1、中药质量控制方法概况及发展趋势 甘肃省药品检验所杨 锡一、中药质量控制方法的发展历史一、中药质量控制方法的发展历史1、3、5 5、7 7、现代分析方法在各国药典最初应用情况、现代分析方法在各国药典最初应用情况 方法 中国 美国 日本 英国 UV 1953 1947 1953 TLC 1977 1965 1971 1968 GC 1985 1965 1971 1973 HPLC 1985 1975 1981 1980原子吸收 1985 1970 1976 1980荧光光度 1985 1970 1986 1980 MS 2005 1990 1991 20008 8、现代分析方法在中国药典中药质量控
2、、现代分析方法在中国药典中药质量控制最初应用情况制最初应用情况 UV法 TLC法 作为定性方法在中国药典1985版开始应用。TLCS法作为定量方法在中国药典1985版收载的“六味地黄丸”中应用。 HPLC 2005版药典一部收载品种1146个，其中建立了含量测定的741个，采用液相色谱法的518个，占69.9%。2010版药典应用比例将继续提高。 二、中药质量控制的主要内容二、中药质量控制的主要内容1 1、感官指标、感官指标性状性状原植物、药材原植物、药材2 2、定性指标、定性指标鉴别鉴别 显微鉴别显微鉴别2 2、定性指标、定性指标鉴别鉴别化学反应鉴别化学反应鉴别2 2、定性指标、定性指标鉴别
3、鉴别光谱鉴别光谱鉴别2 2、定性指标、定性指标鉴别鉴别色谱鉴别色谱鉴别1：Coptis chinensis Franch（味连）（味连）2:Coptis teeta Wall （云连）（云连）3:Coptis deltoidea（雅连）（雅连）4:Berberine hydrochloride2 2、定性指标、定性指标鉴别鉴别色谱鉴别色谱鉴别min01020304050mAU -75-50-250255075100125min01020304050mAU -75-50-250255075100125112 2、定性指标、定性指标鉴别鉴别色谱鉴别色谱鉴别min0510152025pA501001
4、50200250300350 FID1 B, (EZ08022508022603.D) 4.659 5.666 6.013 6.797 8.022 8.288 9.547 10.740 11.495 11.725 14.038 14.915 16.936 17.981 19.398 19.911 20.865 23.2182 2、定性指标、定性指标鉴别鉴别色谱色谱- -质谱联用质谱联用3 3、与质量有关的控制指标、与质量有关的控制指标检查检查杂质检查杂质检查 水分水分 灰分灰分浸出物浸出物4 4、与制剂质量有关的与制剂质量有关的控制指标控制指标检查检查 丸剂：溶散时限；丸剂：溶散时限； 颗粒剂
5、：溶化性、粒度；颗粒剂：溶化性、粒度； 贴膏剂：耐热性、赋形性、含膏量、黏附性；贴膏剂：耐热性、赋形性、含膏量、黏附性； 分散片：分散均匀性、溶出度；分散片：分散均匀性、溶出度； ： 5 5、与安全性相关的控制指标与安全性相关的控制指标检查检查 有机溶剂残留有机溶剂残留 毒性成分检查毒性成分检查 过敏试验过敏试验 刺激试验刺激试验 杂质检查杂质检查 重金属、砷盐重金属、砷盐 农药残留农药残留 微生物污染微生物污染 非法添加非法添加 妇科制剂的妇科制剂的pH pH 检查检查毒性成分检查毒性成分检查马兜铃酸、银杏酸、乌头碱、吗啡、东莨菪碱、秋马兜铃酸、银杏酸、乌头碱、吗啡、东莨菪碱、秋水仙碱、雷公
