、巨噬细胞粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)、红细胞生成素()、红细胞生成素(EPO)、促血小板生)、促血小板生成素(成素(TPO)、干细胞生长因子(、干细胞生长因子(SCF)等。)等。4. 生长因子类:生长因子类:促进细胞生长、组织再生和创伤治疗。促进

19、细胞生长、组织再生和创伤治疗。 胰岛素样生长因子(胰岛素样生长因子(ICF)、表皮生长因子)、表皮生长因子(ECF)、血小板衍生生长因子()、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长)、转化生长因子(因子(TGF- 与与TGF-)、神经生长因子()、神经生长因子(NGF)及各)及各种神经营养因子。种神经营养因子。5. 重组蛋白质与多肽类激素:重组蛋白质与多肽类激素: 人 重 组 胰 岛 素 (人 重 组 胰 岛 素 ( H u m u l i n ) 、 人 生 长 激 素) 、 人 生 长 激 素(rhGH)、促卵泡激素()、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素)、促黄体生成素(LH)、绒毛膜

20、促性腺激素()、绒毛膜促性腺激素(HCG)等。)等。6. 心血管病治疗剂与酶制剂:心血管病治疗剂与酶制剂: 心血管疾病和抗肿瘤治疗心血管疾病和抗肿瘤治疗因子、因子、水蛭素水蛭素、组织纤溶酶原激活剂(组织纤溶酶原激活剂(tPA)、尿激、尿激酶、链激酶、葡激酶、门冬酰胺酶、超氧化物歧化酶酶、链激酶、葡激酶、门冬酰胺酶、超氧化物歧化酶(SOD) 、葡萄糖脑苷酶及、葡萄糖脑苷酶及DNase等。等。7. 重组疫苗与单抗制品:重组疫苗与单抗制品: 重组乙肝表面抗原疫苗(酵母)、乙肝基因疫苗重组乙肝表面抗原疫苗(酵母)、乙肝基因疫苗(重组乙肝表面抗原疫苗、(重组乙肝表面抗原疫苗、CHO细胞)、艾滋病疫苗和细

21、胞)、艾滋病疫苗和肿瘤疫苗等。肿瘤疫苗等。 己开发的己开发的McAb有有72种,多用于治疗难治性疾病如种,多用于治疗难治性疾病如预防移植物急性排斥、免疫性疾病和肿瘤等。预防移植物急性排斥、免疫性疾病和肿瘤等。8. 基因药物:基因药物: 应用于基因治疗目的的应用于基因治疗目的的DNA片段重组片段重组药物。药物。基因治疗基因治疗: 将将外源基因外源基因导入机体以达到治疗疾病目的。导入机体以达到治疗疾病目的。 遗传性疾病、肿瘤、艾滋病、囊性纤维变性、糖遗传性疾病、肿瘤、艾滋病、囊性纤维变性、糖尿病和心血管病等。尿病和心血管病等。 我国已批准上市品:我国已批准上市品:IFN- 1b(自研),(自研),

22、IFN- 2a,IFN- 2b,IFN- ,IL-2,IL-2125Ser,G-CSF,GM-CSF,SK,EPO,EGF,ECF衍生物,衍生物,b-ECF,胰岛素,胰岛素,GH,TPO,TNF衍生物,抗衍生物,抗IL-8单抗乳膏剂,胸苷激单抗乳膏剂,胸苷激酶基因工程细胞制剂,乙肝疫苗,痢疾疫苗等。酶基因工程细胞制剂,乙肝疫苗,痢疾疫苗等。细胞细胞: :生物有机体形态结构和生命活动的基本单生物有机体形态结构和生命活动的基本单位。位。第三章第三章 细胞工程技术概念细胞工程技术概念细胞工程:细胞工程:以细胞作为研究对象,运用细胞生物学、以细胞作为研究对象,运用细胞生物学、分子生物学等学科的原理与方

