1、实验诊断学临床 immune response抗原B淋巴细胞吞噬细胞T淋巴细胞致敏T淋巴细胞cytokine 浆细胞antibodyT 记忆细胞B 记忆细胞NKplement其它常用免疫检测免疫检测体液免疫细胞免疫肿瘤标志物自身自身免疫感染免疫检查移植免疫常用免疫检测方法常用免疫学检测方法发光物标记免疫分析酶标记、核素标记免疫分析快速金标记技术流式细胞免疫技术免疫印迹免疫比浊免疫沉淀做免疫学检查考虑点方法特异性时效性免疫抑制剂等药物影响检测物质性质正常值依据不同检测系统思考点方法灵敏性(参考值不一致性)第一节: :体液免疫检查体液免疫检查主要包含:n免疫球蛋白(immunoglobulin)n
2、补体(plement)一、免疫球蛋白测定 免疫球蛋白是一组具有抗体活性的球蛋白, ,由浆细胞合成分泌。n免疫球蛋白基本结构 依照重链抗原性可分为5 5类( (、), ,每个IgIg只能和一种轻链结合( ( 或)。IgG IgA IgM IgEIgG IgA IgM IgE特性主要特性生理变化IgGIgG约占总Ig75%Ig75%, ,能通过胎盘( (新生儿获得免疫抗体),),次级免疫应答。孕期22-28周含量与母体基本相同,出生3-4月最低,16岁前达成人水平。IgAIgA分为血清和分泌型,血清型占总Ig10-15%Ig10-15%, ,SIgASIgA存在于分泌液中与局部抗感染相关。新生儿含
3、量特别低,16岁前达成人水平。IgMIgM初级免疫应答,能够五聚体形式存在,占总Ig5-10%Ig5-10%, ,具特别强凝集抗原作用。20周起合成,新生儿为成人10%,8-10岁达成人水平。IgEIgE血清中含量最低IgIg, ,占总Ig0Ig0、002%002%, ,介导型过敏反应。新生儿含量极低,12岁前达成人水平。免疫球蛋白合成、分泌及主要功能合成分泌主要功能IgGIgG脾和淋巴结中浆细胞抗细菌、抗病毒、抗毒素,可通过胎盘、可被动免疫、预防接种产生主要抗体。IgAIgA肠系淋巴组织中浆细胞抗细菌、抗病毒、抗毒素,尤其分泌型在消化道、呼吸道等管腔抗感染。IgMIgM脾和淋巴结中浆细胞感染
4、后最早出现,杀菌、溶菌、溶血、凝集作用明显。IgEIgE粘膜固有层中浆细胞分泌参与I型变态反应IgG IgA IgM IgEIgG IgA IgM IgE病理变化增高降低IgGIgG慢性感染、慢性肝炎、肝硬化、淋巴瘤、和某些自身免疫性疾病( (如SLE)SLE), ,免疫增殖疾病( (如MMMM) )。先天免疫缺陷, ,获得性免疫缺陷( (如肾病综合征, ,营养不良),),使用免疫抑制剂, ,重链和轻链病等。 IgAIgA慢性感染、慢性肝炎、肝硬化、淋巴瘤、和某些自身免疫性疾病( (如SLE)SLE), ,免疫增殖疾病( (如MMMM),),肾病。IgAIgA降低见于呼吸道反复感染者, ,先天
5、免疫缺陷, ,获得性免疫缺陷( (如肾病综合征, ,营养不良),),重链和轻链病等。IgMIgM同IgG外,宫内感染可急剧增高。 基本同IgGIgEIgE同IgG外过敏性疾病可明显增,寄生虫感染,间质性肺炎等,特异性IgE增高与过敏原相关。基本同IgG慢性肝炎导致Ig增高机理n随着肝炎病情的加重和时间延长,受损的肝细胞作为自身抗原刺激淋巴系统,分泌大量抗体,使IgG、IgM及IgA同时增高,以IgG增高为主。肝硬化时肝细胞发生片状坏死,造成枯否氏细胞(Kupffer cell)功能失调,不能有效地发挥吞噬滤过作用,失去对抗原的处理能力,使门静脉血中的抗原不能被清除,抗体形成增多。肝脏免疫系统功
6、能严重失调,从而导致B淋巴细胞失控。二、M M蛋白检测nM蛋白(monoclonal immunoglobulins):由一种单克隆B淋巴细胞异常增殖所产生,具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片段(如轻链),一般不具抗体活性。n简述免疫球蛋白合成 正常情况合成一条重链需要18分钟,合成一条轻链只需10分钟,组成一条完整的Ig就会有一条多轻链过剩,过剩的轻链分泌到细胞外,10%肾小管内分解代谢,80%重吸收,10%排出体外(20ug/ml)。正常合成Ig,一个Ig分子只能和一种轻链结合,Ig轻链/ 之比为2:1。M M蛋白检测临床意义n阳性主要见于1 1、多发性骨髓瘤 2 2、巨球
