1、病原生物学实验主讲人主讲人: :蒋培余蒋培余一、实验目的一、实验目的| 1 1学习、掌握有关病原生物学的基本操作技术，如普通光学习、掌握有关病原生物学的基本操作技术，如普通光学显微镜油镜的使用和保养、涂片染色、分离接种与细菌培学显微镜油镜的使用和保养、涂片染色、分离接种与细菌培养、病原菌分离鉴定和免疫学诊断等基本操作技术，树立无养、病原菌分离鉴定和免疫学诊断等基本操作技术，树立无菌观念；菌观念；|2 2通过寄生虫标本的观察和基本实验技术操作，掌握常见人通过寄生虫标本的观察和基本实验技术操作，掌握常见人体寄生虫的辨认，掌握具有诊断价值的寄生虫形态特征和常体寄生虫的辨认，掌握具有诊断价值的寄生虫形
2、态特征和常见寄生虫的病原学检查方法；见寄生虫的病原学检查方法；|3 3通过综合性、设计性实验项目，树立实事求是的科学态度通过综合性、设计性实验项目，树立实事求是的科学态度和培养独立分析问题与解决问题的能力，为开展有关疾病的和培养独立分析问题与解决问题的能力，为开展有关疾病的诊断与防治以及从事病原生物学的科学研究工作所必需的实诊断与防治以及从事病原生物学的科学研究工作所必需的实验方法与技术打下一定的基础。验方法与技术打下一定的基础。二、实验要求二、实验要求| 1 1每次实验前必须做好预习，明确实验目的、原每次实验前必须做好预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的注意事项等，避免和减少发生理、方法
3、及操作中的注意事项等，避免和减少发生错误。错误。 |2 2实验过程中必须持严肃认真的态度。实验过程中必须持严肃认真的态度。 |3 3对实验结果必须进行仔细地观察和认真地记录，对实验结果必须进行仔细地观察和认真地记录，然后进行科学分析，得出恰当结论。然后进行科学分析，得出恰当结论。 |4 4独立认真完成实验报告，书写实验报告格式要规独立认真完成实验报告，书写实验报告格式要规范、字迹要清楚，语言简练，表格清晰，画图应力范、字迹要清楚，语言简练，表格清晰，画图应力求反映实际标本的原状。求反映实际标本的原状。 |5 5切实遵守实验室规则。切实遵守实验室规则。1 1进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下
4、反进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下反折，工作服要经常清洗消毒。折，工作服要经常清洗消毒。2 2书包、衣物等物品请放在实验室的贮物柜中，书包、衣物等物品请放在实验室的贮物柜中，随身只带必要的实验指导、笔记本和文具，进入实随身只带必要的实验指导、笔记本和文具，进入实验室后放入实验台的抽屉内。验室后放入实验台的抽屉内。 3 3实验室内要保持肃静、守秩序，不得高声谈笑实验室内要保持肃静、守秩序，不得高声谈笑和随处走动，玩弄手机等。和随处走动，玩弄手机等。 4 4实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔和标签等。和标签等。 5 5如遇有盛检验材料的器皿破损或
5、污染其它物品如遇有盛检验材料的器皿破损或污染其它物品时，应即用时，应即用3%3%的来苏儿消毒；皮肤破伤时须向指导的来苏儿消毒；皮肤破伤时须向指导教师报告，采取适当的消毒及防止感染措施。教师报告，采取适当的消毒及防止感染措施。 三、实三、实 验验 室室 规规 则则6 6用过的有菌器材或培养物等，应放于指定的地用过的有菌器材或培养物等，应放于指定的地点，不得随意抛置。点，不得随意抛置。 7 7注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏器材注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏器材时，应立即报告指导教师，按有关规定处理。时，应立即报告指导教师，按有关规定处理。 8 8易燃物品（酒精、二甲苯等）不准接近火源。
6、易燃物品（酒精、二甲苯等）不准接近火源。一旦起火，应迅速用沾水的布类和沙土覆盖扑火。一旦起火，应迅速用沾水的布类和沙土覆盖扑火。 9 9实验结束后，将实验台整理好，值日同学打扫实验结束后，将实验台整理好，值日同学打扫室内卫生，并检查水、电等开关是否关好，防止室内卫生，并检查水、电等开关是否关好，防止发生安全事故。发生安全事故。 1010每次实验后均要用肥皂洗手，必要时用消毒每次实验后均要用肥皂洗手，必要时用消毒液泡手。液泡手。细菌的形态检查（细菌的形态检查（1）1.1.掌握显微镜油镜的使用和保养方法；掌握显微镜油镜的使用和保养方法；2.2.学会观察细菌的基本形态和一些特殊结构；学会观察细菌的基
