1、五日生化需氧量的测定五日生化需氧量的测定稀释接种法稀释接种法1.方法原理：方法原理： 生化需氧量是指在规定条件下，微生生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。 对某些地表水及大多数工业废水，因对某些地表水及大多数工业废水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度和保证有充足的溶解氧。为了以降低其浓度和保证有充足的溶解氧。为了保证水样稀释后有足够的溶解氧，稀释水通保证水样稀释后有足够的溶解氧，
2、稀释水通常要通入空气或氧气进行曝气，使稀释水中常要通入空气或氧气进行曝气，使稀释水中溶解氧接近饱和。稀释水中还应加入一定量溶解氧接近饱和。稀释水中还应加入一定量的无机营养盐和缓冲物质的无机营养盐和缓冲物质,以保证微生物生以保证微生物生长的需要。长的需要。2. 稀释接种法测定稀释接种法测定BOD5时需注意的问题时需注意的问题2.1 样品的采集及保存样品的采集及保存 采集样品时应充满并密封于瓶中，在采集样品时应充满并密封于瓶中，在0-4条件下进行保存，一般应在条件下进行保存，一般应在6h内进行分析。内进行分析。若需要远距离转运，在任何情况下，贮存时若需要远距离转运，在任何情况下，贮存时间不应超过间
3、不应超过24h。 2.2 时间的影响时间的影响 样品中的样品中的BOD5浓度易随时间的变化而变化，浓度易随时间的变化而变化，样品储存时间、测定过程时间和培养时间均样品储存时间、测定过程时间和培养时间均会对测定结果产生影响。这就要求我们在进会对测定结果产生影响。这就要求我们在进行行BOD5的测定时需要严格控制培养时间和的测定时需要严格控制培养时间和样品储存时间。样品储存时间。 2.3. 温度的影响温度的影响 温度与微生物的增长速率相关，直接影响温度与微生物的增长速率相关，直接影响 微生物的生长繁殖，进而影响微生物的生长繁殖，进而影响BOD5的测定的测定结果。另外，温度的变化还会引起溶解氧的结果。
4、另外，温度的变化还会引起溶解氧的变化。因此，应严格控制采样温度、样品储变化。因此，应严格控制采样温度、样品储存温度、实验室温度及培养箱温度。存温度、实验室温度及培养箱温度。2.4 pH值的影响值的影响 水样的水样的pH若超出若超出6.5-7.5范围时，应加酸或范围时，应加酸或碱调节至此范围；稀释水和接种稀释水的碱调节至此范围；稀释水和接种稀释水的pH值应为值应为7.2。2.5. 生物因素的影响生物因素的影响2.5.1 接种液的质量接种液的质量 对于一般的地表水、生活污水或者不含对于一般的地表水、生活污水或者不含或少含微生物的工业废水的测定，在测定时或少含微生物的工业废水的测定，在测定时应进行接
5、种，以引入能分解废水中有机物的应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。接种液一般采用城市污水或表层土微生物。接种液一般采用城市污水或表层土壤浸出液。壤浸出液。 城市污水，一般采用生活污水，在室温城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上清液供用。下放置一昼夜，取上清液供用。 表层土壤浸出液，取表层土壤浸出液，取100g花园土壤，加花园土壤，加入入1L水，混合并静置水，混合并静置10min，取上清液供用。，取上清液供用。 上清液的接种量，按水样的性质确定。上清液的接种量，按水样的性质确定。 啤酒厂：啤酒厂： 接种量一般以接种量一般以7-8ml/L水为宜。水为宜。 印染废水：上清液
6、印染废水：上清液2ml/L,再加入再加入7ml/L驯化接种液。驯化接种液。 葡萄糖谷氨酸标准溶液：接种量一般以葡萄糖谷氨酸标准溶液：接种量一般以2-3ml/L水水 为宜。为宜。 当废水中存在着难于被一般生活污水中当废水中存在着难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，在其排污口的下游毒物质时，在其排污口的下游3-8km处取水处取水样做为废水的驯化接种液，同时加入适量表样做为废水的驯化接种液，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。生物大量繁殖。 当水样中含有铜、铅、锌
7、、镉、铬、砷、当水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数以种液的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数以减少毒物的浓度。减少毒物的浓度。 2.5.2 抑制硝化作用抑制硝化作用 水中有机物的生物氧化过程可分为两水中有机物的生物氧化过程可分为两个阶段，第一阶段主要是碳氢化合物被氧化，个阶段，第一阶段主要是碳氢化合物被氧化，称为碳化阶段，在称为碳化阶段，在20下约需下约需20d才能完成，才能完成，BOD测定的一般是该阶段的耗氧量。第二测定的一般是该阶段的耗氧量。第二阶段是含氮化合物及部分氨氧化为亚硝酸盐
8、阶段是含氮化合物及部分氨氧化为亚硝酸盐及硝酸盐，称为硝化阶段，在及硝酸盐，称为硝化阶段，在20约需约需100d 。对一般水样，测定。对一般水样，测定BOD5时的硝化作时的硝化作用并不显著。但对于生化处理的出水，因其用并不显著。但对于生化处理的出水，因其含有大量的硝化细菌，在测定含有大量的硝化细菌，在测定BOD5时也包时也包括了部分含氮化合物的需氧量，因此需要加括了部分含氮化合物的需氧量，因此需要加入硝化抑制剂，抑制硝化作用对入硝化抑制剂，抑制硝化作用对BOD5测定测定的影响。可在每升稀释水样中加入的影响。可在每升稀释水样中加入2ml浓度浓度为为500mg /L的丙烯基硫脲。的丙烯基硫脲。 2.