7、蛋白血症3 3、重链病 4 4、半分子病5 5、恶性淋巴瘤 6 6、良性M M蛋白血症 过敏原检测吸入性和食入性多项特异性IgEIgE抗体检测( (I I型过敏反应) )n特异性IgEIgE指能与过敏原特异性结合的IgEIgE。n特异性IgEIgE是寻找型过敏反应变应原、并进行治疗较好方法。n原理将各种过敏原( (如花粉、牛奶) )与患者血清反应, ,血清中存在特异性IgEIgE则呈阳性反应。 多项食物特异性IgGIgG抗体检测( (食入性)()(IIIIII型过敏反应) )其它临床常用检测项目介绍n血液、尿液免疫球蛋白总轻链检测n血液、尿液免疫球蛋白游离轻链检测n血液免疫球蛋白IgG4检测二
8、、血清补体检测( (plementplement) ) 补体是主要由巨噬细胞分泌存在于新鲜血液中具有酶样活性的球蛋白, ,补体不耐热易降解, ,故补体检测须用新鲜血清。补体有C1-C9(C1-C9(经典途径) )及BFBF、DFDF、PFPF、HFHF、IFIF( (旁路途径) )和补体调节因子组成。临床常作总补体活性( (CH50CH50) )和单一因子C3C3、C4C4、BFBF及C1qC1q检测。补体两条激活途径区别 经典途径:抗原抗体复合物激活C1和C4、2,形成C3转化酶,然后是C5、6、7、8、9的激活,最后导致靶细胞溶解。 傍路途径:是细菌的内毒素和其它有关因子,直截了当激活C3
9、,再是C5、6、7、8、9的激活,最后导致靶细胞溶解。 不同点是路径不一样,傍路途径可最快地发挥效应,达到溶靶细胞作用。 其次是激活物质不一样,经典路径激活物质是抗原抗体复合物,产生后才能激活C1,因此需要时间长。傍路途经激活物质是内毒素,细菌感染后一经释放内毒素就能激活C3,因此有最快的反应。 总补体溶血活性( (CH50)CH50)检测 增高 急性感染、急性组织损伤、恶性肿瘤和风湿病早期, ,补体增高常与其它血浆蛋白改变相伴随。降低 自身免疫性疾病SLESLE的活动期 急性肾小球肾炎 冷球蛋白血症等 严重肝病变 先天性缺乏SRBCAbcSRBCAbC3C3、C4C4、C1qC1q、B B因
10、子检测参与途径降低增高C3经典、旁路1)合成障碍2)消耗过多3)先天缺乏1)急性炎症2)急性组织损伤3)排异反应C4经典C1q经典B因子旁路第二节 细胞免疫检查 淋巴细胞占外周血白细胞总数的20%40%,是机体免疫系统主要细胞,主要有TLC、BLC、NK、KC,淋巴细胞进一步可分为特别多亚型。淋巴细胞表面标志检测n簇分化抗原CDCD( (Cluster of differentiationCluster of differentiation) ): : 细胞在发育分化过程中, ,细胞表面抗原物质发生变化, ,CDCD抗原即指细胞变化过程中不同时期产生的抗原。目前临床CD4CD4( (THTH)
11、 )与CD8CD8( (TSTS) )检测应用广泛。簇分化抗原检测方法目前较多采纳流式细胞仪技术进行分析, ,流式细胞免疫分析技术为特异抗体加标记技术加单细胞检测。特点: :特异性、灵敏性高、检测周密度均较往常手工操作高特别多。流式细胞仪检测简介n 一、T T细胞表面标志检测n CD3 CD3( (总成熟T T细胞) )、E E玫瑰花试验检测临床意义 增高: :甲亢、淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力、器 官移植后排异反应 减低: :AIDSAIDS、胸腺发育不良、联合免疫缺陷、也可见 于放疗和化疗及免疫抑制类药物治疗 CD4CD4、CD8CD8检测临床意义 CD4CD4+ +增高: :类风湿关节
12、炎活动期, ,自身免疫疾病 CD4CD4+ +减低: :AIDSAIDS等病毒感染、免疫抑制剂治疗、严重 创伤、大手术等 CD8CD8+ +增高: :传染性单核细胞增多症和巨细胞病毒感染 急性期、慢性乙型肝炎等 CD8CD8+ +降低: :部分自身免疫性疾病、型糖尿病等T T淋巴细胞表面标志检测E E玫瑰花形成实验( (细胞表面受体概念) )TCSRBCSRBCSRBCSRBCSRBCSRBCSERSERSERSERSERSER二、B B细胞表面标志检测nB B细胞表面抗原和表面受体检测临床意义表面抗原CD19CD19、CD20CD20、CD21CD21、CD22CD22CD19CD19增高:
13、 :B B细胞系统恶性肿瘤CD19CD19降低: :体液免疫缺陷疾病D20D20在B B细胞激活后逐步降低CD21CD21为EBEB病毒和CD3CD3受体 CD22CD22在B B细胞激活时逐步增高 SmIg BSmIg B细胞表面特异性标志SmIgSmIg增高: :B B细胞恶性增殖相关疾病, ,如慢淋、毛细胞白血病、巨球蛋白血症。SmIgSmIg降低: :体液免疫缺陷相关疾病CD4/CD8CD4/CD8测定临床意义nCD4/CD8CD4/CD8测定临床意义增高: :多见于自身免疫性疾病, ,如类风关活动期、多发性硬化症、SLESLE、器官移植后排异反应、膜性肾小球肾炎等降低: :AIDSA