23、法,按照人们的意志设分子生物学等学科的原理与方法,按照人们的意志设计改造细胞的某些计改造细胞的某些遗传性状遗传性状,培育出新的生物,培育出新的生物改良改良品品种或通过细胞培养获得自然界中难以获得的种或通过细胞培养获得自然界中难以获得的珍贵珍贵产品产品的新兴生物技术的新兴生物技术细胞培养、细胞融合、细胞重组和遗传物质转移等细胞培养、细胞融合、细胞重组和遗传物质转移等第一节第一节 细胞培养技术细胞培养技术细胞培养:细胞培养:生物体内某一块组织,用酶消化法生物体内某一块组织,用酶消化法分散分散成成单个细胞,接种至特定的培养容器中并给予必要的生单个细胞,接种至特定的培养容器中并给予必要的生长条件,使其

24、在体外生长繁殖的技术。长条件,使其在体外生长繁殖的技术。细胞生长所需的培养条件:细胞生长所需的培养条件:1. 足够的营养,足够的营养, 糖、氨基酸、维生素、无机盐等;糖、氨基酸、维生素、无机盐等;2. 生长环境,合适的温度、生长环境,合适的温度、pH值、无菌条件。值、无菌条件。动物细胞的培养:动物细胞的培养:先在无菌条件下用消化酶将组织先在无菌条件下用消化酶将组织分散成单个细胞,用培养基制成分散成单个细胞,用培养基制成细胞悬液细胞悬液,使其在体,使其在体外合适的条件下生长繁殖的技术。外合适的条件下生长繁殖的技术。一、动物细胞培养一、动物细胞培养细胞培养的对象细胞培养的对象 单个的细胞,单个的细

25、胞,组织培养的对象组织培养的对象 组织块组织块(0.51mm),),器官培养的对象器官培养的对象 器官的一部分或整个器官。器官的一部分或整个器官。动物细胞分类:动物细胞分类:()动物细胞培养特征()动物细胞培养特征贴壁依赖性细胞贴壁依赖性细胞 贴壁贴壁 大多数动物细胞大多数动物细胞非贴壁依赖性细胞非贴壁依赖性细胞 悬浮悬浮 血液淋巴细胞、肿瘤细胞、血液淋巴细胞、肿瘤细胞、 杂交瘤细胞、转化细胞系杂交瘤细胞、转化细胞系兼性贴壁细胞兼性贴壁细胞 附壁或悬浮附壁或悬浮1.原代培养原代培养(or初次培养,初次培养,primary culture) 胚胎或出生后几天幼龄动物的脏器获取组织,胚胎或出生后几

26、天幼龄动物的脏器获取组织,剪成小块剪成小块 长宽长宽1mm、厚约、厚约0.5mm,胰酶消化分散,稀释成胰酶消化分散,稀释成21057105ml,分装到培养瓶(板)于分装到培养瓶(板)于37 CO2培养箱内培养。培养箱内培养。原代培养的细胞特点:原代培养的细胞特点: 离体时间短,一般具离体时间短,一般具二倍体遗传二倍体遗传性状性状,能较好地反映在体内的生长状况,能较好地反映在体内的生长状况 适合用作适合用作药物测试和细胞分化药物测试和细胞分化的研究工具。的研究工具。(二)动物细胞培养技术(二)动物细胞培养技术2传代培养传代培养(或继代培养,或继代培养,subculture) 将细胞悬液转接分装到

27、将细胞悬液转接分装到两个瓶中培养两个瓶中培养 传代培养。传代培养。 分裂次数:正常细胞有限分裂次数:正常细胞有限 一般人正常细胞可传代一般人正常细胞可传代5060次次有限细胞系有限细胞系(finite cell line),), 传代过程中可无限制生长繁殖的细胞系传代过程中可无限制生长繁殖的细胞系连续细胞连续细胞系系(continuous cell line)或已确立的细胞系)或已确立的细胞系 肿瘤细胞肿瘤细胞 (三)动物细胞培养的营养条件(三)动物细胞培养的营养条件1. 培养基培养基 1)天然培养基)天然培养基 成分复杂、来源有限成分复杂、来源有限 血清、水解乳蛋白、胶原、胚胎浸液等。血清、

