1、第三章生物制品的质量管理、检定与标准化2022年6月3日星期五1第一节 生物制品的GMP管理一、GMP概况即（Good Manufacturing Practices for Drugs ,GMP）是用科学、合理、标准化的条件和方法来控制药品生产的全过程，将差错发生的可能性降到最低，从而保证生产出优质药品的一套管理制度。GMP根据适用范围可分为三类：国际性的GMP国家性质的GMP行业性的GMP2022年6月3日星期五2第一节 生物制品的BMP管理二、GMP的基本内容不同国家和组织颁布的GMP在具体条款上有差异，但基本内容是一致的，涉及到以下三个方面的内容：人员硬件软件2022年6月3日星期五3
2、第一节 生物制品的BMP管理三、GMP的作用和特点：1、GMP的实施涉及两个方面：1）政府药政管理部门从管理角度把GMP看成是政府对制药厂提出的最低要求，并作为药品质量监督员检查药厂和药品质量的依据；2）生产单位应把GMP视为本厂所必须具备的技术水平，即生产管理、质量管理和质量监测应达到的必需水平。2022年6月3日星期五4第一节 生物制品的BMP管理三、GMP的作用和特点：2、GMP是根据通用性的规定，针对本国所有药厂而制定的。各药厂应按GMP的要求，制定更具体的实施条例。3、GMP是为了防患于未然，应把管理的重点放在生产过程中，通过对生产过程的严格控制来保证生产出安全有效的药品。4、GMP
3、强调有效性的证实。对一个工序或一件用具、设备在用于生产之前，要经过验证，证明是符合要求的、有效的，以确保产品质量。2022年6月3日星期五5第一节 生物制品的BMP管理三、GMP的作用和特点：5、在管理系统上，GMP要求有生产管理部门和质量管理部门两权分立的特点，在组织上两者的地位是恶行的，在人事上两部门的负责人不能互相兼任。6、GMP强调人员素质、卫生要求、无菌要求、核对制度以及质量监督检查制度。2022年6月3日星期五6第一节 生物制品的BMP管理四、实施GMP的目的和意义实施GMP是我国医药产品进入国际市场的先决条件。实施GMP是企业及其产品增强竞争力的重要保证实施GMP，才能使药品质量
4、得到最大限度的保证。2022年6月3日星期五7第一节 生物制品的BMP管理五、生物制品GMP检查要点保护环境和操作者防止交叉污染，严格分区，独立空调局部负压尽可能一个产品、一个车间彻底消毒和清场严格动物使用及动物管理环境温度2022年6月3日星期五8第一节 生物制品的BMP管理六、生物制品GMP认证检查要点1强毒与弱毒“强毒”系指生物制品生产及检定用细菌株及病毒株，其致病力强，传染性强，感染的机率高，感染后症状较重，可危及生命健康，甚至引起传染病爆发流行的细菌菌株及病毒株。“弱毒”系指生物制品生产及检定用细菌株及病毒株，经过天然或人工改造方法，去除或封闭其毒力因子，使其致病力减弱，一般不引起感
5、染或发病的细菌菌株及病毒株。强毒株与弱毒株，不允许混放在一起，其生产及检定操作场所须严格分开，并有专用设备。2022年6月3日星期五9第一节 生物制品的BMP管理六、生物制品GMP认证检查要点2死毒与活毒“活毒”是制备灭活疫苗的第一阶段或减毒活疫苗生产时，将生产用细菌或病毒株进行大规模培养制备，其生产过程和生产场所、生产设备、器材含有大量活的细菌或活的病毒生物体，称之为“活毒”。“死毒”是制备灭活疫苗时，第一阶段生产出大量活细菌或或病毒后，到第二阶段，对活生物体加入一定量甲醛或适宜灭活剂，将全部细菌或病毒杀死，称之为“死毒”。“活毒”与“死毒”的生产场所、生产设备及器材，须严格分开。2022年
6、6月3日星期五10第一节 生物制品的BMP管理六、生物制品GMP认证检查要点3“脱毒前”与“脱毒后”“脱毒前”系指破伤风梭状菌、白喉杆菌繁殖培养时，生产大量破伤风毒素及白喉毒素，对人体有致病性，这一阶段为“脱毒前”。“脱毒后”系指毒素中加入一定量甲醛或适宜脱毒剂，将毒素去掉毒性，不再具有致病性，仍保留其抗原性和免疫原性，称之为“脱毒后”。“脱毒前”与“脱毒后”的生产场所、生产设备及器材须严格分开。2022年6月3日星期五11第一节 生物制品的BMP管理六、生物制品GMP认证检查要点4血液制品、抗血清、人和动物组织制备的制品，其生产所用的原材料，为人血浆、动物免疫血清、人和动物器官、组织及组织液