14、IDS、瘤型麻风病、恶性肿瘤发作期、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染急性期、血吸虫病等。三、淋巴细胞功能检测nNKNK细胞活性测定意义目前一般用流式细胞技术NKNK细胞无需抗原刺激可直截了当杀伤靶细胞, ,可释放r r干扰素( (IFN-rIFN-r) )、 肿瘤坏死因子 ( (TNF-TNF-) )和集落刺激因子( (GM-CSFGM-CSF) ), ,在机体抗肿瘤和抗感染免疫中发挥重要作用增高: :感染早期, ,器官移植干扰素等免疫增强剂治疗。降低: :恶性肿瘤, ,免疫缺陷疾病, ,使用免疫抑制剂。n抗体依赖性细胞介导的细胞毒测定( (antibody dependent antib
15、ody dependent cell mediated cytotoxicitycell mediated cytotoxicity, ,ADCCADCC) )增高: :自身免疫性疾病, ,移植免疫等降低: :恶性肿瘤、免疫缺陷、慢性肝炎、肾功能衰竭等三、细胞因子检查n细胞因子是由免疫细胞及相关细胞产生,特点高活性、多功能,一般为低分子蛋白。细胞因子种类繁多, ,功能复杂, ,多种因子可具有相同功能, ,各种细胞因子间可互相作用, ,细胞因子功能同时受到细胞因子受体功能影响, ,因此在选择检测项目和结果分析时要综合考虑。四、细胞因子检查 细胞因子种类繁多, ,功能复杂, ,多种因子可具有相同功
16、能, ,各种细胞因子间可互相作用, ,细胞因子功能同时受到细胞因子受体功能影响, ,因此在选择检测项目和结果分析时要综合考虑。细胞因子产生细胞靶细胞对靶细胞主要作用IL-2TLTLNKBL促进生长和细胞因子产生促进生长和活化生长及抗体合成IL-6MC、TL、内皮细胞TL& BL成熟BL 肝脏辅助刺激济生长急性期反应物TNF肿瘤坏死因子MC、TLPMN内皮细胞丘脑下部肝脏肌肉脂肪TL& BL活化(炎症)活化(炎症、凝集)发热急性期反应物(血清淀粉样A蛋白)分解蛋白(恶病质)辅助刺激剂IFN干扰素纤维母细胞、MC所有NK抗病毒,抑制细胞增殖,加强MHC1类表达和活化目前诊治常用检查提问希望目前常用
17、检查首选 甲肝早期？HAV-IgGHAV-IgMHAV-IgAHAV-IgE感染过甲肝？HAV-IgGHAV-IgMHAV-IgAHAV-IgE哮喘花粉引起？特异性IgG特异性IgM特异性IgA特异性IgE多发性骨髓瘤？补体CD4+免疫球蛋白细胞因子自身免疫病缓解？补体CD4+免疫球蛋白细胞因子艾滋病期判断？补体CD4+/CD8+免疫球蛋白HIV-Ab乙肝疫苗接种情况HBV-IgGHBV-IgMHBV-IgAHBV-IgE怀疑鼻咽癌？EBV-IgGEBV-IgMEBV-IgAEBV-IgE诊断试验评价的几个常用指标n敏感度( SensitivitySensitivity) )n特异度(spec
18、ificityspecificity) )n受试者工作特征曲线( accuracy accuracy operating characteristicoperating characteristic) )敏感度nClinical SensitivityClinical Sensitivity指由标准诊断法( (金标准) )确诊的病例组中经所选实验查出阳性例数, ,余下既为假阴性。临床敏感度实验真阳性数实验（真阳性+假阴性）（金标准阳性数）100%特异度nClinical SpecificityClinical Specificity指标准诊断方法确诊无病的对比组中经所选实验方法查出阴性例数,
19、,余下为假阳性。临床特异度实验真阴性数实验（真阴性+假阳性）（金标准阴性数）100%试验敏感度和特异度选择n一个理想实验方法, ,最佳临界值, ,从理论上讲特异度和敏感度最好都为100%100%, ,而实际上是不太估计的。敏感度和特异度一般呈反比关系, ,通常采纳统计学理论结合具体疾病选择最合适特异度和敏感度。n高敏感度实验适用于: : 初筛、初步诊断或排除诊断为目的。n高特异度试验适用于: : 确诊为目的时一般选择高特异度。凡假阳性结果会导致病人精神和肉体上严重危害, ,例如肿瘤、HIVHIV携带者要选择高特异度。理想状态试验敏感度和特异度真阳性例数真阴性假阴性假阳性定量试验结果值金标准+金