28、水解乳蛋白、胶原、胚胎浸液等。 主含蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素、其他对维主含蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素、其他对维持细胞生长繁殖和保持细胞生物学活性不可缺少的未持细胞生长繁殖和保持细胞生物学活性不可缺少的未知因子,促进细胞知因子,促进细胞贴壁贴壁、中和有毒物质以保护细胞。、中和有毒物质以保护细胞。动物血清:动物血清:缺点:来源困难,成分不确定,使得细胞生长过程不缺点:来源困难,成分不确定,使得细胞生长过程不易检测控制。易检测控制。水解乳蛋白水解乳蛋白 乳白蛋白的水解产物乳白蛋白的水解产物胶原胶原 动物真皮(豚鼠、牛)或大鼠尾腱来源的组织提取动物真皮(豚鼠、牛)或大鼠尾腱来源的组织提取物物 胚

29、胎浸液胚胎浸液 鸡胚和牛胚鸡胚和牛胚 特点:特点: 一定化学组成一定化学组成主要组分:氨基酸、维生素、糖、无机盐、主要组分:氨基酸、维生素、糖、无机盐、 其他一些辅助因子。其他一些辅助因子。2. 2. 合成培养基合成培养基根据天然培养基的成分,人工设计模拟合成根据天然培养基的成分,人工设计模拟合成RPMI-1640、DMEM、TC199、Eagles MEM等。等。只能维持细胞的生存只能维持细胞的生存(基础培养基基础培养基) 须补充部分天然培养基,须补充部分天然培养基, 血清血清 一般为一般为1020%。维持细胞维持细胞生长生长所需的激素和生长因子所需的激素和生长因子胰岛素、生长激素、表皮生长

30、因子、成纤维细胞生长因子胰岛素、生长激素、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子细胞细胞贴壁贴壁或或铺展铺展所需的细胞因子,所需的细胞因子, 纤维粘连素、铺展因子、胎球蛋白等;纤维粘连素、铺展因子、胎球蛋白等;血清在培养液中的主要作用:血清在培养液中的主要作用:提供提供识别维生素、脂类、激素和金属的识别维生素、脂类、激素和金属的结合蛋白结合蛋白,调节被,调节被结合物的活力结合物的活力白蛋白白蛋白 与维生素、脂类、激素结合,将它们载入细胞与维生素、脂类、激素结合,将它们载入细胞转铁蛋白转铁蛋白 结合并传递铁离子,结合并传递铁离子,结合蛋白与有毒金属或热原结合则可解除它们的毒性;结合蛋白与有毒金属或热原

31、结合则可解除它们的毒性;细胞细胞生长生长所需的所需的脂肪酸与微量元素脂肪酸与微量元素磷脂质、胆固醇、前列腺素等,铜、锌等;磷脂质、胆固醇、前列腺素等,铜、锌等;蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂,使胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤,使胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害;害;起起缓冲缓冲作用,作用, 保证培养液保证培养液pH的稳定。的稳定。不足:不足: 成分复杂,含已知或未知成分,成分复杂,含已知或未知成分, 研究激素、细胞因子及药物的作用时,干扰研究激素、细胞因子及药物的作用时,干扰分析分析; 产品生产产品生产 增加细胞培养后产物增加细胞培养后产物提取提取的难度,或影的难度,或影响产品的响产品的质量质量; 大规

32、模培养大规模培养 成本成本过高。过高。消除因不同消除因不同批次血清之间的差异批次血清之间的差异而造成的实验误差,而造成的实验误差,保证实验结果的准确性与稳定性;保证实验结果的准确性与稳定性;减少血清中可能存在的支原体、病毒所造成的减少血清中可能存在的支原体、病毒所造成的污染污染;3. 3. 无血清培养基无血清培养基优点优点 与含有血清的培养基相比与含有血清的培养基相比产品的产品的分离纯化更加容易分离纯化更加容易,简化鉴定细胞工程产品的,简化鉴定细胞工程产品的程序;程序;来源稳定来源稳定,供应充足。,供应充足。无血清培养基组成:无血清培养基组成:基础培养基基础培养基+替代血清作用的补充成分。替代

