1、粪便显微镜检查新方法粪便显微镜检查新方法及其临床应用及其临床应用 广州医学院广州医学院 许建邦许建邦 粪便检验对许多疾病，特别是消化系统疾病及寄生粪便检验对许多疾病，特别是消化系统疾病及寄生虫病的诊断和治疗有重要的临床意义，成为临床上应虫病的诊断和治疗有重要的临床意义，成为临床上应用最广泛的用最广泛的“三大常规三大常规”检查之一。而显微镜检查更检查之一。而显微镜检查更是必不可少的重要项目，通过镜检，可以发现粪便中是必不可少的重要项目，通过镜检，可以发现粪便中的病理成份，如各种细胞、寄生虫卵等，更可检查食的病理成份，如各种细胞、寄生虫卵等，更可检查食物残渣以了解消化吸收功能。物残渣以了解消化吸收
2、功能。 长期以来，由于对粪便常规检验重视不够、工作长期以来，由于对粪便常规检验重视不够、工作量过大、人员不足、进修提高学习机会少、基本功量过大、人员不足、进修提高学习机会少、基本功欠扎实，加上显微镜检查方法滞后，致使寄生虫卵欠扎实，加上显微镜检查方法滞后，致使寄生虫卵检出率极低。沿用生理盐水涂片法虽简便易行，但检出率极低。沿用生理盐水涂片法虽简便易行，但漏检率极高；饱和盐水漂浮法仅适用于比重少于盐漏检率极高；饱和盐水漂浮法仅适用于比重少于盐水的虫卵（如：蛔虫、鞭虫、钩虫）；硫酸锌离心水的虫卵（如：蛔虫、鞭虫、钩虫）；硫酸锌离心漂浮法能浓集寄生性原虫包囊，却易使包囊变形；漂浮法能浓集寄生性原虫包
3、囊，却易使包囊变形；上述方法均存在一些根本的缺点，让操作者直接面上述方法均存在一些根本的缺点，让操作者直接面对和处理有生物危害性的物质和容易做成环境污染。对和处理有生物危害性的物质和容易做成环境污染。 优于饱和盐水漂浮法的乙醚优于饱和盐水漂浮法的乙醚甲醛法虽有固甲醛法虽有固定虫卵、包囊和消毒的作用，但仍不能避免在操定虫卵、包囊和消毒的作用，但仍不能避免在操作中对操作者和环境污染的危险，直接接触粪便作中对操作者和环境污染的危险，直接接触粪便和异常粪臭常令操作者不愿主动承担此项目工作。和异常粪臭常令操作者不愿主动承担此项目工作。事实上，寄生虫病仍然是世界上人类常见疾病。（插图一）事实上，寄生虫病仍
4、然是世界上人类常见疾病。（插图一）Table 1: Prevalence of the major global parasitic diseases, where they axis is thousands of cases worldwide (WHO:1995)完整的粪便标本收集，操作和分析系统完整的粪便标本收集，操作和分析系统DiaSys FE-2全自动粪便显微镜分析系统全自动粪便显微镜分析系统 （DiaSys FE-2工作站）工作站） DiaSys FE-2工作站是美国工作站是美国DiaSys Carporation 根据根据NCCLS（美国临床检验标准委员会）和（美国临床检验标准
5、委员会）和CLIA（临床实验室改进法案）导则的要术研制并经（临床实验室改进法案）导则的要术研制并经TV Pheinland（德国莱茵（德国莱茵TV）确认在全世界各国实验）确认在全世界各国实验室广泛应用的产品。室广泛应用的产品。 组组 成成 1、FE-2工作站工作站 FE-2工作站是由获专利的高清晰度优质玻璃制工作站是由获专利的高清晰度优质玻璃制成的二个流动计数室（成的二个流动计数室（O.S.A），可调双吸样针、），可调双吸样针、微电脑控制台、自动染色装置微电脑控制台、自动染色装置,带摄象的优质显带摄象的优质显微镜微镜(选用内置数码位相差显微镜选用内置数码位相差显微镜)、电脑系统组、电脑系统组成