7、本形态和一些特殊结构；3.3.掌握细菌涂片制作、革兰染色操作方法及意义；掌握细菌涂片制作、革兰染色操作方法及意义； （一）显微镜油镜的使用和保养（一）显微镜油镜的使用和保养1.显微镜基本知识显微镜的构造显微镜的构造 （1 1）光学部分光学部分 （2 2）机械部分机械部分|显微镜的放大倍数和分辨率显微镜的放大倍数和分辨率 1.1.放大倍数放大倍数= =接物镜放大倍数接物镜放大倍数接目镜放接目镜放大倍数大倍数 2. 2. 显微镜的分辨力：显微镜的分辨力：是表示显微镜辨析是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：用公式表示为： R=0.61/N
8、.A R=0.61/N.A 式中式中R R：物镜分辨出物体两点间的最短距：物镜分辨出物体两点间的最短距离。离。 ：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均0.550.55 m) m) N.A =n N.A =nsin(/2 )sin(/2 )为镜口率为镜口率|n: n: 物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检标本间介质的折射率。 | ：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。|目前实用范围内物镜的最大镜口率为目前实用范围内物镜的最大镜口率为1.4,1.4, R=0.61 R=0.61* *0.55/1.4=0.250.55/1.4=0.25|而人眼的分辨率为而人眼的分辨率为0.25mm,0.
9、25mm,所以一个大小所以一个大小为为0.25 0.25 m m的微粒需经显微镜放大的微粒需经显微镜放大10001000倍倍便可以观察。便可以观察。2.2.油镜的使用和保养油镜的使用和保养（1 1）油镜头的识别）油镜头的识别 油镜头的下缘，一般刻有一白色圈，标有油油镜头的下缘，一般刻有一白色圈，标有油 9090、100100、oeloel、oiloil等字样。等字样。 显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油镜头的放大倍数最大。镜头的放大倍数最大。 （2 2）油镜的原理：）油镜的原理：（4）油镜的保养方法）油镜的保养方法葡萄球菌葡萄球
10、菌大肠杆菌大肠杆菌霍乱弧菌霍乱弧菌（二）细菌的基本形态与特殊结构观察（二）细菌的基本形态与特殊结构观察1 1细菌的基本形态观察细菌的基本形态观察 细菌的基本形态可分为球菌、细菌的基本形态可分为球菌、杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。 变形杆菌（鞭毛）肺炎链球菌（荚膜）破伤风杆菌（芽胞）2.细菌特殊结构的观察细菌特殊结构的观察细菌的形态学检查方法细菌的形态学检查方法染色标本检查法染色标本检查法观察细菌的形态、大小和排列，还能鉴别细菌。观察细菌的形态、大小和排列，还能鉴别细菌。（三）革兰染色法（三）革兰染色法1. 革兰染色法的原理革兰染色法的原理2.实验材料与方法实验材料
11、与方法染色标本检查的基本程序染色标本检查的基本程序革兰染色法（革兰染色法（Gram染色）染色） Procedures of Gram Staining3.革兰染色结果革兰染色结果4.革兰染色意义革兰染色意义影响革兰染色的因素影响革兰染色的因素实验报告：实验报告：1、显微镜油镜的使用和保养方法以及使、显微镜油镜的使用和保养方法以及使用过程中的注意事项。用过程中的注意事项。2、请画图示意细菌的基本形态和特、请画图示意细菌的基本形态和特 殊殊结构。（标明：细菌名称、染色法、放结构。（标明：细菌名称、染色法、放 大倍数）大倍数）实实验验报报告告基基本本格格式式湖州师范学院湖州师范学院 病原生物学与免疫学实验病原生物学与免疫学实验 实验报告实验报告实验项目名称：实验项目名称：* * * * * * * * * * * 一、实验目的要求：一、实验目的要求： 二、实验原理：二、实验原理： 三、实验材料：三、实验材料： 四、实验方法和操作步骤：四、实验方法和操作步骤： 五、实验结果：五、实验结果： 六、实验结果分析和总结：六、实验结果分析和总结：
