1、第四节 酶促反应动力学（一）一、底物浓度对酶反应速度的影响二、米氏公式的导出三、米氏方程的讨论四、米氏常数的求法五、多底物的酶促反应动力学一、底物浓度对酶促反应速度的影响一、底物浓度对酶促反应速度的影响2134567800 2 4 6 8底物浓度 mmole生成物浓度806040200S+EP(固定酶的浓度在固定时间内反应)Juang RH (2004) BCbasics（单底物酶促反应）PSE酶与底物先络合成一个中间产物中间产物，然后中间产物进一步分解成产物和游离的酶。 231KEPKESKSE酶的底物饱合现象中间络合物学说非酶催化剂非酶催化剂酶催化剂酶催化剂中间产物假说证据中间产物假说证据
2、Michaelis 与 Menten 提出酶催化动力学MichaelisMentenNelson & Cox (2000) Lehninger Principles of Biochemistry (3e) p.2581913年年*maxSKsSVVKs为底物解离常数（底物常数）)(12ESSESEkkKs 231KEPKESKSE二、米氏方程的导出1、根据酶反应的中间复合物学说：、根据酶反应的中间复合物学说：假定E+SES迅速建立平衡，底物浓度远远大于酶浓度下，K3K2即K3反应特别慢，可以忽略不计。米式方程的导出：米式方程的导出：早年的米式方程基于快速平衡假说早年的米式方程基于快速平衡假说
3、 4231KKEPKESKSE在反应的初始阶段，S远远大于E，因此，S可以认为不变。因为研究的是初速度，P的量很小，由P+EES可以忽略不记。 231KEPKESKSE游离的酶与底物形成ES的速度极快（快速平衡）快速平衡），而ES形成产物的速度极慢，故，ES的动态平衡与ESP+E没有关系（既K1、K2K3）ES的生成速度：K1（E - ES）SES的分解速度：K2ESK1（E - ES）S = K2ES121SKKSEKES反应速度：max1233SKSVSKKSEKESKVSKS现在称为底物常数 231KEPKESKSE 米氏推导酶促反应速度公式时，认为ES的积累是快速平衡的结果，而没有考虑
4、ESE+P这一步。而Briggs认为应当考虑这一步，因为并不总是K3K2, ESE+P这一步也可能速度很快，这时，E，S和ES将不能处于一个平衡状态。布氏提出稳态理论。1925年Briggs和Haldane提出稳态理论ES+P+ES 的生成量与消失量相等，故平衡时 ES 浓度成一稳定状态。SEESteady State 时 ES 的浓度恒定SPEES反应时间浓度Juang RH (2004) BCbasicsBriggs的酶促反应模型:ESESEP+k1k2k3k4布氏提出以下假设:1.反应开始时,P = 0,不足已产生逆反应.测定酶的反应速度一般是测定反应的初速度,即产物浓度变化在5%以内的
5、速度.2. ES0即反应中 S=.S03.反应开始后,反应立刻进入恒态状态,ES浓度处于稳定状态的形成速度等于其分解速度.ES稳态理论(Steady State theory)的假设稳态理论下米氏方程的推导E + S ES E + P(vo)k2k1k3 k1ES = k2 ES + k3 ES vo=Vmax SKm + SE0 = E + ESvo = k3 ESVmax = k3 E0酶必须先与底物结合ES 的生成量的生成量 等等于于其消失量其消失量ES 浓度恒定Steady State由上式出发可推得Michaelis-Menten 公式Juang RH (2004) BCbasics
6、E0酶的总量酶的总量稳态理论下米氏方程的推导E + S ES E + P(vo)k2k1k3推导:的生成速度:的分解速度:ESESddtES=k1E S包括正向:负向:ESESEP+E+Pk2k3ddtES-= k2ES + k3ES当进入稳态时:ddtES=ddtES-即: k1E S =k2ES + k3ES =ES k2+k3S又由酶的恒等式:E0EES=+E=E0-ES则: k1E0-ESS= ES k2+ k3整理:E0S-ESS=k2+ k3k1ES令:k2+ k3k1= km则:E0S-ES S=ESkmE0S = ESkm+ SES =E0Skm+ Sv= k3ES = k3E