6、。（附图一）成。（附图一）FE-2工作站工作站摄像显微镜摄像显微镜计算机计算机打印机打印机2、Parasep粪便离心管粪便离心管 Parasep粪便离心管是一种快速、一次性过粪便离心管是一种快速、一次性过滤器，利用三次过滤套环技术提供洁净收集标本滤器，利用三次过滤套环技术提供洁净收集标本和高效率浓缩寄生虫卵、幼虫、原生动物包囊、和高效率浓缩寄生虫卵、幼虫、原生动物包囊、球虫卵囊等。（附图二）球虫卵囊等。（附图二） 3、兼容性的离心机、兼容性的离心机 配用适合标准离心机斗。配用适合标准离心机斗。 混合室混合室标本室标本室 （高清晰度的聚丙烯）（高清晰度的聚丙烯） 过滤元件过滤元件 完整的匙形完整
7、的匙形 专利过滤环专利过滤环高密度聚丙烯高密度聚丙烯 两层矩形过滤层两层矩形过滤层 隔离大颗粒分子，不堵塞隔离大颗粒分子，不堵塞425um的气孔（相当的气孔（相当700mm2铜筛）铜筛） 残渣收集残渣收集 所隔离的颗粒物收集起来，防所隔离的颗粒物收集起来，防止离心过程出现堵塞现象。止离心过程出现堵塞现象。 气气/液封和安全锁液封和安全锁 防止生物危害物质释放；安全防止生物危害物质释放；安全锁保证安全处理。锁保证安全处理。 锥形沉渣锥形沉渣 可检测寄生虫卵、蚴、原生动可检测寄生虫卵、蚴、原生动物包囊、球虫卵囊物包囊、球虫卵囊 病人号码病人号码 特特 点点 一、操作简易一、操作简易 按指示灯提示按
8、钮，工作站将自动完成吸样、重悬按指示灯提示按钮，工作站将自动完成吸样、重悬浮染色（自选）、定量标本输送、自动冲洗全部过程。浮染色（自选）、定量标本输送、自动冲洗全部过程。 二、定量检测二、定量检测 每次定量吸入粪便浓缩物每次定量吸入粪便浓缩物15ul。其中。其中10ul 标本不染色，标本不染色，另另5ul与与5ul染液进行自动染色，增加分析量，提高检出阳染液进行自动染色，增加分析量，提高检出阳性率。性率。 三、视野清晰三、视野清晰 流动计数室（流动计数室（OSA）是用优质玻璃，厚度按国际标准整）是用优质玻璃，厚度按国际标准整块制取的，光洁平整、无任何缝隙，故其图象清晰明亮，透块制取的，光洁平整
9、、无任何缝隙，故其图象清晰明亮，透光率高、无折射现象，提供最佳的视野范围和清晰度。光率高、无折射现象，提供最佳的视野范围和清晰度。 四、速度快捷四、速度快捷 自动吸样时间用自动吸样时间用5Sec，自动冲洗时间仅用，自动冲洗时间仅用8Sec便可完成。便可完成。 五、自动稀释五、自动稀释 对稠度高的粪便浓缩物，可按冲洗键，再按进样键，标对稠度高的粪便浓缩物，可按冲洗键，再按进样键，标本便可完成自动稀释。本便可完成自动稀释。 六、安全洁净六、安全洁净 标本前处理在标本前处理在Parasep粪便离心管经用甲醛杀菌，乙酸乙酯粪便离心管经用甲醛杀菌，乙酸乙酯乳化的无害化处理，达到无臭无污染。处理后标本分析
10、全过程乳化的无害化处理，达到无臭无污染。处理后标本分析全过程均在封闭系统内进行，提高工作人员和工作地点的安全性。均在封闭系统内进行，提高工作人员和工作地点的安全性。 七、多种选择七、多种选择 工作站可根据用户需求不同，可选择明视野、位相差、偏工作站可根据用户需求不同，可选择明视野、位相差、偏振光、荧光和其它形式的显微镜配套。振光、荧光和其它形式的显微镜配套。 八、系统网络八、系统网络 工作站与显微镜系统、电脑、打印机组合后，可贮存检查结果工作站与显微镜系统、电脑、打印机组合后，可贮存检查结果和图像，并打印出报告单。更可与计算机网络终端连接，实现和图像，并打印出报告单。更可与计算机网络终端连接，