20、标准-临界值特异度100%敏感度100%(理想)临界值假设:某项目检测临界值为15ng/ml真阳性例数真阴性假阴性假阳性试验结果值金标准+金标准-临界值15ng/ml临界值假设:高敏感度情况(临界值降低为5ng/ml)真阳性例数真阴性假阴性假阳性试验结果值金标准+金标准-临界值5ng/ml临界值用ROCROC曲线选择临界值和试验方法nROCROC曲线在评价临床检验指标时, ,可表示该指标敏感度与特异度之间关系。依照曲线不仅可得到决定区分正常与异常临界点的重要信息, ,还可用于针对同一疾病不同诊断试验间比较。同一肿瘤二种肿瘤标志物选择100025 5075100敏感度%假阳性率（1-特异度）%肿
21、 瘤 标 志物1肿 瘤 标 志物20255075ROC曲线第三节 肿瘤标志物检测n肿瘤标志物概念: :一般而言, ,TMTM是指存在于肿瘤细胞内或肿瘤细胞表达及脱落的物质, ,或是宿主对肿瘤反应而产生的物质。由于肿瘤发生、发展原因至今尚未完全解决, ,提示肿瘤的标志也并未完全明确, ,因此肿瘤标志物概念还有待补充和修正。n广义上肿瘤标志物是指与肿瘤发生、发展、消亡相关的各种物质。n肿瘤细胞本身产生的肿瘤标志物常分为两类: : 1 1) )当理化、病毒、遗传等因素引起正常细胞内基因突变而发生癌变时, ,癌变细胞内及表达在其表面的蛋白质等成份发生某种变化, ,形成肿瘤抗原, ,这种抗原能够表达在正
22、常细胞, ,而肿瘤细胞表达高。也可因肿瘤导致组织结构变化, ,肿瘤抗原进入血液, ,如PSA PSA ; ;或仅在胚胎组织中表达, ,正常成人细胞中不表达, ,在发生肿瘤时又重新表达, ,如AFPAFP、CEACEA。 2 2) )由肿瘤细胞产生的特别抗原, ,这种抗原在性质上与正常细胞所表达的抗原不同。癌基因的发现证明正常细胞有癌基因存在, ,只是处于不表达状态, ,其一旦被激活, ,就失去正常调控, ,使细胞发生癌变。而由于癌基因表达产物与肿瘤抗原的关系至今未完全清楚, ,因此目前未发现特别特异的肿瘤抗原。n一般鉴定各种TMTM的方法为利用所制备的特异AbAb从体液或细胞组织中检测各种肿瘤
23、相关抗原。目前也有利用T T细胞受体( (T cell T cell receptor TCRreceptor TCR) )识别肿瘤抗原方法。肿瘤标志物的分类 瘤标志物目前有100多种。尚未有统一全面的分类标准。常分为血清/血浆肿瘤标志物和组织肿瘤标志物。组织分化标志转移潜在性标志癌基因及抑癌基因增殖标志血清肿瘤标志物血清TM胚胎性抗原激素类酶类标志物糖类抗原AFPCEATPASCCCA125、CA15-3CA19-9、CA50CA72-4、CA242SCCTPSA、FPAS-AFU、r-GTNSE、AKPCTHCGGH基因类肿瘤标志物其它癌基因和抑癌基因2-MGSFTG人体器官与肿瘤标志物理
24、想肿瘤标志物的要求理想TM灵敏含量与肿瘤病情相符部位特异肿瘤特异早发现早诊断判断复发区分良性与恶性鉴定肿瘤类型器官部位特异病程和治疗观察TMTM检测临床意义n辅助临床早发现、早诊断n帮助区分区分良性与恶性肿瘤n协助临床肿瘤类型鉴定及肿瘤部位鉴别n帮助临床对肿瘤病程判断n治疗效果观察,提早判断复发甲胎蛋白 AFP由胚胎卵黄囊、胚胎肝细胞及其他内胚层分化的胃肠组织合成。发生在妊娠12周,出生后降低。当肝细胞或生殖腺胚胎组织发生恶性病变时,相关基因重新被激活,细胞重新合成AFP,血液中含量增加。n临床应用: AFP增高为原发性肝癌重要指标之一。特异性强、敏感度高相对较高。AFP常用于原发性肝癌临床检
25、查及普查。大部分患者呈持续性高水平升高,部分患者呈低水平增高。 AFP阴性并不排除原发性肝癌,据统计18%-20%的原发性肝癌患者血清AFP正常。此时需结合临床及其他检测指标来降低假阴性。l年龄因素:AFP对原发性肝癌的诊断率随患者年龄的增加而逐渐下降。对老年人AFP正常或轻微升高不能排除肝癌的估计性。l预后:原发性肝癌血清AFP水平与预后有关。肝癌切除后AFP能否正常或上升是判断预后的关键因素。l其他肿瘤 部分卵黄囊肿患者血清AFP上升,胃癌、结肠癌等内胚层衍生的组织发生的癌,即使未发生肝转移也合成AFP。而非内胚层衍生组织的癌,即使转移到肝脏也不合成AFP,血清AFP是否上升与癌的原发部位