7、0Skm+ SVmax=k3E0因:故:v=VmaxSkm+ S稳态理论下米氏方程的推导E0 = E + ESvo = k3 ESVmax = k3 E0E0酶的总量酶的总量当SKm时当S=Km时2maxmaxVSKSVVmmaxmaxmaxVSSVSKSVVm米氏方程定量的表达了反应初速度与底物浓度之间的关系米氏方程定量的表达了反应初速度与底物浓度之间的关系与实验结果相符合。与实验结果相符合。三、米氏方程的讨论1.米氏方程的意义米氏方程的意义物理意义物理意义: 当反应速度达到最大反应速度（Vmax)的一半时的底物浓度.Km的引伸意义的引伸意义:Km是酶学研究中的重要研究数据,表示了酶的一个基
8、本性质.uKm值是酶的特征常数之一酶的特征常数之一,与酶的性质酶的性质有关,而与酶的酶的浓度浓度无关,不同的酶,其Km值不同.u对于专一性不强的酶来说对于每一个底物都有一个相应的Km值.2、米式方程中各参数的意义、米式方程中各参数的意义1)Km的意义的意义三、米氏方程的讨论uKm与天然底物与天然底物Km最小的底物称该酶的最适底物或天然底物。因为：Km愈小（达到Vmax一半所需的底物浓度愈小）表示V对S 越灵敏。 VS1/2VmaxKm三、米氏方程的讨论u快速平衡假说与稳态平衡假说的实质区别快速平衡假说与稳态平衡假说的实质区别当K1、K2K3时，即ESP+E是整个反应平衡中极慢的一步SKKKKK
9、KKm12132maxmaxSKSVSKSVVSm“稳态平衡=快速平衡+慢速平衡”：1312132KKKKKKK当当ES P+E极慢（极慢（K3/K1极小）时，稳态平衡基本等于快速平衡极小）时，稳态平衡基本等于快速平衡 231KEPKESKSE三、米氏方程的讨论uKm、Ks与底物亲和力与底物亲和力l Km是ES分解速度（K2+K3）与形成速度（K1）的比值，它包含ES解离趋势（K2K1）和产物形成趋势（K3K1）。l Ks是底物常数，只反映ES解离趋势（底物亲和力），1/Ks可以准确表示酶与底物的亲和力大小。l 只有当K1、K2K3时，KmKs，因此，1/Km只能近似地表示底物亲和力的大小。l
10、 底物亲和力大不一定反应速度大（反应速度更多地与产物形成趋势K3K1有关）131312132KKKKKKKKKKKsm三、米氏方程的讨论2)Km值的用途值的用途根据根据Km推测代谢的方向及程度推测代谢的方向及程度l 根据正逆反应Km的差别及细胞内正逆两相底物的浓度推测酶促反应的正逆方向。l 根据代谢途径中各个酶的Km及其相应底物浓度判断限速步骤（ Km最大的步骤不一定是限速步骤）l 根据Km值的大小判断分支代谢的流向l 酶工程与代谢工程中改造酶的Km调控代谢途径（强化则降低Km，弱化则提升Km ）三、米氏方程的讨论3)米式方程的用途米式方程的用途（1）根据）根据S求求V（2）根据）根据V（或相
11、对速度（或相对速度a）求）求S三、米氏方程的讨论设定达到最大反应速度的0.9倍时，所需底物浓度为S0.9 S0.9=9Km同理有：S0.8=4Km S0.7=2.33Km S0.6=1.5Km S0.5=1Km S0.1=1/9KmS0.9 /S0.1=81S0.7/S0.1=21三、米氏方程的讨论（3）根据相对速度推测酶活性中心饱和度）根据相对速度推测酶活性中心饱和度当v=Vmax时，表明酶的活性部位已全部被底物占据。当v=1/2Vmax时，表示活性部位有一半被占据。3)米式方程的用途米式方程的用途4)、Vmax与与K3（Kcat）的意义）的意义uVmax不是一个常数，它取决于酶的浓度酶的浓
12、度，它是一个酶反应体系的速度的极限值。Vmax=K3E0uK3代表酶被底物饱和时每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，称为转换数转换数（或催化常数，Kcat），表明酶的酶的最大催化效率最大催化效率三、米氏方程的讨论5)、Kcat/Km表示酶的实际催化效率表示酶的实际催化效率 三、米氏方程的讨论在生理条件下，大多数酶并不被底物所饱和，在体内S/Km的比值通常介于0.01到1之间 maxSKmSEKcatSKmSVvSKm时： SEKmKcatv13213kkkkkKKmcatKcat/Km的上限是的上限是K1，既生成，既生成ES复合物的速度复合物的速度(酶促反应的速度酶促反应的速度不会超过不会超过E