7、等，均含有大量的人和动物的异种蛋白质或细胞活性物质，具有较强的致敏原物质，不经过相应处理和加工，可致人体过敏反应或血清病。因此，血液制品、抗血清、人和动物组织生产制备制品时，须有专用生产场所、生产设备及器材，不可与其他生物制品混用。2022年6月3日星期五12第一节 生物制品的BMP管理六、生物制品GMP认证检查要点5芽孢菌制品，系用炭疽杆菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌等含有芽孢菌来生产制备的制品，芽孢菌是微生物对外周环境抵抗力最强的生命单位。芽孢菌在自然界可存活数十年及百年之久，100可耐受2小时以上，在70酒精中存活20年，低温和干燥对其毫无作用。生产芽孢菌制品的生产场所、生产设备和器材须专用，
8、与其他制品生产严格分开。2022年6月3日星期五13第一节 生物制品的BMP管理六、生物制品GMP认证检查要点6卡介苗与结核菌制品生产场所，必须严格分开，其生产设备、器材、生产用菌种必须专用，不能混用。2022年6月3日星期五14第二节 生物制品的质量检定生物制品的基本属性和特点其起始材料均为生物活性物质；生物制品生产加工全过程是生物学过程，是无菌操作过程；有些生物制品的生产过程是有毒或有菌的过程;生物制品多为蛋白质或多肽类物质，分子量较大，并具有复杂的分子结构, 较不稳定，易失活，易被微生物污染，易被酶解破坏。2022年6月3日星期五15第二节 生物制品的质量检定生物制品的基本属性和特点其质
9、量控制和质量检定是采用生物学分析方法，其效价或生物活性检定有其变异性；生物制品原材料、中间品、成品、运输、贮存、甚至使用保持在“冷链”系统中；特别是预防制品使用对象不是病人，而是健康人群；生物制品的质量控制实行生产全过程监控; 生产现场检查时要充分考虑这些特点2022年6月3日星期五16第二节 生物制品的质量检定生物制品实行国家批签发 药品管理法实施办法中规定，国家对所规定的生物制品实行国家批签发制度。 国家批签发国家药品监督管理部门授权国家药品检定机构，对所规定的生物制品，在出厂前或进口时，按批进行审查和签发，凡审查或检定不合格的不允许销售或者进口。2022年6月3日星期五17第二节 生物制
10、品的质量检定生物制品国家批签发分为三种类型一、仅对某种制品每批的批记录摘要进行审查，符合要求发给批签发证；二、审查批记录摘要 对部分批次制品进行抽检检定、审查和检定符合要求发给批签发证；三、审查批记录摘要 批批检定，审查和批批检定符合要求发给批签发证。2022年6月3日星期五18第二节 生物制品的质量检定 生物制品必须具备两个重要条件，即安全性和有效性。为保证生物制品质量，世界卫生组织要求各国生产的制品必须有专门的检定机构负责成品的质量检定，并且规定检定部门有熟练的高级技术人员和精良的设备条件，以保证检定工作的质量。未经检定审批发给正式检定合格证的制品，不准出厂。生物制品检定的依据中华人民共和
11、国药典中国生物制品规程2022年6月3日星期五19第二节 生物制品的质量检定生物技术药物质量标准研究的依据生物技术药物质量标准研究的依据一、主要依照一、主要依照重组重组DNADNA产品质量控制要点产品质量控制要点、中国生物制品规程中国生物制品规程、中国药典中国药典等要等要求进行。求进行。二、参考世界卫生组织（二、参考世界卫生组织（WHOWHO）和美国）和美国FDAFDA颁颁布的指南、布的指南、ICHICH文件和文件和欧洲药典欧洲药典。检定标准、检定方法：准确可靠、切实可行；检定标准、检定方法：准确可靠、切实可行；保证产品安全、有效。保证产品安全、有效。2022年6月3日星期五20生物技术药物质
