1、绪论绪论n生物技术也叫生物工程生物技术也叫生物工程细胞工程发酵工程蛋白质工程酶工程基因工程细胞工程发酵工程蛋白质工程酶工程基因工程、细胞工程、细胞工程植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程植物组织培养植物体细胞杂交植物组织培养植物体细胞杂交细胞培养细胞融合胚胎移植细胞培养细胞融合胚胎移植核移植单克隆抗体的产生核移植单克隆抗体的产生、发酵工程、发酵工程发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。发
2、酵工程的内容包括菌种的选育、培养产过程的一种新技术。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。纯等方面。、蛋白质工程、蛋白质工程改变个别氨基酸改变蛋白质的性质改变个别氨基酸改变蛋白质的性质、酶工程、酶工程通过基因工程的手段改变酶或蛋白质的折叠方式、空间结通过基因工程的手段改变酶或蛋白质的折叠方式、空间结构、催化火星和稳定性构、催化火星和稳定性微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：真菌真菌原生动物原生动物特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单, ,个体多数十分微小个体多数十分微小. .通
3、通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构的甚至没有细胞结构. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基础知识微生物基础知识 细菌细胞由外向里细菌细胞由外向里依次有依次有鞭毛鞭毛、菌毛菌毛、荚膜荚膜、细胞壁细胞壁、细胞膜、细胞质细胞膜、细胞质，细胞质中又有液泡细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核、储存性颗粒、核质等质等。细菌的构造细菌的构造* *细胞壁细胞壁结构特点：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性n细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？n 固定细胞外形；固定细胞外形；保护细胞免受外力的损伤保护细胞免受
4、外力的损伤阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞 使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做形的休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候
5、，芽风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌孢又可以萌发，形成一个细菌. .菌落：菌落：n单个单个或或少数细菌少数细菌在固体培养基上大量繁殖在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做形态结构的子细胞群体，叫做菌落菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。资料资料:大肠杆菌（大肠杆菌（Escherichia coliEscherichia coli，E.coliE.coli） 革兰氏阴性革兰氏阴性短杆菌，大小短杆菌，大小0.50.51 13 3微米。周身微米。周身鞭毛
6、鞭毛，能运动，无，能运动，无芽孢芽孢。能发酵多种糖类产酸、。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌栖居菌，婴儿出，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素素B B和和K K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。
7、在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的起炎症。在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/31/3。兼性厌氧菌兼性厌氧菌。实验一实验一: :大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离一、实验目的一、实验目的: :n1.进行大肠杆菌的进行大肠杆菌的扩增扩增, ,利用利用液体培养基液体培养基进行细进行细菌培养的操作。菌培养的操作。n2. 2. 进行大肠杆菌的进行大肠杆菌的分离分离，用固体平面培养基进，用固体平面培养基进行细菌的行细菌的划线培养划线培养。n3.3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理二、实验原理二、实验原理: 大肠杆菌的新陈代谢是大肠杆菌的新陈代谢是异养兼性厌
8、氧型异养兼性厌氧型，在生态系统的身份（消费者、分解者，在生态系统的身份（消费者、分解者），因此可以用），因此可以用LBLB液体培养基液体培养基（通用的（通用的细菌培养基或普通的细菌培养基）细菌培养基或普通的细菌培养基）扩大扩大培养培养。培养后再在。培养后再在LBLB固体平面培养基固体平面培养基上上划线进行分离划线进行分离，分离后，培养基上会形，分离后，培养基上会形成一个个单独的成一个个单独的菌落菌落，便于观察鉴定。，便于观察鉴定。这种方法有利于这种方法有利于消除污染杂菌消除污染杂菌，也是用，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。实验步骤：实验步骤：配置培养
9、基配置培养基培养基灭菌培养基灭菌倒平板倒平板接种接种划线分离划线分离培养观察培养观察无菌技术无菌技术固体培养基固体培养基 （加琼脂）（加琼脂）用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等测定等 液体培养基（不加琼脂）：液体培养基（不加琼脂）：增菌培养、鉴别性培养增菌培养、鉴别性培养表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长3、半固体培养基 观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。、选择培养基、选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: : 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真