6、藤甲素、华蟾酥毒基及脂蟾毒配基水仙碱、雷公藤甲素、华蟾酥毒基及脂蟾毒配基、士的宁、朱砂、雄黄。士的宁、朱砂、雄黄。 min0510152025mAU 00.20.40.60.81 VWD1 A, Wavelength=400 nm (Z:DATAGEN_037GEN_0011.D)酸马兜铃酸 6 6、含量测定、含量测定 重量法（地奥心血康）重量法（地奥心血康） 容量法容量法（矿物药、总糖、有机酸、总生物碱等）（矿物药、总糖、有机酸、总生物碱等） 光谱法（比色法、紫外法）光谱法（比色法、紫外法） 色谱法（色谱法（HPLC HPLC 、GC)GC)二、中药质量控制的现状二、中药质量控制的现状1.1
7、.成绩成绩 二、中药质量控制的现状二、中药质量控制的现状 2.问题问题 参照化学药模式，指标性成分定性定量测定参照化学药模式，指标性成分定性定量测定 化学药： 逻辑推理分析法还原论 传统中药： 取象类比归纳法整体论 “ 难关药效，量而不准，难控难评” “ 以点代面，以局部控制代替整体控制” “ ” 二、中药质量控制的现状二、中药质量控制的现状 3.思考思考 （七个重要）（七个重要） 中药材、饮片控制比成品控制重要中药材、饮片控制比成品控制重要 “药材好，药才好药材好，药才好” 生产过程控制比生产结果控制重要生产过程控制比生产结果控制重要 “做药就是做良心做药就是做良心” 二、中药质量控制的现状
8、二、中药质量控制的现状 3. 3.思考思考 定性控制比定量控制重要定性控制比定量控制重要 整体控制比局部控制重要整体控制比局部控制重要 二、中药质量控制的现状二、中药质量控制的现状 3.3.思考思考 安全性控制比有效性控制重要安全性控制比有效性控制重要 评价控制方法比建立控制方法重要评价控制方法比建立控制方法重要 继承比发扬重要继承比发扬重要 “老祖宗认可，老中医认可，老百姓认可 ” 二、中药质量控制的现状二、中药质量控制的现状 4. 4.对策对策 （怎么办？）（怎么办？） 中药的特点中药的特点 原药材来源多样性原药材来源多样性 药材生长环境多样性药材生长环境多样性 化学成分多样性化学成分多样
9、性 加工炮制多样性加工炮制多样性 复方配伍多样性复方配伍多样性 生产工艺多样性生产工艺多样性 在体内吸收、代谢多样性在体内吸收、代谢多样性 功效多样性功效多样性 中药的复杂性中药的复杂性复杂系统复杂系统 世界药物质控模式和方法发展历程三、中药质量控制发展趋势 1.国家科技重大专项“十一五”计划项目 中药标准研究平台 中药材、饮片、提取物、中成药中药材、饮片、提取物、中成药质量标准研究平台质量标准研究平台中药质量标准研究平台中药质量标准研究平台种种子子种种苗苗系系统统评评价价方方 法法 标标准准物物质质生生产产过过程程控控制制有有害害残残留留物物 中药材、饮片、提取物、中药材、饮片、提取物、中成
10、药质量标准研究平台中成药质量标准研究平台方法、技术研究规范方法、技术研究规范与指导原则、技术要求与指导原则、技术要求标准制定与标准制定与标准化示范研究标准化示范研究信息系统信息系统样品与前处理鉴别检查含量测定检测SOP标准制定技术要求方法应用指导原则饮片提取物中药材成方制剂标准信息国际互认安全、有效、稳定安全、有效、稳定、可控可控中药材质量控制中药材质量控制中药材中药材系统化学成分研究阐明其化学成分生物活性筛选或文献调研究确定有效成分或指标性成分化学对照品的制备与对照品的质量标准研究化学对照品以对照药材、对照提取物或对照品作对照，进行TLC鉴别方法研究浸 出 物 测定 方 法 研究多 成 分
11、含量 测 定 研究色谱、色谱-质谱联用指纹图谱研究建立专属性的TLC鉴别建立浸出物标准建立多成分含量测定标准建立指纹图谱检测标准水分、灰分、重金属、农残、有毒有害物质检查建立水分、杂质和有毒有害物质检查性状、组织、粉末鉴别建立性状、组织、粉末鉴别起草药材质量标准药品检验所复核国家药品标准国家药品标准中药饮片质量控制中药饮片质量控制中药饮片中药饮片饮片性状鉴别有效成份检查中药饮片质量标准中药饮片质量标准建立水分、灰分、浸出物、杂质、重金属、农残、有毒有害物质标准建立饮片外观、质地、气味标准建立在组织、粉末鉴别建立指纹图谱、含量测定检测标准建立包装材料、贮藏方式标准 生物活性质量评价功能指纹图谱包
