1、抗核抗体的测定 n （antinuclear antibody，ANA）又称抗核酸抗原抗体，是一组将自）又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP）、）、DNA、可提取的、可提取的核抗原（核抗原（ENA）和）和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。滑膜液和尿液中。n 在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质，激发机体产生许多抗不在某些因素作用下改变细胞核
2、某些成分性质，激发机体产生许多抗不同核成分的抗体；同核成分的抗体；抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率n 如系统性红斑狼疮（如系统性红斑狼疮（SLE，95%100%）、）、n 类风湿性关节炎（类风湿性关节炎（RA，10%20%）、）、n 混合性结缔组织病（混合性结缔组织病（MCTD，80%100%）、）、n 干燥综合症（干燥综合症（SS,10%40%）、）、n 全身性硬皮病（全身性硬皮病（85%90%）、）、n 狼疮性肝炎（狼疮性肝炎（95%100%）、）、n 原发性胆汁性肝硬化（原发性胆汁性肝硬化（95%100%）等，）等，lANA主要是主要是IgG，也有也有IgM、IgA、IgD
3、和和IgE；lANA无器官特异性和种属特异性无器官特异性和种属特异性；lANA主要存在于血清中；主要存在于血清中；l将检出将检出ANA作为作为AID存在的依据。存在的依据。 抗抗DNA抗体：抗体：抗抗dsDNA/ /抗抗nDNA、抗、抗ssDNA/ /抗抗dDNA等等 抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体( (AHA) )：抗抗H1、抗、抗H2A、抗、抗H2B、 抗抗H3、抗、抗H4抗体等抗体等 抗非组蛋白抗体：抗非组蛋白抗体：抗抗nRNP/ /抗抗U1RNP、抗、抗Scl-70、 抗抗SSA、抗、抗Sm、抗、抗SSB、抗、抗Jo-1、抗、抗Rib抗体、抗体、 AnuA、抗、抗DNP、抗、抗DE多肽抗体、
4、抗多肽抗体、抗DM53抗体抗体 抗抗RANA抗体、抗着丝点、抗抗体、抗着丝点、抗Ku抗体等抗体等 抗核仁抗体：抗核仁抗体：抗抗PM-Scl抗体、抗抗体、抗Th/To抗体、抗体、 抗抗U3-RNP、抗、抗4-6-S-RNA抗体等抗体等（一）（一）ANA的类型和临床意义的类型和临床意义 ANA谱谱 抗天然抗天然DNA ( (native DNA,nDNA) ) 抗体抗体，又称抗双，又称抗双链链DNA (double stranded DNA,dsDNA) 抗体。抗体。抗变性抗变性DNA (denatured DNA,dDNA) 抗体抗体，又称抗单，又称抗单链链DNA (single strande
5、d DNA,ssDNA)抗体。抗体。对对SLE有高特异性有高特异性; ;SLE诊断标准之一诊断标准之一。缓解期降低缓解期降低70%90%SLE活动期增高活动期增高药物疗效药物疗效抗抗dsDNA抗体抗体 抗抗DNA抗体抗体 抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体（anti-histonic antibody,AHA）： 由由H1、H2A、H2B、H3和和H4五个亚单位，各自都五个亚单位，各自都 有特异性抗体；有特异性抗体；AHA检检出出百百分分率率抗抗dsDNAdsDNA507090100药物诱导药物诱导性狼疮只性狼疮只能检出此能检出此SLEAHAAHA抗抗组蛋白组蛋白抗体抗体 可提取性核抗原可提取性核抗原
6、(extractable nuclear antigen,ENA) 是盐水或磷酸盐缓冲液可提取性核抗原的总称，是非是盐水或磷酸盐缓冲液可提取性核抗原的总称，是非组蛋白的核蛋白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量组蛋白的核蛋白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量的的RNARNA和多肽组成。和多肽组成。抗抗ENA抗体抗体有特异诊断价值的有以下七种：有特异诊断价值的有以下七种： 抗抗nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗体；抗体； 抗抗Sm抗体抗体； 抗抗SSA抗体；抗体； 抗抗SSB抗体；抗体； 抗抗Scl-70抗体；抗体； 抗抗Jo-1抗体；抗体； 抗核糖体抗体抗核糖体抗体 。 抗抗SmSm