13、S的形成速度的形成速度K1，在水相中不会超过在水相中不会超过108109）只有只有Kcat/Km可以客观地比较不同的酶或同一种酶催可以客观地比较不同的酶或同一种酶催化不同底物的催化效率化不同底物的催化效率1、Lineweaver-Burk双倒数作图法双倒数作图法maxmax111VSVKVmmaxSKSVVm四、米氏常数的求法选底物浓度应考虑能否得到选底物浓度应考虑能否得到1/S的常数增量的常数增量uS为1.01、1.11、1.25、1.42、1.66、2.0、2.5、3.33、5.0、10时u1/S为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0是常数增量。p
14、 S为常数增量1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10时，p 1/S为0.1、0.111、0.125、0.5、1.0，是非常数增量，点多集中在1/v轴附近。l 该作图的缺点是：实验点过分集中在直线的左下方，而低浓度低浓度S的实验点又因倒数后误差较大误差较大，往往偏离直线较远。从而影响Km和Vmax的准确测定。 四、米氏常数的求法2、Eadie-HofsteeVV/S作图法作图法3、Hanes-Woolf作图法作图法 4、Eisenthal作图法作图法 5、Hill作图法作图法mLogKSLognVVVLogmaxmLogKSLognYYLog1（寡聚酶）-LogKmLogS）（VVVLog
15、YYLogmax1四、米氏常数的求法（一）双底物酶促反应动力学机理（一）双底物酶促反应动力学机理l序列反应或单一置换反应:u有序反应Orderedreaction(orderedBiBi)u随机反应Randomreactions(randomBiBi)l乒乓反应或双置换反应五、多底物的酶促反应动力学QPBA酶1、有序反应机理有序反应机理只有先导底物A(Leadingsubstrate)首先与酶结合，然后B才能与酶结合，形成的三元复合物EAB（ternarycomplex)转变为EPQ，B的产物P先释放，A的产物Q后释放。在缺少A时，B不能与E结合五、多底物的酶促反应动力学E AE AEB QE
16、P QE EABPQ反应的总方向决定于A、Q的浓度和反应的平衡常数NAD与NADH相互竞争E上的NAD结合部位2、随机反应机理随机反应机理 底物A、B与酶结合的顺序是随机的，形成的三元复合物AEB QEP，产物P、Q的释放顺序也是随机的。五、多底物的酶促反应动力学l限速步骤是限速步骤是AEBQEPlA与与Q相互竞争相互竞争E上的底物结合部位上的底物结合部位A，B与与P相互竞争相互竞争E上的上的底物结合部位底物结合部位Bl反应的总方向决定于反应的总方向决定于A、B、Q、P的浓度和反应的平衡常数的浓度和反应的平衡常数3、乒乓反应机理乒乓反应机理五、多底物的酶促反应动力学整个反应历程中只有二元复合物
17、形式，没有三元复合物形式整个反应历程中只有二元复合物形式，没有三元复合物形式谷氨酸：草酰乙酸氨基转移酶符合双置换、双底物机制的酶（二）双底物反应的动力学方程1、乒乓机制的动力学方程、乒乓机制的动力学方程 maxBAAKBKBAVVBmAmmaxmaxmax1111VBVKAVKVBmAmKmA：B达到饱和浓度时A的米氏常数KmA：A的表观米氏常数Vmax：AB都达到饱和浓度时的最大反应速度五、多底物的酶促反应动力学2、序列机制的底物动力学方程、序列机制的底物动力学方程BmAsmaxKKBAAKBKBAVVBmAm 11111maxmaxmaxmaxBAVKKVBVKAVKVBmABmAms五、
18、多底物的酶促反应动力学六、六、pH值对酶反应速度的影响值对酶反应速度的影响七、温度对酶促反应速度的影响七、温度对酶促反应速度的影响八、酶浓度对反应速度的影响八、酶浓度对反应速度的影响九、激活剂对酶活性的影响九、激活剂对酶活性的影响十、抑制剂对酶活性的影响十、抑制剂对酶活性的影响第四节 酶促反应动力学（二）大多数酶的活性受大多数酶的活性受pH影影响显著，在某一响显著，在某一pH下表下表现最大活力，高于或低现最大活力，高于或低于此于此pH，酶活力显著下，酶活力显著下降。酶表现最大活力的降。酶表现最大活力的pH称为称为酶的最适酶的最适pH。典。典型的酶速度型的酶速度-pH曲线是曲线是较较窄的钟罩型曲