12、装、储藏外观、质地、性味组织、粉末鉴别水分、灰分、杂质浸出物、重金属、农残、有毒有害物质检查包装材料、贮藏环境、贮藏时间中药提取物质量控制中药提取物质量控制中药提取物性状鉴别有效成份检查中药提取物质量标准中药提取物质量标准建立水分、灰分、浸出建立水分、灰分、浸出物、杂质、重金属、农物、杂质、重金属、农残、有毒有害物质标准残、有毒有害物质标准建立外观、性味建立外观、性味标准标准建立TLC、HPLC鉴别标准建立指纹图谱、建立指纹图谱、含量测定检测标含量测定检测标准准 生物活性质量评价生物活性质量评价功能指纹功能指纹图谱图谱外观、性味水分、灰分、杂质浸出物、重金属、农残、有毒有害物质检查TLC/HP
13、LC建立卫生学检建立卫生学检查标准查标准 卫生学包装、储藏建立包装材料、贮藏方式标准 细菌、霉菌、大肠杆菌等包装材料、贮藏环境、贮藏时间中成药质量控制中成药质量控制中成药中成药性状鉴别有效成份检查中成药质量标准中成药质量标准建立水分、灰分、浸建立水分、灰分、浸出物、杂质、重金属、出物、杂质、重金属、农残、有毒有害物质农残、有毒有害物质标准标准建立外观、性味建立外观、性味标准标准建立建立TLC、HPLC鉴别标准鉴别标准建立指纹图谱、含建立指纹图谱、含量测定检测标准量测定检测标准生物活性质量评价指纹图谱外观、性味水分、灰分、杂质浸出物、重金属、农残、有毒有害物质检查TLC/HPLC建立卫生学 检建
14、立卫生学 检查标准查标准 卫生学检查细菌、霉菌、大肠杆菌等包装、贮藏建立包装、贮藏建立包装、贮藏标准标准 包装材料、贮藏环境、贮藏时间2.国内学者的研究工作基于生物测定和药效支撑的中药质量控制方法 解放军302医院，全军中药研究所肖小河 研究思路和方法借鉴生物制剂质量控制管理模式建立基于道地药材（对照药材）和生物测定的中药质量评价模式和方法从常规、化学和生物多重角度，共同把关中药质量补充和完善现行的中药质量控制和评价方法体系中药生物测定：两大关键问题 中药生物测定方法的选择与验证中药生物测定方法的选择与验证 仿生色谱技术 西安交通大学贺浪冲热分析技术 化学振荡反应指纹图谱技术 标准提取物标准提
15、取物特征图谱技术特征图谱技术 血清药物学血清药物学 DNADNA分子标记鉴别分子标记鉴别 DNA DNA分子标记鉴别是指通过比较药材间分子标记鉴别是指通过比较药材间DNA DNA 分子分子遗传多样性差异来鉴别药材基源、确定学名的方遗传多样性差异来鉴别药材基源、确定学名的方法。适用于应用性状、显微以及理化鉴别等方法法。适用于应用性状、显微以及理化鉴别等方法难以鉴定的样品的鉴别，如同属多基源物种、动难以鉴定的样品的鉴别，如同属多基源物种、动物药等的鉴别。物药等的鉴别。 多指标评价色谱指纹图谱技术 大黄质量控制方法大黄质量控制方法北京大学北京大学 中药材 系统化学成分研究 阐明其化学成分 文献调研或
16、生物活性筛选 确定有效成分或指标性成分 化学对照品的快速制备工艺和质量标准研究 制备有效成分或指标性成分的化学对照品 TLC 鉴 别方法研究 多成分含量测定研究 HPLC指纹图谱检测方法研究 建立专属性TLC鉴别 建立多成分含量测定 建立指纹图谱检测标准 水分、灰分、酸不溶性灰分、炽灼残渣、重金属、农残分析 建立水分、 杂质和有害物质的检查 构建中药构建中药材材质量质量标准体系标准体系 性状 组织、 粉末鉴别 建立性状、组织、粉末鉴别 制备柱色谱HSCCC整体化学成分控制化学成分研究化学成分研究混合对照品样品大黄药材大黄药材14个成分同时含量测定的个成分同时含量测定的HPLC色谱图色谱图OOO