11、实现无纸待输，贮存和检索非常方便。无纸待输，贮存和检索非常方便。 操操 作作 方方 法法 一一、Maxi Parasep粪便离心管操作步骤粪便离心管操作步骤1、在、在15ml的混合室内加入的混合室内加入10%甲醛盐水甲醛盐水9ml，再加入乙，再加入乙酸乙酯酸乙酯3ml。2、加入新鲜粪便一匙（约、加入新鲜粪便一匙（约2-3g）于混合室中，封闭混合）于混合室中，封闭混合室。室。3、接上、接上10ml的离心管，尖端朝上，旋转或摇晃使其乳化。的离心管，尖端朝上，旋转或摇晃使其乳化。5、拧开并扔掉混合室和过滤环。、拧开并扔掉混合室和过滤环。6、拧紧离心管的盖子、以、拧紧离心管的盖子、以RCF 500g速
12、度离心速度离心5min或或RCF 1000g速度离心速度离心1min。7、除去脂肪物质并倒掉沉渣上面的液体。、除去脂肪物质并倒掉沉渣上面的液体。8、余下的粪沉渣用于检验、余下的粪沉渣用于检验 二、二、FE-2工作站操作步骤工作站操作步骤 1、正确安装工作站（流动计数室安置在显微镜载物台上，、正确安装工作站（流动计数室安置在显微镜载物台上，固定好连接管道，调整好吸样针到距试管底部固定好连接管道，调整好吸样针到距试管底部3-4mm处固定处固定好，检查试剂，接通电源）。好，检查试剂，接通电源）。2、按未染色清洗键，同时启动电源，仪器自动进行自检。、按未染色清洗键，同时启动电源，仪器自动进行自检。完成
13、后，指示灯均亮。完成后，指示灯均亮。3、把自动进样针插入粪便浓缩物试管中。、把自动进样针插入粪便浓缩物试管中。4、按、按“进样键进样键”5Sce内有内有15ul粪浓缩物被自动吸入（其中粪浓缩物被自动吸入（其中未染色计数池有粪浓缩物未染色计数池有粪浓缩物10ul，染色计数池有粪浓缩物，染色计数池有粪浓缩物5ul和和染色液染色液5ul）。）。 5、读取结果。、读取结果。 6、观察完毕后，按未染色冲洗键，、观察完毕后，按未染色冲洗键，8Sce内吸入生理盐水内吸入生理盐水1500ul，自动冲洗管道及未染色计数池，再按染色清洗键，在，自动冲洗管道及未染色计数池，再按染色清洗键，在8Sce内，吸入生理盐水
14、内，吸入生理盐水1800ul，自动冲洗管道及染色计数室后，自动冲洗管道及染色计数室后，再返回试管中。再返回试管中。 7、冲洗完成后，进样键及冲洗键上方指示灯闪亮，表示可、冲洗完成后，进样键及冲洗键上方指示灯闪亮，表示可进行下一标本或另一次清洗循环。进行下一标本或另一次清洗循环。 8、当测试暂停一段时间时，循环、当测试暂停一段时间时，循环“清洗清洗”23次，并作酒次，并作酒精擦拭吸样针针头。精擦拭吸样针针头。 9、在平均每、在平均每25个测试时消毒一次（把吸样针放入个测试时消毒一次（把吸样针放入5%次氯次氯酸钠的杯中，按下酸钠的杯中，按下“清洗键清洗键”，再把吸样针放进废液瓶，然，再把吸样针放进
15、废液瓶，然后按下两个后按下两个“清洗键清洗键”）。）。 10、如、如OSA内有脂肪、油、气泡时，则应把吸样针放入异内有脂肪、油、气泡时，则应把吸样针放入异丙醇丙醇/乙醇乙醇/甲醇的杯中，然后按甲醇的杯中，然后按“进样键进样键”，再把吸样针头放，再把吸样针头放进废液瓶，按下两个进废液瓶，按下两个“清洗键清洗键”。粪便有形成份检查及其临床意义粪便有形成份检查及其临床意义 一、细胞一、细胞 1、红细胞、红细胞 粪便中红细胞为草黄色，稍有折光性，圆盘状。正常粪便中红细胞为草黄色，稍有折光性，圆盘状。正常粪便中无红细胞。病理情况下：肠道下段粘膜炎症、糜粪便中无红细胞。病理情况下：肠道下段粘膜炎症、糜烂、