19、线窄的钟罩型曲线。六、pH对酶促反应速度的影响2.最适最适pH(optimumpH)2.pH影响酶活力的因素影响酶活力的因素影响酶蛋白构象，过酸或过碱会使酶变性。影响酶和底物分子解离状态，尤其是酶活性中心的解离状态，最终影响ES形成。影响酶和底物分子中另外一些基团解离，这些基团的离子化状态影响酶的专一性及活性中心构象。 3.pH对酶稳定性的影响对酶稳定性的影响 酶的提纯及测活时要选择酶的稳定pH，通常在某一pH缓冲液中进行。一般最适pH总是在该酶的稳定pH范围内，故酶在最适在最适pH附近最为稳定附近最为稳定。六、pH对酶促反应速度的影响4.酶活力酶活力pH曲线的类型曲线的类型l 最适pH与底物
20、种类、浓度及缓冲液成分有关。l 虽然大部分酶的pH酶活曲线是钟形，但也有半钟形甚至直线形。六、pH对酶促反应速度的影响1最适温度及影响因素最适温度及影响因素 温度对酶促反应速度的影响有两个方面： 提高温度，加快反应速度。提高温度，加快反应速度。 温度系数Q10：温度升高10，反应速度与原来的反应速度之比，大多数酶的Q10一般为12。提高温度，酶变性失活。提高温度，酶变性失活。 在一定范围内，反应速度达到最大时对应的温度称为该酶促反应的最适温度最适温度（optimum temperature Tm）.七、温度对酶促反应速度的影响最适温度不是酶的特征常数，最适温度不是酶的特征常数，因为一种酶的最适
21、温度不是一因为一种酶的最适温度不是一成不变的，它要受到成不变的，它要受到酶的纯度、酶的纯度、底物、激活剂、抑制剂、酶反底物、激活剂、抑制剂、酶反应时间等因素应时间等因素的影响。因此，的影响。因此，酶的最适温度与其它反应条件酶的最适温度与其它反应条件有关。有关。八、酶浓度对酶促反应速度的影响 SKmSVmax SKmSEk03 03ESKmSk v =在一定温度和在一定温度和pH下，酶促下，酶促反应在反应在底物浓度大大超过底物浓度大大超过酶浓度时酶浓度时，速度与酶的浓，速度与酶的浓度呈度呈正比正比。酶浓度对速度的影响机理：酶浓度对速度的影响机理：酶浓度增加，酶浓度增加，ES也增加，也增加，故反应
22、速度增加。故反应速度增加。激活剂（激活剂（activator):凡是能提高酶活性的物质。1、无机离子的激活作用无机离子的激活作用（1）金属离子：K+ 、Na+、Mg2+ 、Zn2+、Fe 2+ 、Ca2+（2）阴离子：Cl-、Br -、PO43-（3）氢离子u不同的离子激活不同的酶。u不同离子之间有拮抗作用和可替代作用，如Na+与K+、Mg2+与Ca2+之间常常拮抗，但Mg2+与Zn2+常可替代。u 激活剂的浓度要适中，过高往往有抑制作用，150mM九、激活剂对酶活性的影响2、简单有机分子的激活作用简单有机分子的激活作用还原剂（如Cys、还原型谷胱甘肽）能激活某些活性中心含有SH的酶。金属螯合
23、剂（EDTA）能去除酶中重金属离子，解除抑制作用。3、蛋白酶对酶原的激活、蛋白酶对酶原的激活酶原可被一些蛋白酶选择性水解肽键而被激活，这些蛋白酶也可看成为激活剂。九、激活剂对酶促反应速度的影响l抑制作用抑制作用(inhibition): 酶的必需基团化学性质必需基团化学性质的改变，但酶未变性，而引起酶活力的降低或丧失。l变性作用变性作用(denaturation): 由于酶分子的次级键酶分子的次级键(酶分子结酶分子结构）构）受到破坏而使酶活性下降或失活的现象. l抑制剂抑制剂: 不引起酶蛋白变性但能与酶分子的必需基团发酶分子的必需基团发生化学反应生化学反应,从而引起酶活力的下降甚至丧失,能引起
24、这种酶活力下降或丧失的物质叫抑制剂.l变性剂变性剂: 不专一作用于某一类化学基团,而只是破坏蛋白破坏蛋白分子中次级键分子中次级键的化学物质.叫变性剂.l失活失活: 是指酶活力的丧失酶活力的丧失.变性剂和抑制剂均可使酶失活.十、抑制剂对酶活性的影响十、抑制剂对酶活性的影响抑制作用抑制作用变性作用变性作用抑制抑制与变与变性的性的结果结果是酶是酶失活失活抑制作用：酶的结构与功能，催化机制、代谢途径研究的基本手段，药物设计的理论依据（一）抑制程度的两种表示方法（一）抑制程度的两种表示方法相对活力分数相对活力百分数2、抑制率、抑制率抑制分数抑制百分数1、相对活力、相对活力0VVai00011VVVVVa
