1、幽门螺杆菌临床检验方法评估及选择幽门螺杆菌临床检验方法评估及选择南京鼓楼医院体检中心 1 幽门螺杆菌的特点幽门螺杆菌的特点幽门螺杆菌临床检验方法及选择幽门螺杆菌临床检验方法及选择 幽门螺杆菌临床检验方法分类幽门螺杆菌临床检验方法分类 各种检验方法的评估及选择各种检验方法的评估及选择2幽门螺杆菌的特点幽门螺杆菌，幽门螺杆菌，Helicobacter pyloriHelicobacter pylori，简称简称HpHp。首先由巴里首先由巴里马歇尔马歇尔(Barry J. (Barry J. Marshall)Marshall)和罗宾和罗宾沃伦沃伦(J. Robin (J. Robin Warren
2、)Warren)二人发现，此二人因此获得二人发现，此二人因此获得20052005年的诺贝尔生理学与医学奖。年的诺贝尔生理学与医学奖。3幽门螺杆菌的特点4HpHp是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。长螺旋形弯曲的细菌。长2.52.54.0m4.0m，宽宽0.50.51.0m1.0m。革兰染色阴性。革兰染色阴性。有动力。在胃粘膜上皮细胞表面常呈有动力。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。在固体培养基典型的螺旋状或弧形。在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状。出现杆状或圆球状。 幽门螺杆菌的特点5
3、幽门螺杆菌的特点幽门螺杆菌的尿素酶极为丰富，约含幽门螺杆菌的尿素酶极为丰富，约含菌体蛋白的菌体蛋白的15%15%，活性相当于变形杆菌，活性相当于变形杆菌的的400400倍。尿素酶催化尿素水解形成氨倍。尿素酶催化尿素水解形成氨云保护细菌在高酸环境下生存。云保护细菌在高酸环境下生存。幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。巴瘤和胃癌的主要致病因素。19941994年世界卫生组织年世界卫生组织/ /国际癌症研究机国际癌症研究机构将幽门螺杆菌定位构将幽门螺杆菌定位1 1类致癌原。类致癌原。
4、6幽门螺杆菌临床检验方法及选择幽门螺杆菌临床检验方法的分类：幽门螺杆菌临床检验方法的分类：一一. .有创性有创性( (侵入性侵入性) )检验方法：检验方法：快速尿素酶试验快速尿素酶试验病理染色病理染色涂片染色涂片染色细菌培养细菌培养基因测定基因测定二.无创性（非侵入性）检验方法：无创性（非侵入性）检验方法： 尿素呼气试验尿素呼气试验HPHP抗体测定抗体测定粪粪HpHp抗原测定抗原测定7一一. .有创性方法：有创性方法：1.1.快速尿素酶试验（快速尿素酶试验（RUTRUT）：）： 检测胃粘膜表面粘液层中的检测胃粘膜表面粘液层中的HpHp产生的尿素酶，是我国产生的尿素酶，是我国各级医院胃镜室较易开
5、展的各级医院胃镜室较易开展的HpHp感染诊断方法。具有简感染诊断方法。具有简便、快捷、准确、能反应现症感染和价廉等优点。便、快捷、准确、能反应现症感染和价廉等优点。 缺点是依赖胃镜，其检测结果受检测试剂的缺点是依赖胃镜，其检测结果受检测试剂的pHpH值、取值、取材部位、取材组织大小、取材组织中菌量、反应时间材部位、取材组织大小、取材组织中菌量、反应时间、环境温度等因素影响。、环境温度等因素影响。 另外当患者因其他原因接受抗生素、铋剂或另外当患者因其他原因接受抗生素、铋剂或PPIPPI等治等治疗时，疗时，HpHp虽然不会被杀灭，但其活性受到抑制，尿素虽然不会被杀灭，但其活性受到抑制，尿素酶活性也