10、菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: : 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : 分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: : 分离自养型微生物分离自养型微生物 n在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。、鉴别培养基、鉴别培养基伊红美蓝琼脂伊红美蓝琼脂培养基是一种鉴别培养基。常用于检培养基是一种鉴别培养基。常用于检查乳制品和饮用水中是否含有致病性的查乳制品和饮用水中是否含有致病性的肠道细菌肠
11、道细菌。培。培养基中的伊红为酸性染料，美蓝则为碱性染料。当养基中的伊红为酸性染料，美蓝则为碱性染料。当大大肠杆菌肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊红染色，再与美蓝结合生成红染色，再与美蓝结合生成紫黑色化合物紫黑色化合物。在此培养。在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多，带负电荷，与美蓝结合，被糖的细菌产碱性物较多，带负电荷，与美蓝结合，被染成蓝色菌落。染成蓝色菌落。 三、
12、实验操作要求：三、实验操作要求：1.1.培养基的配比与制作培养基的配比与制作 原理原理: :培养基是微生物的生存环境和营养物质培养基是微生物的生存环境和营养物质, ,必须无必须无菌。俗话说，菌。俗话说，“细菌喜荤细菌喜荤，霉菌喜素霉菌喜素”细菌细菌培养基通常要用蛋白胨和酵母提取物配制培养基通常要用蛋白胨和酵母提取物配制, ,加入加入一定的氯化钠（一定的氯化钠（维持一定的渗透压维持一定的渗透压）。）。霉菌霉菌培养一般用无机盐配置或添加蔗糖的培养一般用无机盐配置或添加蔗糖的豆芽汁豆芽汁 细菌细菌通常要求在通常要求在中性偏碱中性偏碱的环境中生长的环境中生长霉菌霉菌要求在要求在中偏酸中偏酸的环境中生长
13、的环境中生长所以在配制培养基时需调节培养基的酸碱度。所以在配制培养基时需调节培养基的酸碱度。（一）培养基的营养组成（一）培养基的营养组成不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和和氮源氮源、 无机盐无机盐、等等营养物质，另外还需要营养物质，另外还需要满足微生物生长对满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质、特殊营养物质例如例如: :生长因生长因子子( (即细菌生长必需，而自身不即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物能合成的化合物, ,如维生素、某些氨基酸、嘌如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶呤、嘧啶) )以及以及氧气氧气、二氧化碳、渗透压二氧化碳、渗透压等的等的要求。要
14、求。营养类型源源源源生长因子生长因子自养微生物异养微生物自养微生物和异养微生物的营养比较自养微生物和异养微生物的营养比较CO2 CO2 NaHCO3NaHCO3NH3NH3、氨、氨盐、硝酸盐、硝酸盐等盐等一般不需一般不需要要糖类、脂糖类、脂肪酸等肪酸等氨盐、硝氨盐、硝酸盐、蛋酸盐、蛋白质等白质等有些微生有些微生物需要物需要1 1计算、称量计算、称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上或壁上，否者容易发生口或瓶口上或壁上，否者容易发生污染污
15、染。分装。分装三角烧瓶和试管中必须用三角烧瓶和试管中必须用三角漏斗，分装三角漏斗，分装的量的量以不超过三角烧瓶容积的以不超过三角烧瓶容积的一半一半为宜。固体培养为宜。固体培养基约为基约为试管高度的试管高度的l/5,l/5,灭菌后制成斜面灭菌后制成斜面. .一、培养基配置步骤一、培养基配置步骤n6.6.加棉塞加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花试管口和三角瓶口塞上用普通棉花( (非脱脂棉非脱脂棉) )制作的棉塞制作的棉塞. .棉塞塞入试管或三角棉塞塞入试管或三角瓶口后周围瓶口后周围没有皱褶和缝隙没有皱褶和缝隙，容易拔出容易拔出，手，手提棉塞不能落下提棉塞不能落下. .最好用最好用封口膜封口膜取
16、代棉塞取代棉塞7 7灭菌灭菌: :高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 培养基灭菌：培养基灭菌：普通培养基灭菌：普通培养基灭菌：将将5050mlml培养基培养基用用三角漏斗三角漏斗移至三角锥移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅高压蒸气灭菌锅，在压力为在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。含葡萄糖的培养基：含葡萄糖的培养基：500g/cm2 90 500g/cm2 90 ，灭菌，灭菌3030分钟。分钟。防止其发生碳化。防止其发生碳化。如含尿素的培养基：如含尿素的培养基：用灭过菌的用灭过菌
17、的G6G6玻璃砂漏斗过滤玻璃砂漏斗过滤各种器皿的灭菌：各种器皿的灭菌：高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌各种器皿灭菌前均需要用牛皮纸各种器皿灭菌前均需要用牛皮纸 或报纸包好。或报纸包好。如果是试管或三角瓶？如果是试管或三角瓶？消毒和灭菌的区别消毒和灭菌的区别条件条件结果结果常用方法常用方法灭灭菌菌消消毒毒杀死所有体内外所有的杀死所有体内外所有的微生物包括芽孢和孢子微生物包括芽孢和孢子仅杀死物体表面或内部仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微一部分对人体有害的微生物生物强烈的强烈的理化因理化因素素温和的温和的物理或物理或化学方化学方法法灼烧灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭高压蒸汽灭紫外线或