16、出血时可见到。如痢疾、溃疡性结肠炎、结肠癌、烂、出血时可见到。如痢疾、溃疡性结肠炎、结肠癌、痔疮时。阿米巴痢疾时痔疮时。阿米巴痢疾时RBC多于多于WBC，成堆出现并有破，成堆出现并有破坏现象，细菌性痢疾时坏现象，细菌性痢疾时RBC少于少于WBC且呈散在分布。且呈散在分布。 2、白细胞、白细胞 正常粪便偶可见到中性分叶核粒细胞。当肠道有炎症时正常粪便偶可见到中性分叶核粒细胞。当肠道有炎症时增多，其数量多少与炎症轻重及部位有关。如：小肠炎症时增多，其数量多少与炎症轻重及部位有关。如：小肠炎症时WBC数量不多、细胞被消化而难于辨认；结肠炎时数量不多、细胞被消化而难于辨认；结肠炎时WBC大量大量出现，
17、甚至满视野并呈肿胀退化成为结构不完整，核模糊不出现，甚至满视野并呈肿胀退化成为结构不完整，核模糊不清、浆充满细小颗粒的脓细胞；过敏性结肠炎，肠寄生虫病清、浆充满细小颗粒的脓细胞；过敏性结肠炎，肠寄生虫病检出嗜酸性粒细胞且常伴有夏科检出嗜酸性粒细胞且常伴有夏科莱登氏结晶莱登氏结晶 。 3、吞噬细胞、吞噬细胞 胞体较大，直径胞体较大，直径20um，呈圆，呈圆/卵圆卵圆/不规则形，浆有时可呈不规则形，浆有时可呈伪足样伸出，外浆清亮透明，有伪足样伸出，外浆清亮透明，有12个大小不等的核，无伪足个大小不等的核，无伪足者胞浆含颗粒者胞浆含颗粒/吞噬吞噬RBC、WBC、Bast。（应与溶组织阿米巴。（应与溶
18、组织阿米巴滋养体鉴别）。滋养体鉴别）。 正常粪便见不到，在直肠炎时可找到。正常粪便见不到，在直肠炎时可找到。 4、上皮细胞、上皮细胞 柱状上皮细胞，呈卵圆形柱状上皮细胞，呈卵圆形/短柱状，两端钝圆。短柱状，两端钝圆。 正常粪便见不到，在结肠炎和伪膜性肠炎时常增多。正常粪便见不到，在结肠炎和伪膜性肠炎时常增多。 二、食物残渣二、食物残渣 1、淀粉颗粒、淀粉颗粒大小不等，圆大小不等，圆/椭圆形颗粒，无色、有光泽，呈特殊的轮椭圆形颗粒，无色、有光泽，呈特殊的轮状结构。加碘染色后显蓝色，水解为红糊精时染棕红色。状结构。加碘染色后显蓝色，水解为红糊精时染棕红色。在碳水化合消化不良和腹泻的粪便中易见到淀粉
19、颗粒。在碳水化合消化不良和腹泻的粪便中易见到淀粉颗粒。 2、肌内纤维、肌内纤维 淡黄色柱状、带横纹、断端常呈直角形。严重时可见细淡黄色柱状、带横纹、断端常呈直角形。严重时可见细胞核及纵横纹。胞核及纵横纹。 在大量肉食后，腹泻、蛋白质消化不良，胰腺分泌功能在大量肉食后，腹泻、蛋白质消化不良，胰腺分泌功能减退时可增多。减退时可增多。 3、结缔组织、结缔组织无色无色/微黄色来状边沿不清晰线条状物，加微黄色来状边沿不清晰线条状物，加30%醋酸后胀大醋酸后胀大而呈胶状。而呈胶状。正常粪便很少看到，在胃蛋白酶缺乏时可见。正常粪便很少看到，在胃蛋白酶缺乏时可见。4、弹力纤维、弹力纤维常与结缔组织并存，其边沿
20、轮廓较明显而分叉，加醋酸后常与结缔组织并存，其边沿轮廓较明显而分叉，加醋酸后更为明显。更为明显。5、植物细胞与植物纤维、植物细胞与植物纤维植物细胞呈多形性，有圆植物细胞呈多形性，有圆/长圆形长圆形/双层细胞壁。植物纤维双层细胞壁。植物纤维多为螺旋形多为螺旋形/网格状结构。植物毛为细长，有强折光、一端呈网格状结构。植物毛为细长，有强折光、一端呈尖形的管状物，中心有贯通两端的管腔。尖形的管状物，中心有贯通两端的管腔。在正常粪便中多见。在正常粪便中多见。 三、结晶三、结晶1、夏科、夏科莱登结晶莱登结晶无色透明呈菱形，两端尖长，大小不等，折光性强的结晶。无色透明呈菱形，两端尖长，大小不等，折光性强的结