12、量标准研究的内容生物技术药物质量标准研究的内容1、目标产品的均一性、目标产品的均一性2、建立目标产品生物学活性或免疫学效价测定方法、建立目标产品生物学活性或免疫学效价测定方法3、研究建立目标产品的免疫学活性的测定方法及质、研究建立目标产品的免疫学活性的测定方法及质控标准控标准4、研究建立国家标准品或参考品、研究建立国家标准品或参考品5、建立目标产品生产相关杂质的限量分析方法和标、建立目标产品生产相关杂质的限量分析方法和标准准6、制定出保证上述生物技术产品临床安全、有效、制定出保证上述生物技术产品临床安全、有效、与与WHO标准相一致的质量控制标准和规范化的检标准相一致的质量控制标准和规范化的检定
13、方法定方法第二节 生物制品的质量检定2022年6月3日星期五21第二节 生物制品的质量检定 研究建立灵敏、稳定的理化性质、纯度、含量研究建立灵敏、稳定的理化性质、纯度、含量的测定方法及质控标准。的测定方法及质控标准。 研究建立目标产品的生物学功效的测定方法及研究建立目标产品的生物学功效的测定方法及质控标准；建立用于药物生物学功效检定用的细胞质控标准；建立用于药物生物学功效检定用的细胞系和动物模型。系和动物模型。 运用生化标准化原则，以运用生化标准化原则，以WHO国际标准品为对国际标准品为对照，研制出国家标准品或参考对照品。在效价定义照，研制出国家标准品或参考对照品。在效价定义上要求与国际单位一
14、致；没有国际标准品的新药，上要求与国际单位一致；没有国际标准品的新药，则根据标准品要求自行研制国家参比品。则根据标准品要求自行研制国家参比品。 外源外源DNA、菌体蛋白质、细菌内毒素以及病毒、菌体蛋白质、细菌内毒素以及病毒、支原体、细菌等在工艺中加入有害物质的检测。支原体、细菌等在工艺中加入有害物质的检测。 2022年6月3日星期五22重组产品质量控制上存在的难点重组产品质量控制上存在的难点 建立重组药物的生物学活性测定方法；建立重组药物的生物学活性测定方法； 理化测定标准品的稳定性；理化测定标准品的稳定性； 人源化单抗中的人源化程度检测方法及标准研究；人源化单抗中的人源化程度检测方法及标准研
15、究； 重组人白蛋白等大剂量重组产品安全性评价问题；重组人白蛋白等大剂量重组产品安全性评价问题； 反义核酸药物理化特性测定和效力测定，即如何评反义核酸药物理化特性测定和效力测定，即如何评价反义核酸的体内及体外活力；价反义核酸的体内及体外活力； 基因治疗药物的安全性评价包括反转录病毒、生物基因治疗药物的安全性评价包括反转录病毒、生物分布和效力测定；分布和效力测定； DNA疫苗的安全性和效力检测方法研究；疫苗的安全性和效力检测方法研究； 干细胞治疗产品的质量标准的建立（干细胞鉴定及干细胞治疗产品的质量标准的建立（干细胞鉴定及活力测定）活力测定） 。2022年6月3日星期五23我国基因工程产品安全管理
16、我国基因工程产品安全管理法规和技术指南法规和技术指南传代细胞系生产生物制品的规程传代细胞系生产生物制品的规程人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点预防用新生物制品临床研究的技术要求预防用新生物制品临床研究的技术要求人用重组人用重组DNA制品质量控制要点制品质量控制要点人的体细胞治疗申报临床试验指导原则人的体细胞治疗申报临床试验指导原则人基因治疗申报临床试验指导原则人基因治疗申报临床试验指导原则药理毒理检查指导原则药理毒理检查指导原则药品生产质量管理办法药品生产质量管理办法药品注册管理办法药品注册管理办法2022年6月3日星期五24生物技术药物的质量控制生物技术药物的质
17、量控制生物技术药物的特点：生物技术药物的特点：1、来源：活的生物体（细菌或细胞）；、来源：活的生物体（细菌或细胞）；2、结构：复杂（包括组成、空间结构）；、结构：复杂（包括组成、空间结构）；3、生产：涉及生物材料和生物学过程（发、生产：涉及生物材料和生物学过程（发 酵、细胞培养，分离纯化等），酵、细胞培养，分离纯化等）， 有其固有的易变性。有其固有的易变性。2022年6月3日星期五25生物技术药物的质量控制生物技术药物的质量控制质量控制包括两个方面：质量控制包括两个方面：1、生产过程中质量控制、生产过程中质量控制GMP（硬件、软件）（硬件、软件）2、最终目标产品的质量控制（方法学研究）、最终目