18、化紫外线或化学试剂消毒学试剂消毒法、煮沸消法、煮沸消毒法毒法8 8倒平板倒平板: : 待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近倒左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）平板。（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平板，无后观察平板，无杂菌污染才可用来接种杂菌污染才可用来接种. .注意：注意：、平板冷凝后将平板倒置？防止？、平板冷凝后将平板倒置？防止？、倒平板过程中，不能将培养基贱在皿盖和皿底之间、倒平板过程中，不能将培养基贱在皿盖和皿底之间的部位，防止空气中的微生物在这些位置滋生的部位，防止空气中的微生物在这些位置滋生、无菌检查：、无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌
19、的培养基放入3737的温室中培养的温室中培养24244848小时，小时，以检查灭菌是否彻底。以检查灭菌是否彻底。无菌技术？无菌技术？ 1. 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？基的温度？ 答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防
20、止瓶口的微答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。生物污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防
21、止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。9 9、分离和纯化大肠杆菌、分离和纯化大肠杆菌平板划线分离和涂布分离法平板划线分离和涂布分离法 平板划线法平板划线法: :通过通过接种环接种环在琼脂在琼脂固体培养基固体培养基表表面连续画线的操作面连续画线的操作, ,将聚集的菌钟逐步稀释分散将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面到培养基的表面. . 在数次画线后在数次画线后, ,可以分离到由一个细
22、胞繁殖而可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体来的肉眼可见的子细胞群体, ,这就是菌落这就是菌落. .微生物的接种技术微生物的接种技术平板划线的操作平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。接种操作示意图接种操作示意图n灼烧接种后要冷却后才能伸入菌液、以免温灼烧接种后要冷却后才能伸入菌液、以免温度太高杀死菌种。度太高杀死菌种。
23、n划线最后一区域不能与第一区域相连。划线最后一区域不能与第一区域相连。n划线力度要合适，防止用力过大刺破培养基划线力度要合适，防止用力过大刺破培养基。 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；划线结接种环上可能存在的微生物污染培养物；划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的
24、菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。种，避免细菌污染环境和感染操作者。二二. .无菌技术无菌技术( (灭菌操作灭菌操作):):在培养微生物时必须进行无菌操作。在培养微生物时必须进行无菌操作。（1 1）各种器皿必须是无菌的，如各种大小的培养）各种器皿必须是无菌的，如各种大小的培养皿、试管等等通常用皿、试管等等通常用高压蒸汽灭菌法灭菌高压蒸汽灭菌法灭菌（自主自主学习：学习：P P20-2120-21）。）。（2 2）各种培养基也必须是无菌的。如加入培养基）各种培养基也必须是无菌的。如加入培养基的三角瓶、试管也要在的三角瓶、试管也要在1211210 0 C C 下灭菌下灭菌15min15min（自自
25、主学习：主学习：P P2121 ）。）。（3 3）在操作过程中必须是无菌的（菌转移操作必）在操作过程中必须是无菌的（菌转移操作必须是无菌的）。在将培养基加入到三角瓶、试管须是无菌的）。在将培养基加入到三角瓶、试管和培养皿中时，三角瓶口、试管口、和培养皿壁和培养皿中时，三角瓶口、试管口、和培养皿壁上不能沾有培养基，否则容易发生污染（上不能沾有培养基，否则容易发生污染（自主学自主学习：习：P P2121 ） 涂布平板的所有操作都应在火焰附近涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步应如何进行无
26、步应如何进行无菌操作？菌操作？ 应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。在酒精灯火焰周围等等。本课题知识小结本课题知识小结: :利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。但现有利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。但现有野生菌株对淀粉的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得野生菌株对淀粉的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。高效菌株。（1 1）实验步骤：）实验步骤：配置配置_（
27、固体、半固体、液体）培养基，该培养基的碳源（固体、半固体、液体）培养基，该培养基的碳源应为应为_。将将_接入已灭菌的培养基平板上。接入已灭菌的培养基平板上。立即用适当剂量的紫外线照射，其目的立即用适当剂量的紫外线照射，其目的_。菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小。周围出现范围的大小。周围出现_现象的菌落即为初选菌落，现象的菌落即为初选菌落，经分离、纯化后即可达到实验目的。经分离、纯化后即可达到实验目的。答案：（答案：（1 1）固体、玉米淀粉；野生菌株；（诱发野）固体、玉米淀粉；野生菌株；（诱发野生菌株发生基
28、因突变）对野生菌株进行诱变；（透明圈）生菌株发生基因突变）对野生菌株进行诱变；（透明圈）浅色范围大；（浅色范围大；（2 2）编码区、非编码区）编码区、非编码区某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。验相关的问题。（1 1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_和和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是。除此之外，培养基还必须含有的