25、iii十、抑制剂对酶活性的影响（二）抑制作用的类型（二）抑制作用的类型u不可逆的抑制作用不可逆的抑制作用:这一类抑制剂通常以比较牢固的共价共价键键与酶蛋白中的基团结合,而使酶分子失活.不能用透析,超滤等物理方法除去抑制剂而恢复酶活性.u可逆抑制剂作用可逆抑制剂作用:这类抑制剂与酶蛋白的结合是可逆的可逆的,可用透析,超滤等物理方法除去抑制剂而恢复酶活性. 竞争性抑制竞争性抑制(competitiveinhibition)非竞争性抑制非竞争性抑制(noncompetitiveinhibition)反竞争性抑制反竞争性抑制(uncompetitiveinhibition)十、抑制剂对酶活性的影响（1
26、）竞争性抑制）竞争性抑制u抑制剂具有与底物类似的结构，竞争酶的活性中心，竞争酶的活性中心，并与酶形成可逆的EI复合物，阻止底物与酶结合。u可以通过增加底物浓度而解除此种抑制。十、抑制剂对酶活性的影响（2）非竞争性抑制）非竞争性抑制u底物和抑制剂可以同时与酶结合同时与酶结合，但是，中间的三元复合物ESI不能进一步分解为产物，因此，酶的活性降低。u抑制剂与酶活性中的以外的基团结合酶活性中的以外的基团结合，其结构可能与底物无关。不能通过增加底物的浓度的办法来消除非竞争性抑制作用某些重金属离子对酶的抑制属于非竞争性抑制：竞争性抑制：Cu2+、Hg2+、Pb2+十、抑制剂对酶活性的影响（3）反竞争性抑制
27、）反竞争性抑制u酶只有在与底物结合后，才能与抑制剂结合。E+SES+I ESI Pu常见于多底物的酶促反应中十、抑制剂对酶活性的影响Enzyme Inhibition (Mechanism)IISSSI II II IIISCompetitiveNon-competitiveUncompetitiveEEDifferent siteCompete for active siteInhibitorSubstrateCartoon GuideEquation and Description binds to free E only,and competes with S;increasing S
28、overcomesInhibition by . binds to free E or ES complex; Increasing S cannot overcome inhibition. binds to ES complex only, increasing S favorsthe inhibition by .E + S ES E + P + E E + S ES E + P + + E + S E S E + S ES E + P + E S EISXJuang RH (2004) BCbasics（三）可逆抑制作用动力学（三）可逆抑制作用动力学十、抑制剂对酶活性的影响1、竞争性抑
29、制：、竞争性抑制： EIESEE0max03EkV3ESkv ESEvV0max maxESEIESEvV ESSEKm ESSKmE 酶浓度恒等酶浓度恒等:由米氏学说由米氏学说:十、抑制剂对酶活性的影响 EIIEKi KiIESSKmKiIEEI ESESSIKiKmESESSKmvVmax SkiIKmSKmVv11max11 max111max1VSkiIVKmv SkiIKmSVv1maxu Vmax不变u Km变大，而且随I浓度的增大而增大交于y轴 SkiIKmSVv1max十、抑制剂对酶活性的影响E+SESE+PKm+IEI+SEIS+IKiKiKm2、非竞争性抑制非竞争性抑制 S
30、KmKiISVvESESIEIESEvVSIESKiKmEIEISSEIKmEISIESKi1maxmax; SESKmEKmSEESESSEKm;1maxSKmSVVKiI抑制程度决定于I和Ki，与底物的Km和S无关动力学方程：动力学方程：十、抑制剂对酶活性的影响交于x轴Km不变，Vmax降至Vmax/（1+I/Ki）十、抑制剂对酶活性的影响3、反竞争性抑制反竞争性抑制E+SESE+P+IESIKmKi ESKiIESESSKmESvVESIESEEKiIESESIESIIESKiIKmESEESSEKmmax;0 SKiIKmSVv1maxKm及Vmax都变小。一组平行直线十、抑制剂对酶活