26、有关。与绒毛膜促性腺激素联合检测有助于生殖细胞肿瘤的分类与分期。l肝脏良性病变 肝脏良性病变时,AFP也可增高。病毒性肝炎患者AFP轻度增高,慢性肝炎患者约有20%AFP增高。暴发性肝炎患者AFP明显增高。病理检查时可发现AFP升高与肝细胞再生,同时肝脏受损有关系。CEA检测 癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)是一种MW为150K300KD的糖蛋白,1965年Gold和Freedman首先自人结肠癌组织发现,是胚胎性癌抗原。主要存在于胎儿消化道上皮组织、胰脏和肝脏。正常成人血清中CEA含量极低,恶性肿瘤的癌细胞分泌CEA进入血液和淋巴,导致血中CEA水平增高。
27、n 临床应用: 结肠癌患者70%90%显示CEA高浓度阳性,关于CEA升高的结肠癌患者,血清CEA水平与癌肿大小、有无转移存在一定关系,当发生肝转移时,CEA升高更为明显。 血清CEA水平变化与结肠癌分期紧密相关。明显升高时主要见于中晚期肿瘤,进展期结肠癌(Duke分期 C、D期)时阳性率可达70%以上,而Duke A、B期时敏感性只有30%左右l其他肿瘤 其他消化道肿瘤也可检测到CEA阳性,如:大肠癌患者可达65%-75%的阳性。CEA与大肠癌的Duke分期有明确关系,可用于治疗效果的监测;内胚层衍生的癌,如胰腺癌、肺癌以及胃癌可导致CEA水平增高。非内胚层衍生的癌,如乳腺癌和子宫癌也能使C
28、EA水平增高。l良性肿瘤10%-20%,以及某些内胚层发生的重症能够导致CEA增高。CEA检测对肿瘤术后复发敏感性特别高,可达80%以上。往往早于临床、病理检查、X光检查等。l非肿瘤疾病 肠道炎症、肾功不全、结肠息肉、肝硬化、慢性肝炎、闭锁性黄疸等也可导致CEA水平增高 CEA并非一种癌的特异性抗原,而是癌的一种相关抗原。缺少特异性,作为筛选指标时应注意。常用于肿瘤患者的监测,疗效的判断。前列腺特异抗原(PSA)nPSA为一种丝氨酸蛋白水解酶,存在于前列腺腺泡和导管上皮细胞胞浆中。在血液中以3种不同分子形式存在,即游离PSA;与a1-抗糜蛋白酶(ACT)结合形成PSA-ACT;与a2-巨球蛋白
29、结合形成PSA-a2M。血液中主要为PSA-ACT。正常情况下前列腺腺泡内容物(富含PSA)与淋巴系统间存在由内皮层、基底细胞层和基底膜构成的屏障相隔。当肿瘤或其他病变破坏了这道屏障时,腺管内容物即可漏入淋巴系统并随之进入血液,导致血中PSA水平增高。n临床意义l前列腺癌60-90%血清t-PSA增高l术后t-PSA无明显降低或再次增高,提示预后较差或肿瘤转移和复发。l前列腺增生、前列腺炎等良性疾病也会有轻度增高。l肛门指检、前列腺按摩、前列腺手术等也会引起增高,注意鉴别,必要时数周后进行PSA再次检测。lf-PSA/t-PSA检测比值下降时对前列腺癌诊断意义较大。CA 19-9 CA19-9
30、(carbohydrate antigen 19-9)是一种粘蛋白型的糖类蛋白肿瘤标志物,为细胞膜上的糖脂质,因由鼠单克隆抗体116NS19-9识别而命名。是迄今报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在,分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠和正常成年人胰腺、胆管上皮等处。n临床应用:l消化道恶性肿瘤 胰腺癌、肝胆系癌、胃癌、结直肠癌的CA 19-9水平分别是正常均值的几百倍。而阳性率以胰腺癌为最高,故CA19-9是胰腺癌较好的标志。l胰腺癌诊断中的应用: 大部分胰腺癌患者血清CA19-9水平明显增高。假如以正常参考范围上限(37 U / mL)为诊断标准,敏感性和特异性均可
31、达90%以上。CA19-9水平与肿瘤的时期有关,血清中含量的高低提示手术的难易程度,术前CA19-9水平对预后有一定提示作用,低者预后较好,术后CA19-9水平降至正常者生存期长于未下降者。 肿瘤复发时,CA19-9可再度升高,同时发生于影像学诊断之前。因此可用作监测肿瘤的复发。l其他恶性肿瘤 卵巢癌、淋巴瘤、胃癌、肝癌、食管癌、乳腺癌的阳性率较低。胃癌的阳性率约为25%-60%,且与肿瘤分期有关。关于胃癌患者,同时检测CEA可提高阳性率。直肠、结肠癌患者,阳性率为18%-58%,与肿瘤分期有关。 同时测定CEA可提高敏感度,假如治疗有效,CA19-9下降速度较CEA快。胆囊癌、胆管癌、胆道癌
32、的CA19-9阳性率较高,l使用原则:CA19-9与AFP、CEA联合检查,有助于提高胃肠道肿瘤的诊断效率l非肿瘤性疾病 低浓度增高、一过性增高可见于慢性胰腺炎、胆石症、肝硬化、肾功能不全等。CA 15-3 属于糖蛋白类抗原,主要用于乳腺癌的监测和筛选,以及用于评价患者预后情况的指标。n 临床应用:l 乳腺癌:乳腺癌患者30-50%增高,有转移灶者增高可达80%,发现癌转移的敏感性比癌胚抗原和组织多肽抗原高,且早于临床发现转移。 CA15-3是监测病人术后复发情况,特别是癌症转移患者的术后监测的重要指标,血清CA15-3水平增高,提示乳腺癌的局部或全身复发,且增高早于核素检查和临床检查。 可与