29、基本成分是_和和_。（2 2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。（3 3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于的平板置于_中培养，培养的温度设定在中培养，培养的温度设定在3737。要使该实验所。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_作为对照进行实作为对照进行实验。验。（4 4）培养）培养2020小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有说明湖水样品中有_种细菌
30、。一般说来，菌落总数越多，湖水种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越遭受细菌污染的程度越_。（5 5）如果提高培养基中）如果提高培养基中NaClNaCl的浓度，可以用于筛选耐的浓度，可以用于筛选耐_细菌，细菌，这种培养基被称为这种培养基被称为_。1 1）氮源（碳源不作要求）氮源（碳源不作要求） 碳源、无机盐、水碳源、无机盐、水 （2 2）高压蒸）高压蒸汽灭菌汽灭菌3 3）恒温培养箱）恒温培养箱 无菌水无菌水 （4 4）多；高）多；高 （5 5）盐（或）盐（或NaClNaCl），选择性培养基），选择性培养基【典例解析典例解析】 例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生
31、物营养物质的叙述中，正确的是A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于针对微生物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如同时是氮源，如NH4HCO3NH4
32、HCO3；有的碳源同时是能源，如葡；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作为自养，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。对则只能提供无机盐。对于于D D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3NH3可可为硝
33、化细菌提供能量和氮源。为硝化细菌提供能量和氮源。答案：答案：D例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；
34、所以是正确的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。全部微生物。C C是正确的，因为与发酵有关的所有设备是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。所接菌种也杀死。编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2
35、 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物右表是某微生物培养基成分，请据此回答：培养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培）右表培养基可培养的微生物类型养的微生物类型是是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 . .自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 （3 3）若除去成分，加入（）若除去成分，加入（CH2O
36、CH2O），该培），该培养基可用于培养养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是分装前，要进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则）右表中各成分重量确定的原则是是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是的成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂） 下表是甲同学为培养植物离体组织、动物细胞和细菌而分下表是甲同学为培养植物离
37、体组织、动物细胞和细菌而分别提供的三组培养基：别提供的三组培养基：1 1、其中、其中2 2组培养基有缺陷，请做修改：（正确的不修改，组培养基有缺陷，请做修改：（正确的不修改，空格内填正确）空格内填正确）用用a a组培养基培养植物离体组织，必需添加有关组培养基培养植物离体组织，必需添加有关 用用b b组培养基培养动物细胞，不要添加组培养基培养动物细胞，不要添加 ；用用c c组培养基检验硬币上是否有细菌，必需添加组培养基检验硬币上是否有细菌，必需添加 。2 2、如果在平板培养基上获得了一个单菌落，想要扩大培养、如果在平板培养基上获得了一个单菌落，想要扩大培养这个菌种，一般可以在这个菌种，一般可以在
38、C C组培养基上做什么调整？组培养基上做什么调整？ n3、下面有关细菌A的四项实验，分析并回答相关问题：n 实验1：将细菌A接种于基本培养基（能满足野生型菌株生长需要的培养基）上，结果出现菌落。n 实验2：用一定剂量的紫外线处理细菌A，产生突变种a1，将a1接种于基本培养后，不出现菌落；但在培养基内添加营养物质甲后，就出现a1菌落。n 实验3：用另一剂量的紫外线处理细菌A，得突变种a2，将a2接种于基本培养后，也不出现菌落；但在培养基因添加营养物质乙后，就出现a2菌落。n 实验4：将a1和a2一起接种于基本培养基上，数日后出现a1、a2菌落。n（1）配制好的基本培养基需先调节 ，再经 处理后方能进行接种。n（2）有人推测实验4中出现a1菌落的原因可能是细菌a2能够合成营养物质甲并释放到细胞n外。为求证假设设计以下实验，请补充完整：n 步骤一：将细菌a2接种于 上，经培养后出现a2菌落。n 步骤二：实验组：将细菌a1接种于 上，n 对照组：将细菌a1接种于 上。n 步骤三：在适宜且相同的条件下培养一段时间后，观察两组菌落出现的情况。n 预期结果：若观察到的现象为 ，则假设成立。