6、随之明显降低，导致尿素酶依赖性试验出现酶活性也随之明显降低，导致尿素酶依赖性试验出现假阴性结果。假阴性结果。幽门螺杆菌临床检验方法及选择8尿素酶尿素酶CO(NHCO(NH2 2) )2 2 COCO2 2+NH+NH3 3NHNH3 3使酚红显使酚红显红色红色：（）：（）不变色不变色：（）：（）胃粘膜组织胃粘膜组织尿素、酚红尿素、酚红快速尿素酶试验快速尿素酶试验92.2.涂片革兰染色镜检：涂片革兰染色镜检： 属简单的形态学检测方法。属简单的形态学检测方法。 将每一标本胃粘膜表面在洁净玻片上涂抹成约将每一标本胃粘膜表面在洁净玻片上涂抹成约5mm5mm* *10mm10mm大小（每块玻片可涂大小（
7、每块玻片可涂3535个标本），晾干个标本），晾干或火焰固定后行革兰染色，观察约或火焰固定后行革兰染色，观察约2020个油镜视野，个油镜视野，一般最快约一般最快约15min15min出结果。出结果。 优点是价格低，一般无假阳性，缺点是可有假阴性优点是价格低，一般无假阳性，缺点是可有假阴性，适合行胃镜检查而未开展，适合行胃镜检查而未开展RUTRUT的单位进行。的单位进行。幽门螺杆菌临床检验方法及选择103.3.组织切片染色镜检：组织切片染色镜检： 组织病理染色：胃活检标本常规制备病理切片，组织病理染色：胃活检标本常规制备病理切片，进行染色镜检。常用染色方法有进行染色镜检。常用染色方法有Warthi
8、nWarthin-starry-starry银染、银染、GiemsaGiemsa、甲苯胺兰及、甲苯胺兰及HEHE染色等。染色等。 免疫组化技术：应用标记抗免疫组化技术：应用标记抗HpHp抗体免疫染色，但抗体免疫染色，但实际应用有限。实际应用有限。幽门螺杆菌临床检验方法及选择114.Hp4.Hp培养：培养： 气体条件：微需氧气体条件：微需氧 固体及液体培养基：脑心浸液琼脂及肉汤、布氏肉汤等；固体及液体培养基：脑心浸液琼脂及肉汤、布氏肉汤等； 添加剂：动物（马、羊、兔等）血或血清。添加剂：动物（马、羊、兔等）血或血清。 鉴定：菌落形态、生化反应、涂片革兰氏染色镜检鉴定：菌落形态、生化反应、涂片革兰
9、氏染色镜检优点：特异性优点：特异性100%100%；可获取细菌作基础研究，方便体外药；可获取细菌作基础研究，方便体外药敏试验；用于自制血清学方法所需抗原；可作半定量分析敏试验；用于自制血清学方法所需抗原；可作半定量分析；诊断金标准之一。；诊断金标准之一。缺点：敏感性低（缺点：敏感性低（70-80%70-80%），培养条件要求高，操作复杂），培养条件要求高，操作复杂，在临床特别是基层医院不易推广。，在临床特别是基层医院不易推广。幽门螺杆菌临床检验方法及选择125.5.基因检测方法：基因检测方法： 探针杂交：仅用于科研目的。探针杂交：仅用于科研目的。 该方法的优点是可对该方法的优点是可对HpHp基
10、因进行分析，也可进行基因进行分析，也可进行HpHp培养；缺点是对实验室要求高，操作复杂，难推广培养；缺点是对实验室要求高，操作复杂，难推广。易出现污染而致假阳性。易出现污染而致假阳性。幽门螺杆菌临床检验方法及选择13二二. .无创性检测方法无创性检测方法：1.1.核素标记的尿素呼气试验：核素标记的尿素呼气试验： 包括包括1313C C或或1414C C尿素呼气试验：通过口服尿素呼气试验：通过口服1313C C或或1414C C尿素，经尿素，经胃粘膜胃粘膜HpHp尿素酶分解，产生尿素酶分解，产生NHNH4+4+和和HCOHCO3 3- -，经肠道吸收入，经肠道吸收入血后由呼吸道以血后由呼吸道以C
11、OCO2 2的形式呼出，检测呼出气体中含的形式呼出，检测呼出气体中含1313C C或或1414C C的的COCO2 2. . 13 13C C无放射性，但费用较高，无放射性，但费用较高， 14 14C C由一定的放由一定的放射性，仍属安全范围，但应避免用于儿童和孕妇。射性，仍属安全范围，但应避免用于儿童和孕妇。 呼气试验的优势是操作简便、快捷、准确、无创，检测呼气试验的优势是操作简便、快捷、准确、无创，检测阳性可确认现症感染，可用于判断治疗后的阳性可确认现症感染，可用于判断治疗后的HpHp根除效果根除效果，敏感性与特异性均高于，敏感性与特异性均高于95%95%。其缺点是对于近期接受。其缺点是对