18、标产品的质量控制（方法学研究）2022年6月3日星期五26质量控制方法学研究具体内容质量控制方法学研究具体内容一、生物学活性测定和比活性一、生物学活性测定和比活性二、蛋白质纯度检查二、蛋白质纯度检查三、蛋白质含量测定三、蛋白质含量测定四、蛋白质药物理化性质的鉴定四、蛋白质药物理化性质的鉴定五、蛋白质的二硫键分析五、蛋白质的二硫键分析六、对糖蛋白的特殊要求六、对糖蛋白的特殊要求七、残余杂质检查七、残余杂质检查八、安全性及其他检测项目八、安全性及其他检测项目九、生物技术药物待测样品保存九、生物技术药物待测样品保存2022年6月3日星期五27一、生物学活性测定和比活性一、生物学活性测定和比活性1 1
19、、意义：、意义：1 1）基因工程产品的化学本质为蛋白质、多肽，）基因工程产品的化学本质为蛋白质、多肽，其活性由产品的氨基酸序列或其空间结构所形成其活性由产品的氨基酸序列或其空间结构所形成 的活性中心所决定的，与其绝对的活性中心所决定的，与其绝对质量质量不一致。不一致。2 2）基因工程产品的生物学活性与药效学基本相）基因工程产品的生物学活性与药效学基本相一致。一致。3 3）利用生物学活性建立的测定效价体系，是给）利用生物学活性建立的测定效价体系，是给药品定量的依据，保证产品药效的重要手段。药品定量的依据，保证产品药效的重要手段。2022年6月3日星期五28效价测定一般原则效价测定一般原则1 1、
20、国际通用方法；、国际通用方法；2 2、测定结果须用国际或国家标准品、测定结果须用国际或国家标准品校校 正，以国际单位表示。正，以国际单位表示。2022年6月3日星期五29生物学活性测定方法分类生物学活性测定方法分类1 1）体外细胞培养测定法）体外细胞培养测定法 a a、促进细胞生长作用（、促进细胞生长作用（G-CSF:NFS-60G-CSF:NFS-60） b b、抑制细胞生长作用、抑制细胞生长作用 (TNF:L929)(TNF:L929) c c、间接保护细胞作用、间接保护细胞作用 (IFN:VISH;VSV)(IFN:VISH;VSV)2 2）离体动物器官测定法）离体动物器官测定法 采用家
21、兔主动脉条测定重组脑利钠肽生采用家兔主动脉条测定重组脑利钠肽生物活性。物活性。3 3）体内测定法）体内测定法4 4）生化酶促反应测定法）生化酶促反应测定法5 5）免疫学活性测定法）免疫学活性测定法2022年6月3日星期五30 利用动物体内某些指标变化，定出利用动物体内某些指标变化，定出产品的单位，如产品的单位，如EPOEPO活性测定，体内注射活性测定，体内注射EPOEPO后，计算小鼠网织红细胞增加的数量后，计算小鼠网织红细胞增加的数量与标准品比较，确定其活性单位。与标准品比较，确定其活性单位。2022年6月3日星期五31生物学活性测定方法选择生物学活性测定方法选择体内测定和体外测定方法体内测定
22、和体外测定方法 a a、体内测定：即整体动物测定，能为较大、体内测定：即整体动物测定，能为较大范围的重组产品的效价提供有用信息，但费时、范围的重组产品的效价提供有用信息，但费时、昂贵、难操作及同时存在伦理问题，大多数情昂贵、难操作及同时存在伦理问题，大多数情况下倾向于选择体外测定方法。况下倾向于选择体外测定方法。 b b、体外测定：可使用分离的器官或组织、体外测定：可使用分离的器官或组织、原代细胞或传代细胞系，目前最常用方法是连原代细胞或传代细胞系，目前最常用方法是连续生长、因子依赖的、克隆化的细胞系的方法，续生长、因子依赖的、克隆化的细胞系的方法，其测定结果比较准确、重现性好、经济、容易其测
23、定结果比较准确、重现性好、经济、容易使用和便于统计分析。使用和便于统计分析。2022年6月3日星期五32生物学活性测定方法选择生物学活性测定方法选择2 2、定量、半定量、定性方法、定量、半定量、定性方法 a a、通过研究首先选择能够定量评价的方、通过研究首先选择能够定量评价的方法，最好的选择是背景较低的反应，并且法，最好的选择是背景较低的反应，并且对相关产品有陡峭的、可重复的剂量对相关产品有陡峭的、可重复的剂量- -反应反应曲线；其次考虑半定量方法（如曲线；其次考虑半定量方法（如NGFNGF），最），最后考虑定性（如后考虑定性（如BMPBMP）方法。）方法。 b b、对生产工艺稳定，生物学活性