17、HOHR1R2NoCompoundsR1R21EmodinCH3OH2RheinCOOHH3ChrysophanolCH3H4PhyscionCH3OCH35Aloe-emodinCH2OHHOOHO-glcCOOHCOOHOOHO-glcR2R1glc=-D-glucose6 R1=R2=HSennoside A7 R2=HR2=HSennoside BH混合对照品溶剂样品色谱图三种大黄指纹图谱的比较三种大黄指纹图谱的比较掌叶大黄唐古特大黄药用大黄Journal of chromatography A , 2006(1132):320-324 36批掌叶大黄的指纹图谱比较分析批掌叶大黄的指纹
18、图谱比较分析42批唐古特大黄指纹图谱比较分析批唐古特大黄指纹图谱比较分析大黄药材液质大黄药材液质(HPLC/MS/MS) 指纹图谱分析指纹图谱分析标准品的标准品的LC/MS/MS分析分析 对对20个标准品逐一进行个标准品逐一进行LC/MS/MS分析。其中蒽醌衍分析。其中蒽醌衍生物类生物类9个、苯丁酮苷类个、苯丁酮苷类4个、二苯乙烯类个、二苯乙烯类4个、单宁类个、单宁类2个、个、萘类萘类1个。根据各类化合物的质谱碎片特征，归纳总结它个。根据各类化合物的质谱碎片特征，归纳总结它们的质谱裂解途径。们的质谱裂解途径。掌叶大黄掌叶大黄HPLC/MS/MS指纹图谱指纹图谱药用大黄药用大黄HPLC/MS/M
19、S指纹图谱指纹图谱中药的质量控制要逐步由单一指标成分定性定量测定，向多指标活性有效成分及生物测定的综合检测过渡。3.3.安全性评价安全性评价（1）.含朱砂、雄黄中药的质量控制 朱砂、雄黄在人体内的毒性程度可能与以下朱砂、雄黄在人体内的毒性程度可能与以下因素相关：因素相关：在体内产生的可溶性砷、汞量在体内产生的可溶性砷、汞量 可溶性的砷、汞在体内的存在价态可溶性的砷、汞在体内的存在价态 朱砂、雄黄通过体内后排出的砷、汞的量朱砂、雄黄通过体内后排出的砷、汞的量朱砂、雄黄及其制剂的研究思路总砷、汞的含量测定模拟人体胃肠道环境的可溶性砷、汞的检测可溶性成分中不同价态砷、汞的分析朱砂雄黄的体内代谢研究拟
20、订安全限量，指导用药安全1.总总As、总、总Hg的研究结果：的研究结果：u 方法：王水微波消解，方法：王水微波消解，ICP-MS检测检测u 结果：朱砂、雄黄及其制剂中总结果：朱砂、雄黄及其制剂中总As、总、总Hg含量高含量高2.酸可溶性砷、汞的研究结果：酸可溶性砷、汞的研究结果：u 方法：模拟胃液萃取、方法：模拟胃液萃取、 1盐酸萃取，盐酸萃取， ICP-MS检测检测u 结果：结果：模拟胃液模拟胃液24小时萃取可溶的小时萃取可溶的Hg, As含量很小，仅含量很小，仅 占总占总As、总、总Hg的的0.023 1%HCl对可溶As、Hg的萃取率略高于模拟胃液朱砂、雄黄及其制剂中总砷、汞与酸可溶性砷
21、、汞的研究朱砂、雄黄及其制剂中总汞、砷和酸可溶性汞、砷的量与WHO限量的比较根据各制剂的用法用量，计算每人每天的最高摄入量，与根据各制剂的用法用量，计算每人每天的最高摄入量，与WHO和和FAO下属的食品添加剂专业委员会（下属的食品添加剂专业委员会（JECFA）提供的安全限）提供的安全限量比较：量比较：1.除个别中药中可溶除个别中药中可溶Hg略高外，含朱砂制剂中的可溶性的略高外，含朱砂制剂中的可溶性的Hg均在均在WHO的安全限量以下的安全限量以下; 个别中药的可溶Hg偏高，可能与其采用的朱砂质量有关，或与复方的特性有关，提示需要更多研究，确定安全限量。2.含雄黄制剂中可溶性含雄黄制剂中可溶性As
