1、聚合酶链反应聚合酶链反应及基因突变检测方法及基因突变检测方法上海交通大学医学院刘湘帆 讲师1感谢你的观看2109年5月18日2感谢你的观看2109年5月18日3感谢你的观看2109年5月18日4感谢你的观看2109年5月18日PCR原理原理5533d.NTPs耐热DNA聚合酶引物5353535353535353添加反应混合液添加反应混合液及样本及样本变性变性535353535353退火退火加入试管中加入试管中5感谢你的观看2109年5月18日延伸延伸53535353继续延伸继续延伸535355TaqTaq353TaqTaq55循环循环PCR原理原理6感谢你的观看2109年5月18日535353
2、5355335353第二个循环第二个循环4个拷贝个拷贝第三个循环第三个循环8个拷贝个拷贝53535353535353535353533553535353第第n个循环个循环2n个拷贝个拷贝PCR原理原理7感谢你的观看2109年5月18日94 C(30 s)40-60 C(30 s)72 C(30-60 s/kb)MeltAnnealExtendThe Polymerase Chain Reaction (PCR)1820-30X8感谢你的观看2109年5月18日94 C(30 s)40-60 C(30 s)72 C(30-60 s/kb)MeltAnnealExtendCycle #2NIH20
3、-30X9感谢你的观看2109年5月18日10感谢你的观看2109年5月18日11感谢你的观看2109年5月18日12感谢你的观看2109年5月18日13感谢你的观看2109年5月18日14感谢你的观看2109年5月18日引物浓度：引物浓度：0.1 0.2umol/L,浓度过高容易生成引物二聚体浓度过高容易生成引物二聚体15感谢你的观看2109年5月18日16感谢你的观看2109年5月18日17感谢你的观看2109年5月18日18感谢你的观看2109年5月18日19感谢你的观看2109年5月18日20感谢你的观看2109年5月18日21感谢你的观看2109年5月18日22感谢你的观看2109年
4、5月18日23感谢你的观看2109年5月18日24感谢你的观看2109年5月18日25感谢你的观看2109年5月18日n指数增长期n线形增长期n平台期循环数 # 理论值 实际值Log 产物DNAPCR过程的实时监测26感谢你的观看2109年5月18日27感谢你的观看2109年5月18日28感谢你的观看2109年5月18日29感谢你的观看2109年5月18日30感谢你的观看2109年5月18日31感谢你的观看2109年5月18日32感谢你的观看2109年5月18日33感谢你的观看2109年5月18日34感谢你的观看2109年5月18日35感谢你的观看2109年5月18日36感谢你的观看2109年
5、5月18日绝对定量绝对定量 PCR1.外参照系统的设置2.内参照系统的设置 实时定量 PCR 对核酸扩增反应进行直接和动态的监测， 实现对靶基因的实时定量分析37感谢你的观看2109年5月18日38感谢你的观看2109年5月18日39感谢你的观看2109年5月18日40感谢你的观看2109年5月18日41感谢你的观看2109年5月18日42感谢你的观看2109年5月18日TaqManTM5533d.NTPsThermal Stable DNA PolymerasePrimers5353535353535353Add Master Mix and SampleDenaturation535353
6、535353AnnealingReaction TubeTaql53RQProbe53RQ43感谢你的观看2109年5月18日5353TaqManTMExtension Step531. Strand DisplacementTaq3QR5533QTaqR52. Cleavage3. PolymerizationComplete53QTaqR354. Detection533QTaqR5l lR53RQ44感谢你的观看2109年5月18日实时定量RT-PCR检测CEA基因拷贝数在监测胃肠癌微转移中的应用45感谢你的观看2109年5月18日46感谢你的观看2109年5月18日正常成人体内CEA基
7、因表达47感谢你的观看2109年5月18日胃肠癌肿瘤组织中CEA基因的表达48感谢你的观看2109年5月18日49感谢你的观看2109年5月18日胃肠癌患者外周血中CEA基因的表达50感谢你的观看2109年5月18日DMD基因外显子缺失的检测基因外显子缺失的检测51感谢你的观看2109年5月18日52感谢你的观看2109年5月18日53感谢你的观看2109年5月18日54感谢你的观看2109年5月18日55感谢你的观看2109年5月18日56感谢你的观看2109年5月18日Bcl I RFLP（血友病（血友病A）57感谢你的观看2109年5月18日58感谢你的观看2109年5月18日59感谢你
8、的观看2109年5月18日60感谢你的观看2109年5月18日s4. Southern印迹杂交印迹杂交61感谢你的观看2109年5月18日62感谢你的观看2109年5月18日63感谢你的观看2109年5月18日64感谢你的观看2109年5月18日65感谢你的观看2109年5月18日66感谢你的观看2109年5月18日67感谢你的观看2109年5月18日68感谢你的观看2109年5月18日69感谢你的观看2109年5月18日70感谢你的观看2109年5月18日71感谢你的观看2109年5月18日PCR测序演示版测序演示版1272感谢你的观看2109年5月18日73感谢你的观看2109年5月18日74感谢你的观看2109年5月18日
