1、实验二实验二 培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌一、目的要求一、目的要求了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。学习并掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作技术。二、实验原理二、实验原理由人工方法配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质称为培养基。主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏或积累代谢产物等方面。不同微生物的生长繁殖需要不同的环境、营养和酸碱条件，因此需要配制不同的培养基。培养基的种类培养基的种类从培养基的组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：一部分纯化学物质和一部分天然物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配
2、制而成。从培养基的物理状态可分为: 1.液体培养基：不加凝固剂。 2.固体培养基：加入2%左右的凝固剂。 3.半固体培养基：加入0.20.5%凝固剂。从培养基的用途可分为: 1.选择培养基：加入目的菌特别需要的或抑制非目的菌生长的物质。 2.鉴别培养基：加入能够和目的菌的代谢产物发生可见反应的物质。高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌法是微生物学实验、发酵工业、医疗保健以及食品检测中最常用的一种灭菌方法。高压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的高压蒸汽灭菌锅中进行的，通过加热，产生大量蒸汽使其中压力升高，从而使沸点增高，得到高于100的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。当蒸汽压
3、达到1.055kg/cm2时，锅内温度可达到121，一般维持20min,即可杀死一切微生物的营养体或芽孢，而达到灭菌目的。注意：高压蒸汽灭菌开始之前，要将锅内的冷空气排尽。三、实验材料各种药品：牛肉膏、蛋白胨、琼脂等；称量工具：托盘天平、量筒、称量纸、角匙；分装工具：铁架台、漏斗、pH试纸；包扎工具：牛皮纸、扎绳、胶塞。四、实验步骤1、细菌培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）：600 ml/组 配方：NaCL 0.5、蛋白胨 1、牛肉膏 0.3，琼脂2.0， pH 7.5 (使用1N NaOH和 1N HCL调节)。 配制: 计算-称量及溶化-定容-调pH-加琼脂 分装： 1)分别称取2%琼脂加入2个
4、三角瓶，后各分装入150ml培养基，加 棉塞，包扎。 2）将剩余的300ml培养基中加入2%琼脂，加热溶化，分装大试管（装量为试管长度的1/41/5），加塞，包扎。（一）培养基的配制与分装2、霉菌培养基（察氏培养基）300ml/组 配方： K2HPO4 0.1% MgSO4.7H2O 0.05% KCL 0.05% FeSO4 0.001% （加2滴即可） NaNO3 0.2% 蔗糖 3% 琼脂2.0 pH自然 配制： 计算-称量及溶化-定容-加琼脂 分装：各称取2%琼脂加入2个三角瓶中，再将培养基平均分装在2个三角瓶中，加塞，包扎。 取7支小试管各加生理盐水4.5ml,包扎灭菌。 取1只三角
5、瓶加90ml蒸馏水及1015粒玻璃球，包扎灭菌。（二）无菌水的制备（二）无菌水的制备1.打开锅盖，将包扎好的物品放入灭菌器内，盖紧锅盖。2.接通电源，打开加水阀，加水至高水位，调节至所需温度（1210C）和时间（20min ），进行加热。3.排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大量蒸汽3-5min后关闭排气阀；4.升温至 1210C后，自动控制并保持恒温 20min 。（对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。）5.降温：灭菌时间到后，自动切断电源，开始降温，6.取物：待压力降至零时，打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。（三）高压蒸汽灭菌（三）高压蒸汽灭菌 将5支三角瓶放回仪器橱中，小试管放到小烧杯中，不能放倒。 将灭好菌的试管，趁热摆成斜面，备用。（四）制作试管斜面及其他善后工作1、请通过查阅资料，写出高氏1号培养基的配方，并分析其中的各种营养要素。2、高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内的冷空气排尽？五、结果与思考题