9、6 稀释倍数的确定稀释倍数的确定 确定合理的稀释倍数是成功测定确定合理的稀释倍数是成功测定BOD5的关键之一，稀释的倍数一般以五日培养后的关键之一，稀释的倍数一般以五日培养后消耗的溶解氧占原有溶解氧的消耗的溶解氧占原有溶解氧的40%-70%为为宜，也就是恰当的稀释比应使培养后的剩余宜，也就是恰当的稀释比应使培养后的剩余溶解氧溶解氧1mg/L，消耗的溶解氧大于，消耗的溶解氧大于2mg/L。先测定水样的先测定水样的CODcr值，然后根据水样的值，然后根据水样的CODcr浓度选用合适的稀释倍数，一般一个浓度选用合适的稀释倍数，一般一个样品应做样品应做3-4个不同的稀释比，如果经个不同的稀释比，如果经
10、5d培培养 后 ， 测 其 溶 解 氧 时 ， 当 向 水 样 中 加养 后 ， 测 其 溶 解 氧 时 ， 当 向 水 样 中 加1mlMnSO4及及2ml碱性碘化钾溶液后，瓶内碱性碘化钾溶液后，瓶内出现白色絮状沉淀，说明此培养液剩余溶解出现白色絮状沉淀，说明此培养液剩余溶解氧为零，应加大稀释比。氧为零，应加大稀释比。 溶解氧消耗量小于溶解氧消耗量小于2mg/L，有两种可能，有两种可能，一是稀释倍数过大；另一种可能是微生物菌一是稀释倍数过大；另一种可能是微生物菌种不适应，活性差，或含毒物质浓度过大。种不适应，活性差，或含毒物质浓度过大。 对工业废水稀释倍数的确定，书上列出对工业废水稀释倍数的
11、确定，书上列出了三个系数：了三个系数：0.075，0.15，0.225。根据本。根据本站以往的经验，在选择系数的时候，可以在站以往的经验，在选择系数的时候，可以在0.075-0.15之间，之间，0.15-0.225之间多选择几之间多选择几个系数。比如某水样个系数。比如某水样CODcr浓度为浓度为100mg/L,我们可以选择系数为我们可以选择系数为0.11，0.13，0.14，0.15。 由高锰酸盐指数与一定的系数的乘积由高锰酸盐指数与一定的系数的乘积 求得的稀释倍数求得的稀释倍数 对地表水稀释倍数的确定，也同样如此。比如，对地表水稀释倍数的确定，也同样如此。比如，高锰酸盐指数的浓度为高锰酸盐指
12、数的浓度为5-10mg/L之间时，我们可之间时，我们可以在系数以在系数0.2-0.3之间，再增加之间，再增加0.22，0.25，0.28等等几个系数。几个系数。 高锰酸盐指数（高锰酸盐指数（mg/L） 系数系数高锰酸盐指数（高锰酸盐指数（mg/L） 系数系数5 -5-10 0.2 0.310-20 0.4、0.620 0.5、0.7、1.03 样品分析过程中应注意的细节：样品分析过程中应注意的细节：3.1 固定溶解氧的时候，应将吸管插入溶解氧瓶的固定溶解氧的时候，应将吸管插入溶解氧瓶的液面下。液面下。3.2 加入硫酸后混合摇匀，一定要确保沉淀物全部加入硫酸后混合摇匀，一定要确保沉淀物全部溶解。
13、溶解。3.3 在稀释水样时，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀在稀释水样时，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于释水（或接种稀释水）于1000ml量筒中，加入需量筒中，加入需要量的均匀水样，再加入稀释水（或接种稀释水）要量的均匀水样，再加入稀释水（或接种稀释水）至定量至定量,用带胶板的玻棒小心上下混匀，混匀时勿用带胶板的玻棒小心上下混匀，混匀时勿使搅拌棒的胶板露出水面，防止产生气泡。使搅拌棒的胶板露出水面，防止产生气泡。 4. 验证试验验证试验 为了检查接种稀释水，接种水和分析人为了检查接种稀释水，接种水和分析人员的技术，需进行验证试验。将每升含葡萄员的技术，需进行验证试验。将每升含葡萄糖
14、和谷氨酸各糖和谷氨酸各150mg的标准溶液以的标准溶液以1：50稀稀释比稀释后（用接种稀释水），与水样同步释比稀释后（用接种稀释水），与水样同步测定测定BOD5，测得值应在，测得值应在180-230 mg/L之间。之间。 5.CODcr和和BOD5的关系的关系 测定测定CODcr采用的是强氧化剂，水中有采用的是强氧化剂，水中有机物可被氧化到机物可被氧化到85%-95%，所以，同一种，所以，同一种水质的水质的CODcr浓度一般应高于浓度一般应高于BOD5，其间，其间的差值能够粗略地表示不能为微生物所降解的差值能够粗略地表示不能为微生物所降解的有机物，一般来说，的有机物，一般来说，CODcrBOD5。