33、CA125联合检查,用于卵巢癌复发的早期诊断,与CEA联合检测时,可提高乳腺癌早期诊断的敏感性和特异性。l其他恶性肿瘤 肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌等,也可出现血清CA15-3增高。l非恶性肿瘤疾病 良性乳腺疾病、卵巢疾病等可引起CA15-3的水平增高。2、结直肠癌 结直肠癌在欧美国家发病率较高。在我国随着人民生活水平提高,结直肠癌发病率也呈增高趋势。主要肿瘤标志物有:(1)CEA:局限性或早期可手术根治的结直肠癌CEA升高低于10%,而在远处转移的患者中CEA增高者可达90%。(2)CA19-9(3)CA72-4(4)CA242(5)组织多肽抗原(TPS)肿瘤标志物的选择建议TM肝癌AFPCE
34、A CA19-9 AFUSF胰腺癌CA19-9CA242CA50CA125 CEA胃癌CEACA19-9CA72-4PGCA242结直肠癌CEACA19-9CA72-4CA242TPS肺癌NSESCCCEACYFRA21-1TPS乳腺癌CEACA15-3Her-2/neuTPS女性生殖系统肿瘤宫颈癌HPV卵巢癌HE4/CA125生殖细胞癌HCG前列腺癌PSAPSMPACP恶性淋巴瘤LDH2-MG CA125TNF脑胶质瘤 NSE BEHABGFAPVEGF鼻咽癌VCA-IgAEA-IgASCCTPS骨转移肿瘤骨吸收指标 骨形成指标几种肿瘤标志物检测意义标志物性质相对特异肿瘤其它肿瘤其它疾病AF
35、P甲胎蛋白胚胎类糖蛋白原发性肝细胞癌睾丸癌、畸胎瘤肝炎、肝硬化等CEA癌胚抗原胚胎类糖蛋白直肠癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌乳腺癌、肺癌等肠道息肉、炎症,肝、肺等炎症PSA前列腺额特异抗原具有酶样活性蛋白前列腺癌肾癌、膀胱癌前列腺肥大和炎症、泌尿生殖系统疾病CA15-3糖蛋白乳腺癌肺癌、肾癌等肝、肠等非肿瘤疾病CA125糖蛋白卵巢癌乳腺癌、胰腺癌等卵巢囊肿、肝炎等CA199糖蛋白胰腺癌胃癌、结肠癌等急性胰腺炎、肝硬化等几种肿瘤标志物检测意义标志物性质相对特异肿瘤其它肿瘤其它疾病CA72-4糖蛋白胃癌结肠癌、卵巢癌SCC糖蛋白鳞状上皮细胞癌抗原胚胎类糖蛋白子宫颈癌肺癌、鼻咽癌肝炎、结核TPA组织多肽抗
36、原胚胎类糖蛋白支气管癌膀胱癌肝炎PAP前列腺酸性磷酸酶酶前列腺癌前列腺肥大或炎症NSE神经元特异性烯醇化酶酶小细胞肺癌其他非小细胞肺癌、神经内分泌肿瘤等血小板和红细胞中存在肿瘤标志物作为体检项目问题 恶性肿瘤呈上升趋势的今天,迫切需要简便、廉价、适用于肿瘤初筛及大规模人群普查的肿瘤指标。遗憾的是目前实验室开展的肿瘤标志物检测项目,普遍不适合于肿瘤普查。因此要幸免盲目、随意、无依照的挑选肿瘤标志物进行筛查。针对特定区域某种肿瘤高危人群的检查,也要选择特异度及敏感度相对较好肿瘤标志物。也可在体检其它检查可疑的基础上,再以肿瘤标志物检测。 用蛋白芯片技术注意特异性较差,需用其它方法复查。目前诊治常用
37、检查提问目前常用检查首选 多选肝癌？NSEAFPPSACa199女性体检CEACa153PSACa125肺癌？NSESCCCEAAFP癌症金标准癌基因AFPPSACEA胰腺癌NSEAFPPSACa199肿瘤标志物增高炎症恶性肿瘤良性肿瘤非特异反应PAS持续明显增高前列腺癌术后不良前列腺炎治疗无效术后复发PAS逐步降低治疗无效术后有效前列腺炎治疗有效术后复发 人类具有完善的免疫系统, ,正常情况下, ,免疫系统具有识别自我与异己的功能, ,因而能够防御异物入侵, ,而对自身组织不产生或产生极微弱的免疫应答反应, ,称自身耐受。一旦机体外部或内部因素发生改变, ,可使免疫耐受受到影响, ,导致免疫
38、系统对自身组织产生明显的免疫应答反应。如是低限度和非持久性, ,一般影响不大, ,高限度和持久存在则引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病血清学检测方法特别多, ,特异性较差, ,动态检测可帮助临床对预后及疗效观察。第四节: : 自身抗体检测荧光免疫技术n目前常用于免疫组化和自身抗体检测, ,特点可用于定位。细胞核细胞核荧光标记抗人Ig自身抗体免疫印迹试验抗核抗体检测2、可提取核抗原抗体检测 免疫印迹试验抗核抗体检测自身抗体酶标记抗人IgEE底物E抗核抗体检测1、间接免疫荧光抗体法检测抗核抗体特点:敏感度高、特异性差,常用于筛查自身免疫性疾病 原理:以Hep-2和鼠肝作为抗原,固定于载玻片上,与受