31、性的影响)1 (maxSKIKSVVim动力学方程：抑制程度决定于Km、Ki、S、IKmEnzyme Inhibition (Plots)I IIICompetitiveNon-competitiveUncompetitive Direct PlotsDouble ReciprocalVmaxVmaxKmKmS, mMvoS, mMvoKmS, mMVmaxKmVmaxVmaxVmax unchangedKm increasedVmax decreasedKm unchangedBoth Vmax & Km decreased1/S1/Km1/vo1/ VmaxTwo parallelline
32、sIntersect at X axis1/vo1/ Vmax1/S1/Km1/S1/Km1/ Vmax1/vo Intersect at Y axis= KmJuang RH (2004) BCbasics（四）一些重要的抑制剂（四）一些重要的抑制剂十、抑制剂对酶活性的影响1 1、不可逆抑制剂：、不可逆抑制剂： (1)(1)非专一性不可逆抑制剂非专一性不可逆抑制剂 与酶活性中心及活性中心外某一类或几类必需基团反应有机磷的酰化物有机磷的酰化物二异丙基磷酰氟（DFP）和许多有机磷农药。抑制机理：与蛋白酶及酯酶活性中心Ser的OH形成磷脂键。强烈抑制乙酰胆碱脂酶（神经毒剂）。解毒剂：PAM（解磷定
33、）可以把酶上的磷酰基团除去。十、抑制剂对酶活性的影响有机汞、有机砷化合物有机汞、有机砷化合物 抑制机理：使酶的巯基(-SH)烷化 解毒剂：二巯基丙醇（BAL）、Cys、GSH等过量的巯基化合物。重金属重金属 Ag+、Cu2+、Hg2+、Pb2+ 、Fe3+能使大多数酶失活，EDTA可解除。烷化物烷化物 含卤素的烷化物（碘乙酸、碘乙酰胺、卤乙酰苯等）常用于鉴定酶中巯基。氰化物、硫化物、氰化物、硫化物、CO 能与酶中金属离子形成较为稳定的络合物.十、抑制剂对酶活性的影响青霉素青霉素 不可逆抑制糖肽转肽酶十、抑制剂对酶活性的影响糖肽转肽酶-Ser-OH（2）专一性不可逆抑制剂）专一性不可逆抑制剂 此
34、类抑制剂仅仅和某一种酶的活性部位的必需基团反应十、抑制剂对酶活性的影响Ks型不可逆抑制剂（亲和标记试剂，亲合修饰试剂）型不可逆抑制剂（亲和标记试剂，亲合修饰试剂）l 具有与底物相似的结构，同时还带有一个能与酶催化中心的必需基团进行化学反应的活泼基团。l 专一性程度取决于抑制剂与酶分子的Ks常数.Ks型不可逆抑制剂：型不可逆抑制剂：对一甲苯磺酰-L-苯丙氨酰氯甲烷（TPCK）-CH2-Cl与糜蛋白酶活性部位的一个His-咪唑基距离很近，很易使之烷基化。、Kcat型不可逆抑制剂（自杀性底物）型不可逆抑制剂（自杀性底物） 具有与底物相似的结构，不仅能与酶结合，而且潜伏的反应基团能被酶催化而活化，并与
35、酶活性中心进行不可逆结合 。十、抑制剂对酶活性的影响 -氯代-D-Ala抑制丙氨酸消旋酶的机制催化完成后产物与酶分子不可逆结合。2 2、 可逆抑制剂（最常见的是可逆抑制剂（最常见的是竞争性抑制剂）竞争性抑制剂）u 许多代谢类似物都是竞争性抑制剂，竞争性抑制剂，用作抗菌药和抗癌药物u 对氨基苯甲酸的结构类似物，竞争性抑制细菌的二氢叶酸合成酶活性。十、抑制剂对酶活性的影响磺胺类药物作用机理-COOHH2N-SONH2H2N-前驱物FolicacidTetrahydro-folic acid对氨基苯磺酰胺磺胺类药物 (消炎药)对氨基苯甲酸 (PABA)细菌的叶酸(folic acid)合成需要 PABA磺胺类药物是PABA的结构类似物。会抑制细菌叶酸合成。Adapted from Bohinski (1987) Modern Concepts in Biochemistry (5e) p.197Domagk (1939)抑制剂与药物开发uKcat型不可逆抑制剂的专一性程度很强，前景广阔u底物类似物型的竞争性抑制剂最易开发u过渡态底物类似物型药物最具价值(高效特异)十、抑制剂对酶活性的影响