33、血清作用的补充成分。1激素和生长因子:激素和生长因子:激素胰岛素、胰高血糖素、生长激素等多肽激素激素胰岛素、胰高血糖素、生长激素等多肽激素 及孕酮、氢化可的松、雌二醇等甾体类激素。及孕酮、氢化可的松、雌二醇等甾体类激素。胰岛素调节和控制细胞内多种代谢途径,胰岛素调节和控制细胞内多种代谢途径,加强糖原、蛋白质、甘油三酯及加强糖原、蛋白质、甘油三酯及DNA的合成。的合成。生长因子表皮生长因子、神经生长因子、成纤维生长生长因子表皮生长因子、神经生长因子、成纤维生长因子、血小板生长因子等。因子、血小板生长因子等。补充成分种类:补充成分种类:2. 结合蛋白:结合蛋白:转铁蛋白增强细胞摄取和利用培养液中铁

34、的能力,转铁蛋白增强细胞摄取和利用培养液中铁的能力,可结合有毒金属离子解除其毒性;可结合有毒金属离子解除其毒性;白蛋白与脂类、金属离子、激素等结合后可以增强白蛋白与脂类、金属离子、激素等结合后可以增强其作用,刺激细胞增殖。其作用,刺激细胞增殖。3.3.贴壁和铺展因子:贴壁和铺展因子:常用的贴壁因子有纤维连结素、多聚赖氨酸、胶原,常用的贴壁因子有纤维连结素、多聚赖氨酸、胶原, 血清铺展因子则是一种糖蛋白。血清铺展因子则是一种糖蛋白。4.4.低分子量营养因子和元素:主要有维生素低分子量营养因子和元素:主要有维生素A A、抗坏血、抗坏血酸、酸、 - -生育酚、硒等生育酚、硒等(四)动物细胞培养的环境

35、条件(四)动物细胞培养的环境条件培养基,培养环境无毒无菌;合适的温度、湿度、气培养基,培养环境无毒无菌;合适的温度、湿度、气体环境和体环境和pH值。值。1. 培养环境无毒无菌:培养环境无毒无菌:动物细胞动物细胞 体内体内 强大强大免疫系统免疫系统,清除和抵抗病原体,清除和抵抗病原体免受侵害免受侵害 体外培养体外培养 失去抵御能力失去抵御能力 保证环境的无毒无菌保证环境的无毒无菌(首要条件首要条件)加双抗液加双抗液青霉素、链霉素青霉素、链霉素以抑制可能存在的细菌和霉菌的生长以抑制可能存在的细菌和霉菌的生长2温度哺乳动物细胞温度哺乳动物细胞3537,动物细胞耐低温能力强于耐高温能力,动物细胞耐低温

36、能力强于耐高温能力, 41 细胞严重受损,细胞严重受损, 4 细胞也能存活数日。细胞也能存活数日。培养物培养物+保护剂保护剂二甲亚砜(二甲亚砜(DMSO)或甘油)或甘油 -80或液氮罐(温度可降至或液氮罐(温度可降至-196)可长期保存。可长期保存。3 3渗透压:渗透压:哺乳动物细胞哺乳动物细胞 260260320mOsm320mOsmkgkg 渗透压可略低渗透压可略低 培养过程中水分蒸发培养过程中水分蒸发渗透压渗透压4 气体环境与气体环境与pH: 一般为一般为95的空气的空气+ +5%CO2, O2 参与三羧酸循环,产生能量供给细胞生长,参与三羧酸循环,产生能量供给细胞生长, CO2 细胞生

37、长所必需的成分,细胞生长所必需的成分,细胞的代谢产物,细胞的代谢产物, 维持培养液的维持培养液的pH 。 大多数细胞生长的适宜大多数细胞生长的适宜pH是是7. .27. .4 NaHCO3 细胞培养过程中不断释放出细胞培养过程中不断释放出CO2,使培养液变酸,使培养液变酸, 添加一定量的添加一定量的NaHCO3 碳酸盐缓冲系统碳酸盐缓冲系统维持培维持培养液养液pH值相对稳定值相对稳定(五)动物细胞种质保存与运输(五)动物细胞种质保存与运输 超低温冰冻方法超低温冰冻方法 长期保存长期保存 细胞冻存液中加入保护剂细胞冻存液中加入保护剂 DMSO或甘油,或甘油, 将细胞将细胞密封保存于密封保存于-8