39、检者血清反应,血清中抗体与载玻片上抗原结合,再加入荧光标记抗人Ig。在荧光显微镜下观察细胞核上荧光模型。荧光模型主要有:(1)核均质型:相关抗体为抗ds-DNA,抗组蛋白和核小体抗体(2)核膜型:抗核孔复合物和抗板层素(3)颗粒型:抗U1-PNP、抗Sm、抗SS-A、抗SS-B(4)核点型:P80盘曲蛋白抗体、Sp100抗体、(5)着丝点型:与着丝点抗体相关(6)核仁型:RNP抗体、抗Scl70抗体等相关ENA自身抗体谱免疫印迹检测常见可提取核抗原抗体n双链DNAnSmn核糖体nScl-70nJo-1nSS-BnSS-AnRNP常见自身抗体检测及临床意义 名称 临床意义类风湿因子( (RFRF
40、) )类风湿性关节炎及其它免疫性疾病抗ds-DNAds-DNA抗体 SLESLE的较特异性抗体抗SmithSmith抗体 SLESLE的较特异性抗体抗组蛋白抗体 药物性狼疮及其它免疫性疾病抗核糖核蛋白抗体 混合结缔组织病、SLESLE等抗SS-ASS-A和SS-BSS-B抗体 干燥综合症、SLESLE、RARA等抗Scl-70Scl-70抗体 系统性硬化症等抗线粒体抗体 与自身免疫性肝病相关常见自身抗体检测及临床意义名称 临床意义Jo-1Jo-1抗体 肌炎和间质性肺纤维化抗中性粒细胞胞浆抗体 血管炎症、自身免疫 性肝病等抗血小板抗体 血小板减少症抗平滑肌抗体 自身免疫性肝病抗精子抗体 男子不育
41、症抗心磷脂抗体 SLESLE、RARA等疾病HLA-B27 HLA-B27 强直性脊椎炎等常见自身抗体检测及临床意义名称 临床意义抗肌动蛋白抗体: : 自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化抗肾小球基底膜抗体: : 为抗基底膜抗体肾小球肾炎特异抗体抗中性粒细胞胞浆抗体: : 主要见于血管炎症坏死相关的系列疾病抗心磷脂抗体检测: :与SLESLE相关, ,并与血小板减低和自发性流产相关抗平滑肌抗体检测: : 主要见于自身免疫性肝病抗甲状腺球蛋白抗体( (TgAbTgAb):):本氏甲状腺炎、GravesGraves病等促甲状腺激素受体抗体( (TRAbTRAb):):GravesGraves病等甲状
42、腺过氧化物酶抗体( (TPOAbTPOAb): ): 本氏甲状腺炎等甲状腺自身抗体检测要结合激素测定和影像学第五节: : 感染免疫检查n人体感染病原体后经过一段时间产生抗体一般可持续数月或数年, ,因此抗体检测可判断现症感染和既往感染情况。 风湿热是一种变态结缔组织疾病, ,常见有风湿性心脏病、风湿性关节炎等。风湿热常由A A 组溶血性链球菌引起, ,此菌可产生一种“O”O”溶血素具有抗原性, ,ASLOASLO就是检测机体产生的抗溶血素“O”O”抗体。链球菌感染后抗“O”O”的产生一般在一周左右, ,4-64-6周达高峰。可见于风湿性心脏病、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、呼吸道感染等。ASL
43、OASLO动态检测对病程及疗效观察意义较大, ,结合CRPCRP和ESRESR检测临床意义更大。抗链球菌溶血素“O”O”检测( (anti-streptolysin O anti-streptolysin O ASLOASLO) ) 伤寒是由伤寒杆菌引起的急性肠道传染病。伤寒杆菌有两种抗原, ,即菌体抗原“O”O”抗原和鞭毛抗“H”H”原。肥达氏反应就是检测由上述两种抗原刺激机体产生的抗体。 肥达氏反应用于辅助诊断伤寒和副伤寒感染, ,由于抗体产生需要一定时间, ,故第一周阳性率10%10%, ,第二周达60%-70%60%-70%, ,第四周达90%90%。临床常以二次标本( (早期和中期或
44、恢复期) )的凝集效价变化来判断是否感染。伤寒病人的“O”O”抗体较“H”H”出现早, ,存在时间短, ,“H”H”相反。预防接种可引起“H”H”增高, ,“O”O”正常。伤寒和副伤寒沙门氏菌免疫检测OH估计情况升高正常伤寒发病早期、或其它沙门氏菌感染交叉反应正常升高预防接种、既往感染升高升高患伤寒估计性较大升高 A/B/C升高估计患副伤寒甲、乙、丙肥达氏试验流行性脑脊髓膜炎免疫学检测n流行性脑脊髓膜炎由脑膜炎奈瑟菌所致。n检测脑脊液、血清、尿液中抗原或抗体可辅助流脑的临床诊断。n如检测到脑膜炎奈瑟菌抗原可作为流脑确诊,抗体在感染一周后出现,二月后逐渐下降。接种疫苗抗体可维持一年以上。 结核分