22、As的含量超过的含量超过WHO WHO 规定的安全规定的安全限量限量 含雄黄制剂中可溶性As的含量大大超过WHO 规定的安全限量 含雄黄制剂中可溶性As的含量占总砷的量很低，含量范围很窄， 含雄黄制剂中可溶性As的含量与其总砷的含量没有相关性， 提示：雄黄在中药复杂基质中有自我平衡调控作用提示：雄黄在中药复杂基质中有自我平衡调控作用, ,中药复方制剂中药复方制剂中其它动、植物成分的存在可增加或减少砷、汞可溶性的可能性，中其它动、植物成分的存在可增加或减少砷、汞可溶性的可能性，需要进一步研究。需要进一步研究。朱砂、雄黄及其制剂中可溶性砷、汞中不同价态砷、汞的研究已知砷的不同价态及其毒性：砷化氢（
23、砷化氢（AsH3）亚砷酸）亚砷酸(As)和砷酸和砷酸(As) 甲基砷甲基砷酸酸()和二甲基砷酸和二甲基砷酸()砷砷甜菜碱甜菜碱()和和砷砷胆碱胆碱() 基本无毒基本无毒已知汞的不同价态及其毒性 ：甲基汞乙基汞甲基汞乙基汞Hg2+Hg HPLC-ICP-MS 分析As形态0200400600800050010001500200025003000Abundance(cps)Time(sec)AsCAsBAs(III)DMAMMAAs(V)6种种As标准形态标准形态：砷胆碱：砷甜菜碱As：三价砷（亚砷酸）：二甲基砷酸As：五价砷（砷酸）MMA:甲基砷酸1.002.003.004.005.006.00
24、7.008.009.00020040060080010001200140016001800200022002400Time-AbundanceTIC: 4-1-1.D (+,-)AsC ?As(III)As(V)1%HCl萃取含雄黄样品的价态分析: 主要以As(III) 和As(V)形式存在As（）As（V）雄黄中不同价态分析的色谱图不同价态砷对照品色谱图 雄黄样品色谱图结果：结果：雄黄的雄黄的萃取溶液中仅检测到三价砷和五价砷，未检测到其他价态砷萃取溶液中仅检测到三价砷和五价砷，未检测到其他价态砷 （检测限（检测限0.1ppb) RP-HPLC-ICP-MS分析Hg形态C18柱分离4种汞的价态
25、HgHg2乙基汞甲基汞1HCl萃取液经C18柱分离，均未检出上述各形态Hg1.1.人工胃液或人工胃液或1%HCl1%HCl萃取朱砂、雄黄及其制剂中的萃取朱砂、雄黄及其制剂中的AsAs和和HgHg，其可溶解的量远远低于与其总金属含量。其可溶解的量远远低于与其总金属含量。 2.2.朱砂及其制剂中可萃取的朱砂及其制剂中可萃取的HgHg含量大部分在含量大部分在WHOWHO安全限量安全限量以下。以下。3.3.朱砂的酸可溶性供试品中未检测到二价汞，未检出甲朱砂的酸可溶性供试品中未检测到二价汞，未检出甲基汞和乙基汞基汞和乙基汞, ,且酸可溶汞的量很少且酸可溶汞的量很少4.4.朱砂的可溶部分的朱砂的可溶部分的
26、HgHg，存在形态证明不是有毒的无机，存在形态证明不是有毒的无机HgHg，而可能是复合的有机形态。，而可能是复合的有机形态。4.4.雄黄及其制剂中的可萃取的雄黄及其制剂中的可萃取的AsAs含量超过含量超过WHOWHO安全限量。安全限量。 5.5.雄黄的可萃取的雄黄的可萃取的AsAs主要以有毒主要以有毒As(III)As(III)和和AsAs（IVIV）存）存在。提示必须从在。提示必须从AsAs的药效与毒性方面，重新考虑其限的药效与毒性方面，重新考虑其限量。量。6.6.含朱砂的中成药中酸可溶性含朱砂的中成药中酸可溶性PbPb均超过均超过20052005年版中国药年版中国药典标准。需要作进一步的研究。典标准。需要作进一步的研究。 3.3.安全性评价安全性评价(2).外源性有害物质控制 愿景：“关联药效，量而又准，可控可评”谢谢谢谢