24、测定方、对生产工艺稳定，生物学活性测定方法复杂，可采用其他替代方法（如重组人法复杂，可采用其他替代方法（如重组人生长激素用生长激素用HPLCHPLC定量方法代替复杂生物活定量方法代替复杂生物活性测定方法）。性测定方法）。2022年6月3日星期五33第二节 生物制品的质量检定一、生物制品的理化检定(附常规的检定方法)生物制品的检定一般分理化检定、安全检定和效力检定三个方面1、物理性状检定1）外观检定：通过特定的人工光源检测生物制品的外观，其颜色、状态及加入蒸馏水后的澄清度应符合药物的规程要求。（1）透明液制品：不得含有异物、白点、凝块、浑浊或摇不散的沉淀物。2022年6月3日星期五34第二节 生
25、物制品的质量检定一、生物制品的理化检定(附常规的检定方法)1、物理性状检定1）外观检定：（2）悬浊液制品：应为乳白色浑悬液，不得有摇不散的菌块或其他异物。（3）冻干制品：应为淡黄色或白色疏松体，呈海绵状或结晶状，应无融化现象。2022年6月3日星期五35第二节 生物制品的质量检定2）真空度冻干制品进行真空封存，可进一步保证制品的生物活性和稳定性。可用高频火花真空测定器检查其真空程度，凡有真空度者瓶内应出现蓝紫色光辉。3）溶解时间按规程要求，加适量溶剂，检查溶解时间，其溶解速度应在规定时限内。 2022年6月3日星期五36第二节 生物制品的质量检定2、化学检定：除水分检定外，按规定加入一定量无菌
26、注射用水后进行检定1）pH值测定：常用电极法2）水分含量测定：常用卡尔.费休水分测定法，一般水分不能高于3，卡尔.费休法的基本原理是：依据卡尔非休法测定水份含量时，在存在甲醇和碱的情况下，水会按照下列化学反应式与碘和二氧化硫进行化学反应：H2O + I2 + SO2 + CH30H + 3RN RHNSO4CH3 + 2RHNI 方法： 卡尔费休容量法测定样品中的水含量是根据滴定过程中消耗的卡氏试剂的量，计算出样品中的水含量。该方法具有操作简单、速率快、精度高等优点。 2022年6月3日星期五37第二节 生物制品的质量检定3）蛋白质含量测定（1）凯氏定氮法（2）酚试剂法（3）双缩脲法（4）紫外
27、分光光度法（5）考马斯亮蓝法4）防腐剂含量测定（1）气相色谱法（2）液相色谱法（3）薄层层析法2、化学检定2022年6月3日星期五38第二节 生物制品的质量检定2、化学检定5）等电点的测定用等电聚焦电泳法6）分子量的测定a、渗透压法b、超速离心法c、凝胶过滤法d、SDSPAGE法2022年6月3日星期五39第二节 生物制品的质量检定2、化学检定5）等电点的测定用等电聚焦电泳法6）分子量的测定a、渗透压法b、超速离心法c、凝胶过滤法d、SDSPAGE法7)外源性残留DNA含量的检定8）宿主菌残留蛋白含量的测定9）残留抗生素含量的测定2022年6月3日星期五40第二节 生物制品的质量检定2、化学检
28、定10）纯度测定(1)区带电泳a、乙酸纤维膜电泳b、聚丙烯酰胺凝胶电泳c、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（2）免疫电泳a、对流免疫电泳b、单向定量免疫电泳（火箭电泳）c、双向定量免疫电泳（3）凝胶层析2022年6月3日星期五41第二节 生物制品的质量检定二、生物制品的安全检定1、一般安全性检查1）异常毒性试验2）无菌试验3）热原试验2、杀菌、灭活和脱毒情况的检查3、外源性污染检查1）野毒（菌）检查2）支原体检查3）乙肝表面抗原、丙肝抗体和艾滋抗体的检查4）残余细胞DNA检查4、过敏性物质检查2022年6月3日星期五42第二节 生物制品的质量检定三、生物制品的效力检定理想的效力试验应具备的条件1、试验方法具最佳代表性，与人体使用应大体相似2、试验方法不应烦琐3、结果应明确4、试验结果要能与流行病学高枝基本一致5、所用试验动物应标准化2022年6月3日星期五43第三节 基因工程生物制品的质量检测与控制一、基因工程生物制品的特点二、基因工程生物制品的质量要求三、基因工程生物制品的质控要点四、基因工程制品的质量检测2022年6月3日星期五44