45、枝杆菌主要引起细胞免疫, ,但也可引起体液免疫产生特异性IgGIgG抗体, ,临床常用ELISAELISA方法检测特异性IgGIgG抗体, ,PCRPCR方法检测结核DNADNA, ,但两种方法均存在部分假阳性, ,样本找结核杆菌方法最为经典。结核菌培养时间长, ,敏感度低, ,目前T-SPOTT-SPOT试验认为对诊断结核敏感度和特异性均较高。结核抗体和DNADNA检测幽门螺杆菌检测n幽门螺杆菌( (HpHp) )感染是人类最常见的慢性感染之一, ,与胃十二指肠等消化系统疾病紧密相关。由于HPHP感染具较大危害性, ,故近几年HPHP检测方法被高度重视, ,也取得飞速发展。目前诊断幽门螺杆菌
46、感染的方法特别多, ,依据是否需做内窥镜检查分为侵入性和非侵入性两大类 。侵入性常做尿素酶试验。非侵入性试验除C C1313或C C1414 呼气试验外, ,目前血清学HPHP是诊断现症感染较好方法, ,易于儿童HPHP感染检测和体检普查, ,现症感染特异性抗体检测意义较大。n布氏杆菌病凝集试验 布氏杆菌感染病。牧区多见n柯萨奇病毒抗体检测 心肌炎、手足口病n轮状病毒抗体检测 婴幼儿腹泻n嗜异体凝集试验 EB病毒检测取代,传染性单核细胞增多症n汉坦病毒IgM抗体 肾综合症出血热TORCHTORCH感染免疫学检测病原类型常规检测引起主要疾病弓形虫toxoplasma gondii寄生虫IgM抗体
47、人畜共患。胎儿感染,可引起流产、中枢神经疾病等风疹病毒Rubella virusRNAIgG/IgM抗体胎儿感染,可引起流产、畸形等巨细胞病毒Cytomegalo virusDNAIgG/IgM抗体,核酸成人99%感染过CMV,免疫功能低下者易再感或复燃,CMV可通过胎盘感染胎儿,影响较大单纯疱疹病毒Herps simplex virusDNAIgG/IgM抗体疱疹性口腔炎、角膜炎、脑膜炎等,孕妇感染可导致流产等梅毒血请学检测 当机体感染梅毒螺旋体后, ,会产生二种抗体, ,一种为抗类脂抗体, ,另一种为抗螺旋体抗原抗体, ,后者较前者特异性强。由于目前螺旋体体外培养较难, ,故血清学检测是目
48、前临床常用检查方法。常用方法有快速血浆素反应( (RPRRPR) )和梅毒螺旋体血凝试验( (TPPATPPA),),后者特异性高一般用于确定试验, ,RPRRPR一般作为现症感染标志。梅毒血清学检测n非特异性与特异性梅毒螺旋体血清学试验 感染梅毒螺旋体后,人体能够产生两类抗体,即非特异性抗体和特异性梅毒螺旋体抗体。 机体产生的非特异性抗体叫反应素(reagin),是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出的一种抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。一般在感染后57周产生,经正规治疗后可逐渐消失。另一种为特异性抗体,既抗梅毒螺旋体抗体,感染两周后即可测出,IgG类抗体可维持特别长时间,有些可终身阳性。n
49、梅毒血清学试验依照抗原不同分为两类,一类是非梅毒螺旋体抗原血清试验,如快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)等。另一类为特异性梅毒螺旋体抗体检测,目前常用实验为梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA) 。n 轮状病毒抗体或RNA检测n轮状病毒分为7组,A组主要引起婴幼儿腹泻,B组引起成人腹泻。n快速金标记法粪便中轮状病毒检测应用最为广泛。n轮状病毒IgM抗体检测,阳性可提示现症感染。nIgG抗体阳性表示既往感染。nPCR检测RNA特异性强,但时间长,影响治疗。传染性单核细胞增多症检测n传染性单核细胞增多症由EB病毒感染所致。n目前临床应用EBV-IgM检测替代嗜
50、异体凝集实验,特异性较强。n少儿期一般都曾经感染EBV,在机体抵抗力下降时,或应用免疫抑制剂时会导致EBV复燃,引发传染性单核细胞增多症。n日本血吸虫抗体检测n机体感染血吸虫后可产生特异抗体, ,可作血清IgGIgG、IgMIgM、IgEIgE检测, ,帮助临床诊断和流行病调查。n常用方法: :环卵沉淀试验, , ELISAELISA法特异抗体检测n血吸虫感染早期引起肝、脾肿大, ,晚期发展为门脉高压、巨脾和腹水。n简介囊虫抗体检测 猪肉绦虫的幼虫寄生人体, ,机体产生特异抗体、寄生虫感染免疫学检测 CRP CRP是一种急性时相蛋白, ,由肝脏合成, ,能激活补体促进细胞吞噬等免疫功能。近年来