7、抗体：抗体：SLESLE标记性抗体（标记性抗体（20%20%40%40%） 抗抗U1-RNPU1-RNP抗体抗体：MCTD 95%MCTD 95%100%100%（高滴度）（高滴度） 抗抗SSASSA抗体：抗体：SS 40%SS 40%95%95%，其它，其它CTDCTD 抗抗SSBSSB抗体：抗体： SS 40%SS 40%90%90%，其它，其它CTDCTD 抗抗Scl-70Scl-70抗体：抗体：PSS25%PSS25%70%, 70%, 标记性抗体标记性抗体 抗抗Jo-1Jo-1抗体：抗体：PM/DM 25%PM/DM 25%，标记性抗体，标记性抗体 抗抗rRNPrRNP（RibRib
8、）抗体：）抗体： SLESLE特异性抗体特异性抗体 （10%10%20%20%）抗抗DNP抗体（抗核蛋白抗体）：抗体（抗核蛋白抗体）：核蛋白核蛋白(DNP)抗原由抗原由DNA和蛋白质组成。和蛋白质组成。DNP抗原有不溶性抗原有不溶性和可溶性两种，可分别产生相应的抗体。和可溶性两种，可分别产生相应的抗体。 检出检出百分百分率率抗抗DNP20406080 SLE非活动期非活动期 SLE活动期活动期抗不溶性抗不溶性DNP抗体抗体抗抗DNP抗抗DNP100RA滑滑膜液中膜液中抗抗DNP抗可溶性抗可溶性DNP抗体抗体抗抗DNP抗体抗体 抗核小体抗体抗核小体抗体（anti-nucleosome antib
9、ody，AnuA)l 是细胞核染色质的基本单位是细胞核染色质的基本单位;l 细胞凋亡而致核小体大量蓄积，细胞凋亡而致核小体大量蓄积， 诱导诱导B细胞产生的细胞产生的AnuA是是SLE 特异性的标志抗体。特异性的标志抗体。抗抗dsDNA抗体抗体 抗核小体抗体抗核小体抗体 抗抗dsDNA和抗和抗Sm阴性的阴性的SLE阳性阳性率为率为60%80%，特异性，特异性97%。 抗抗核小体核小体抗体抗体（二）（二）ANA的检测方法的检测方法 l将患者血清先进行稀释，可以做定量试验，在将患者血清先进行稀释，可以做定量试验，在1:80稀释仍呈阳性时，对稀释仍呈阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。的诊断有较大
10、的参考价值。 形成胞核基质形成胞核基质ANA抗人抗人Ig FITC1.1.荧光免疫法荧光免疫法 间接法：间接法： 第一步：荧光素标记抗抗体第一步：荧光素标记抗抗体 第二步：已知第二步：已知AgAg固定待测固定待测AbAb洗涤洗涤 再加入抗再加入抗AbAb* * 洗涤洗涤镜检。镜检。特点：特点：1.1.制备一种荧光抗体，可检测多种制备一种荧光抗体，可检测多种AgAg或或AbAb。2.2.既可检测既可检测AgAg，又可检测，又可检测AbAb。3.3.灵敏度高，但易产生非特异性荧光灵敏度高，但易产生非特异性荧光AgAb（？）（？）抗抗Ab*抗核抗体核型与相关疾病抗核抗体核型与相关疾病核型核型荧光图形
11、荧光图形抗体抗体相关疾病相关疾病核膜型核膜型核周环状荧光核周环状荧光抗抗dsDNAdsDNASLESLE、慢活肝炎、慢活肝炎均质型均质型核呈均质荧光核呈均质荧光抗抗DNADNA、AHAAHA、 AnuAAnuASLESLE、RARA、PSSPSS、慢性、慢性肝病肝病斑点型斑点型核内颗粒状荧光核内颗粒状荧光抗抗ENAENAMCTDMCTD、SLESLE、PSSPSS、SSSS、PMPM核仁型核仁型核仁有荧光核仁有荧光抗核仁抗体抗核仁抗体PSSPSS、雷诺现象、雷诺现象、SLESLE着丝点型着丝点型核浆细小相同颗粒核浆细小相同颗粒荧光荧光抗着丝点抗着丝点PSSPSS、CRESTCREST综合征综合征周边型周边型 可见于胶原病、可见于胶原病、PBCPBC、CAHCAH等患者等患者 用用ELISA间接法检测抗间接法检测抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体。抗核小体抗体。2. ELISA法法3. 免疫印记法免疫印记法Thank you!