21、晶。在阿米巴痢疾，过敏性结肠炎时多见。在阿米巴痢疾，过敏性结肠炎时多见。2、血晶、血晶棕黄色斜方形结晶。不溶于棕黄色斜方形结晶。不溶于KOH，遇，遇HNO3呈青色。呈青色。在胃肠道出血后粪便中可见。在胃肠道出血后粪便中可见。3、脂肪、脂肪31 中性脂肪中性脂肪圆珠形，加苏丹圆珠形，加苏丹染呈朱红色。染呈朱红色。 32 游离脂酸游离脂酸片状片状/针束状结晶，加热后可融化。前者加苏丹针束状结晶，加热后可融化。前者加苏丹染呈淡桔染呈淡桔黄色，后者不着色。黄色，后者不着色。33 结合脂酸结合脂酸黄色片状黄色片状/块状。加热后不融化，加苏丹块状。加热后不融化，加苏丹不着色。不着色。4、三联磷酸盐结晶、三
22、联磷酸盐结晶无色有折光性信封状无色有折光性信封状/棒状棒状/羽毛状羽毛状/水晶石状结晶。水晶石状结晶。5、碳酸钙结晶、碳酸钙结晶无色哑铃状无色哑铃状/小针状结晶小针状结晶/无晶性颗粒状。无晶性颗粒状。6、草酸钙结晶、草酸钙结晶无色有折光性哑铃形无色有折光性哑铃形/八面体八面体/信封状。信封状。 四、人体酵母菌四、人体酵母菌无色，圆无色，圆/卵圆形小体，直径卵圆形小体，直径525um，加碘后能染色，内，加碘后能染色，内含巨大的透明体，四周绕以极狭之胞浆，内含少数折光小点含巨大的透明体，四周绕以极狭之胞浆，内含少数折光小点/核。用水涂片即消失。核。用水涂片即消失。其性质、意义未明。其性质、意义未明
23、。 五、霉菌五、霉菌无色、卵圆形无色、卵圆形/芽状芽状/短链状。短链状。霉菌性肠炎多见。霉菌性肠炎多见。 六、细菌六、细菌 占粪便固体成份占粪便固体成份30%，成人主要为大肠杆菌。粪便中菌量与，成人主要为大肠杆菌。粪便中菌量与菌谱处于相对稳定状态，保持着细菌与宿主之间的生态平衡。菌谱处于相对稳定状态，保持着细菌与宿主之间的生态平衡。在长期使用广谱抗菌素、免疫抑制剂、慢性消耗疾病病人，粪在长期使用广谱抗菌素、免疫抑制剂、慢性消耗疾病病人，粪便涂片细菌数量少，提示菌群紊乱便涂片细菌数量少，提示菌群紊乱/发生二重感染。如在涂片中发生二重感染。如在涂片中有成堆葡萄状球菌，念珠菌显得意义更大。有成堆葡萄
24、状球菌，念珠菌显得意义更大。 七、寄生虫卵七、寄生虫卵 检出寄生虫卵即可确诊寄生虫病。各种寄生虫卵都可根据其检出寄生虫卵即可确诊寄生虫病。各种寄生虫卵都可根据其形态特征作出正确诊断，因此，需要检验人员掌握好诊断和鉴形态特征作出正确诊断，因此，需要检验人员掌握好诊断和鉴别诊断的要点。别诊断的要点。粪便中常见的寄生虫卵有：蛔虫卵、钩虫卵、鞭虫卵、蛲粪便中常见的寄生虫卵有：蛔虫卵、钩虫卵、鞭虫卵、蛲虫卵、东方毛圆线虫卵，日本血吸虫卵、华枝睾吸虫卵、布氏虫卵、东方毛圆线虫卵，日本血吸虫卵、华枝睾吸虫卵、布氏姜片虫卵、肺吸虫卵、四川并殖吸虫卵、带绦虫卵、微少膜壳姜片虫卵、肺吸虫卵、四川并殖吸虫卵、带绦虫卵、微少膜壳绦虫卵、缩小膜壳绦虫卵、阔节裂头绦虫卵绦虫卵、缩小膜壳绦虫卵、阔节裂头绦虫卵等。等。 八、肠寄生原虫八、肠寄生原虫粪便中常见的肠寄生原虫有：溶组织内阿米巴、结肠内阿粪便中常见的肠寄生原虫有：溶组织内阿米巴、结肠内阿米巴，脆弱双核阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、结肠小袋纤毛虫米巴，脆弱双核阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、结肠小袋纤毛虫等。等。谢谢 谢！谢！