12、于近期接受过质子泵抑制剂（过质子泵抑制剂（PPIPPI），铋剂及抗生素治疗的患者，），铋剂及抗生素治疗的患者，可出现假阴性结果。可出现假阴性结果。幽门螺杆菌临床检验方法及选择142.2.粪便粪便HpHp抗原检测：抗原检测： 采用采用HpHp特异抗原的抗体检测粪便中的特异抗原的抗体检测粪便中的HpHp抗原，目前用于抗原，目前用于HpHp检测显示有较好的敏感性和特异性检测显示有较好的敏感性和特异性 只有在胃粘膜表面有只有在胃粘膜表面有HpHp定植时，粪便中才可检测到定植时，粪便中才可检测到HpHp抗抗原，其结果也与胃内原，其结果也与胃内HpHp的菌量密切相关。的菌量密切相关。 目前对近日使用抗生素
13、、长期使用抑酸剂及铋剂者目前对近日使用抗生素、长期使用抑酸剂及铋剂者HpHp抗抗原检测的可靠性无报道原检测的可靠性无报道优点：是一种检测现症感染的无创方法，可用来评估根优点：是一种检测现症感染的无创方法，可用来评估根除治疗的疗效，敏感性和特异性均高于除治疗的疗效，敏感性和特异性均高于93%93%。缺点：是由于试剂来源受限的原因需等病人，在我国的缺点：是由于试剂来源受限的原因需等病人，在我国的开展并不普遍。开展并不普遍。幽门螺杆菌临床检验方法及选择153.3.血清血清HpHp抗体检测：抗体检测： HpHp感染后需经过一定时间（约感染后需经过一定时间（约1-31-3个月）才能产生抗体，个月）才能产
14、生抗体，而而HpHp根除后其抗体并不立即消失，也需要经过一定时间才根除后其抗体并不立即消失，也需要经过一定时间才逐渐消失。逐渐消失。 故故HpHp抗体检测一般作为非现症感染检测方法，可反映一段抗体检测一般作为非现症感染检测方法，可反映一段时间内时间内HpHp的感染情况，不受近期用药的影响，一般也不能的感染情况，不受近期用药的影响，一般也不能完全反映完全反映HpHp的现症感染情况。的现症感染情况。幽门螺杆菌临床检验方法及选择163.3.血清血清HpHp抗体检测：抗体检测： 由于由于HpHp感染一般都不能自行消失，如未经抗感染一般都不能自行消失，如未经抗HpHp治疗，治疗，HpHp抗抗体阳性即提示
15、有现症感染。体阳性即提示有现症感染。 一般一般HpHp根除后根除后3 3个月至半年后抗体滴度明显下降。个月至半年后抗体滴度明显下降。 抗体滴度持续不降常提示体内的抗体滴度持续不降常提示体内的HpHp残留。残留。 血清学方法的优点是不受抗生素、铋剂及血清学方法的优点是不受抗生素、铋剂及PPIPPI类药物应用类药物应用的影响，创伤小，病人的顺应性好，检测标本量大，可供的影响，创伤小，病人的顺应性好，检测标本量大，可供大规模筛查用。大规模筛查用。 缺点是总体准确性不满意，因血清中的抗体并不随着缺点是总体准确性不满意，因血清中的抗体并不随着HpHp的的根除而马上消失，不易反映现症感染，不适合评估根除治
16、根除而马上消失，不易反映现症感染，不适合评估根除治疗效果。疗效果。幽门螺杆菌临床检验方法及选择17总总 结结1.1.快速尿素酶试验：首选。操作简便快速，费快速尿素酶试验：首选。操作简便快速，费 用低，同时可确定胃十二指肠疾病。用低，同时可确定胃十二指肠疾病。2.132.13C C 或或1414C C尿素呼气试验：不需胃镜，易于接受尿素呼气试验：不需胃镜，易于接受，可用于治疗后复查。，可用于治疗后复查。3.Hp3.Hp培养：金标准，技术要求和费用高，主要用培养：金标准，技术要求和费用高，主要用于科研。于科研。4.4.组织学：组织学：GiemsaGiemsa染色，染色，HpHp数量少时易漏诊。数量少时易漏诊。5.5.血清血清HpHp抗体测定：常用于大规模人群筛查。抗体测定：常用于大规模人群筛查。1819