38、0或或-196的液氮罐中。的液氮罐中。1. 保护剂甘油或保护剂甘油或DMSO,速渗透入速渗透入胞内结合胞内结合H2O,降低冰点,延缓冻结过程,降低冰点,延缓冻结过程,同时增加同时增加胞膜对水的通透性胞膜对水的通透性,使,使H2O在冻结前缓慢透出在冻结前缓慢透出胞外,减少胞内冰晶,降低因冰晶形成而造成的胞损胞外,减少胞内冰晶,降低因冰晶形成而造成的胞损伤。伤。使用浓度使用浓度 甘油甘油520,DMSO 510。影响细胞冻存质量的因素:影响细胞冻存质量的因素:DMSO 与甘油相比,作用更快,膜通透性更强,抗冻与甘油相比,作用更快,膜通透性更强,抗冻伤能力也更强,细胞在伤能力也更强,细胞在DMSO中

39、中30秒即可达到细胞内外秒即可达到细胞内外平衡(甘油需平衡(甘油需2h)实验室普遍采用。实验室普遍采用。2. 细胞悬液的冻存速度细胞悬液的冻存速度: 降低冻存速度使冰晶尽量在胞降低冻存速度使冰晶尽量在胞外形成,减少胞内冰晶的形成外形成,减少胞内冰晶的形成降低对细胞的伤害。降低对细胞的伤害。 先缓降至一定温度,如先缓降至一定温度,如-30,使胞外冻结,胞内脱,使胞外冻结,胞内脱水,再迅速降温。水,再迅速降温。3.3.冻存后用液氮超低温保藏冻存后用液氮超低温保藏 -150-150-196-196, 细胞所有理化活动均降至最低限度,或忽略不计细胞所有理化活动均降至最低限度,或忽略不计长期储存。长期储

40、存。4. 细胞复苏时的融化速度。细胞复苏时的融化速度。 细胞冻存管细胞冻存管, 取出取出迅速升温迅速升温胞外结晶在短时间内融胞外结晶在短时间内融化化避免因缓慢融化而使水分渗入胞内再次形成冰晶避免因缓慢融化而使水分渗入胞内再次形成冰晶对细胞造成的伤害。对细胞造成的伤害。 操作:取出后立即投入到操作:取出后立即投入到3738水浴。水浴。大规模培养:大规模培养:在人工条件下在人工条件下高密度高密度大量培养特定的动物大量培养特定的动物细胞从而生产珍贵医药产品的技术细胞从而生产珍贵医药产品的技术 是实现大规模生产的关键技术。是实现大规模生产的关键技术。 产品:疫苗、激素、细胞因子、单克隆抗体等。产品:疫

41、苗、激素、细胞因子、单克隆抗体等。 (六)动物细胞的大规模培养(六)动物细胞的大规模培养1. 培养基培养基 与实验室培养基基本一致(除用无血清培养基外)。与实验室培养基基本一致(除用无血清培养基外)。无血清培养基中难生长细胞无血清培养基中难生长细胞采用渐适法驯化细胞采用渐适法驯化细胞使适应于在无血清培养基中生长。使适应于在无血清培养基中生长。 *无血清培养液中易出现细胞毒(与水中的微量元素无血清培养液中易出现细胞毒(与水中的微量元素或有机物污染有关)或有机物污染有关) 制备培养液须用制备培养液须用高纯水高纯水,经,经0.22 m的微孔滤膜的微孔滤膜过滤除菌。过滤除菌。 培养方法:悬浮培养,贴壁

42、培养,贴壁培养方法:悬浮培养,贴壁培养,贴壁-悬浮培养。悬浮培养。(1)悬浮培养)悬浮培养非贴壁依赖性细胞和兼性贴壁细胞非贴壁依赖性细胞和兼性贴壁细胞气升式气升式生物反应器或生物反应器或通气搅拌式通气搅拌式反应器反应器动物细胞动物细胞 胞膜薄,娇嫩易碎,抗剪切能力弱胞膜薄,娇嫩易碎,抗剪切能力弱气升式反应器工作原理:通过气体的上下循环起到供气升式反应器工作原理:通过气体的上下循环起到供氧以及搅拌的效果。氧以及搅拌的效果。培养规模培养规模 5L、30L、100L到到1000L 2 2动物细胞大规模培养系统动物细胞大规模培养系统而微生物可用而微生物可用搅拌式发酵罐搅拌式发酵罐(2)贴壁培养(单层细

43、胞培养)贴壁培养(单层细胞培养)贴壁依赖性细胞和兼性贴壁细胞贴壁依赖性细胞和兼性贴壁细胞转瓶(滚瓶)培养转瓶(滚瓶)培养 培养瓶旋转使吸附在瓶壁上的细胞培养瓶旋转使吸附在瓶壁上的细胞交替与培养交替与培养液及空气接触液及空气接触而增加细胞吸附面积。而增加细胞吸附面积。优点:普遍适用于大多数细胞的培养,规模较易放优点:普遍适用于大多数细胞的培养,规模较易放大,容易实现大,容易实现罐流培养罐流培养(及时放出陈旧培养液,补加及时放出陈旧培养液,补加新鲜培养液新鲜培养液)。缺点:操作较为繁琐,传代或放大时需要用蛋白酶缺点:操作较为繁琐,传代或放大时需要用蛋白酶将其从瓶壁上消化下来。将其从瓶壁上消化下来。

44、(3)微载体培养)微载体培养 基本原理:将细胞附着在微载体的表面,后置于培养基本原理:将细胞附着在微载体的表面,后置于培养液中悬浮培养,使细胞在载体表面单层生长繁殖。液中悬浮培养,使细胞在载体表面单层生长繁殖。商品微粒商品微粒:DEAE-交联葡聚糖、二甲氨丙基聚丙烯酰交联葡聚糖、二甲氨丙基聚丙烯酰胺(胺(Biocarrier)及聚苯乙烯()及聚苯乙烯(Biosilon)等市售。)等市售。优点:细胞附着表面积增大;优点:细胞附着表面积增大; 细胞生长环境均一,条件易于控制;细胞生长环境均一,条件易于控制; 取样及细胞计数简单;取样及细胞计数简单; 细胞与培养液易于分离;细胞与培养液易于分离; 大

45、规模培养只需对微生物发酵罐或气升式深大规模培养只需对微生物发酵罐或气升式深层培养系统稍加改进即可;层培养系统稍加改进即可; 适合于培养原代细胞、二倍体细胞株以及基适合于培养原代细胞、二倍体细胞株以及基因重组细胞。因重组细胞。 (4)固定化包埋培养与微囊培养)固定化包埋培养与微囊培养固定化包埋培养固定化包埋培养(大载体培养大载体培养) 用高分子材料将细胞包埋并制成固定化颗粒,在用高分子材料将细胞包埋并制成固定化颗粒,在培养液中培养。培养液中培养。海藻酸钙包埋海藻酸钙包埋: 细胞溶液与海藻酸钠溶液混合,通过喷珠装置将细胞溶液与海藻酸钠溶液混合,通过喷珠装置将其喷入氯化钙溶液其喷入氯化钙溶液直径约直

46、径约2.6mm固定化颗粒固定化颗粒,去除,去除氯化钙溶液,通入培养液培养。氯化钙溶液,通入培养液培养。 海藻酸钠分子中含有重复排列的葡糖醛酸和甘露海藻酸钠分子中含有重复排列的葡糖醛酸和甘露糖酸与钙离子作用后形成网络状凝胶珠,而将细胞包糖酸与钙离子作用后形成网络状凝胶珠,而将细胞包埋于其中。埋于其中。微囊培养微囊培养: 细胞包被在薄的半透性膜中细胞包被在薄的半透性膜中 采用海藻酸钠包埋细胞制成固定化凝胶颗粒,采用海藻酸钠包埋细胞制成固定化凝胶颗粒, 再用长链氨基酸聚合物、多聚赖氨酸包被形成坚再用长链氨基酸聚合物、多聚赖氨酸包被形成坚韧、多孔可通透的外膜。韧、多孔可通透的外膜。 液化胶化小珠,使其

47、成胶的物质从多孔膜流出,液化胶化小珠,使其成胶的物质从多孔膜流出,活细胞或生物活性物质留在多孔外膜内,活细胞或生物活性物质留在多孔外膜内, 置气升式培养系统中进行增殖。置气升式培养系统中进行增殖。(5)中空纤维培养)中空纤维培养 数千根中空纤维封存于特制的圆筒里,组成一个数千根中空纤维封存于特制的圆筒里,组成一个中空纤维培养系统。中空纤维培养系统。 “内室内室” 灌流无血清培养液供细胞生长;灌流无血清培养液供细胞生长; “外室外室” 细胞贴附于管壁上,吸取从细胞贴附于管壁上,吸取从“内室内室”渗透出来的养分,迅速生长繁殖。渗透出来的养分,迅速生长繁殖。 单抗等细胞分泌的大分子量物质只能留在外室

48、,单抗等细胞分泌的大分子量物质只能留在外室,且不断被浓缩。且不断被浓缩。 收集产物收集产物 打开打开“外室外室”总出口总出口 代谢废物为小分子物质,渗进内室,从其出口代谢废物为小分子物质,渗进内室,从其出口流出,不对外室细胞产生毒害流出,不对外室细胞产生毒害优点:优点: 培养器体积小,细胞密度高;培养器体积小,细胞密度高; 产物浓度高、纯度高;产物浓度高、纯度高; 自动化程度高,细胞生长周期长。自动化程度高,细胞生长周期长。缺点:价格较贵。缺点:价格较贵。(5)中空纤维培养)中空纤维培养第二节第二节 细胞融合细胞融合 离体条件下用人工将两或多个不同种的细胞通过无离体条件下用人工将两或多个不同种

49、的细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的过程性方式融合成一个杂合细胞的过程 融合后的细胞含两或多个不同的细胞核(异核体),融合后的细胞含两或多个不同的细胞核(异核体),随后细胞的有丝分裂中,有些不同胞核的染色体合并到随后细胞的有丝分裂中,有些不同胞核的染色体合并到一个核中一个核中单核杂种细胞,而不能形成单核的融合细胞单核杂种细胞,而不能形成单核的融合细胞在培养过程中逐步死亡。在培养过程中逐步死亡。细胞融合细胞融合( (体细胞杂交体细胞杂交):): 法国法国 Barski 1960年年过程:细胞在过程:细胞在促融因子促融因子的作用下发生凝集现象,胞间质的作用下发生凝集现象,胞间质膜粘连,细胞融合,

50、在培养过程中核融合膜粘连,细胞融合,在培养过程中核融合杂种细胞。杂种细胞。1)细胞的准备)细胞的准备 贴壁培养的细胞,两亲本细胞混合培贴壁培养的细胞,两亲本细胞混合培养养 悬浮细胞悬浮细胞 制成一定浓度的悬液;制成一定浓度的悬液;2)诱导融合)诱导融合 需要添加促融剂诱导融合;需要添加促融剂诱导融合;一、动物细胞融合一、动物细胞融合小鼠和田鼠,小鼠和小鸡,小鼠和人小鼠和田鼠,小鼠和小鸡,小鼠和人 远缘和超远缘的远缘和超远缘的体细胞杂交。体细胞杂交。1、动物细胞融合的基本过程、动物细胞融合的基本过程3)杂种细胞的选择)杂种细胞的选择 利用选择性培养基,使亲本细胞死利用选择性培养基,使亲本细胞死亡

展开阅读全文
相关资源
猜你喜欢
相关搜索
资源标签

当前位置:首页 > 办公、行业 > 各类PPT课件(模板)
版权提示 | 免责声明

1,本文(生物技术制药专业PPT课件.ppt)为本站会员(三亚风情)主动上传,163文库仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。
2,用户下载本文档,所消耗的文币(积分)将全额增加到上传者的账号。
3, 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(发送邮件至3464097650@qq.com或直接QQ联系客服),我们立即给予删除!


侵权处理QQ:3464097650--上传资料QQ:3464097650

【声明】本站为“文档C2C交易模式”,即用户上传的文档直接卖给(下载)用户,本站只是网络空间服务平台,本站所有原创文档下载所得归上传人所有,如您发现上传作品侵犯了您的版权,请立刻联系我们并提供证据,我们将在3个工作日内予以改正。


163文库-Www.163Wenku.Com |网站地图|