1、T-SPOT TBT-SPOT TB与预防性抗结核治疗与预防性抗结核治疗 硕士研究生：李思颖硕士研究生：李思颖 导导 师：杨益大教授师：杨益大教授 2015.11.62015.11.6 传染病诊治国家重点实验室传染病诊治国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心感染性疾病诊治协同创新中心浙江大学医学院附属第一医院浙江大学医学院附属第一医院主要内容主要内容 T_SPOT_TBT_SPOT_TB的原理的原理01 预防性抗结核治疗对象及方案预防性抗结核治疗对象及方案04 T_SPOT_TBT_SPOT_TB结果判读结果判读03 T_SPOT_TBT_SPOT_TB检测方法检测方法02T_SPOT.TB
2、T_SPOT.TB的原理的原理l 外周血外周血T-SPOTT-SPOT即利用酶联免疫斑点技术（即利用酶联免疫斑点技术（ELISPOTELISPOT）通过检）通过检测结核分枝杆菌特异性抗原刺激后外周血单个核细胞释放的测结核分枝杆菌特异性抗原刺激后外周血单个核细胞释放的- -干扰素来检测抗原特异性干扰素来检测抗原特异性 淋巴细胞的应答反应，从而判断淋巴细胞的应答反应，从而判断结核感染状态。结核感染状态。l 每一个斑点代表一个分泌细胞因子的每一个斑点代表一个分泌细胞因子的T T细胞，记数斑点数量可细胞，记数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的以获得外周血中结核致敏的T T细胞数量。细胞数量。 T_SP
3、OT.TBT_SPOT.TB的原理的原理 结核特异性抗原结核特异性抗原 早期分泌靶向抗原早期分泌靶向抗原(ESAT-6)(ESAT-6)01 培养滤过蛋白培养滤过蛋白(CFP-10) (CFP-10) 02由结核杆菌基因组由结核杆菌基因组RD1RD1区相同的操纵子编码的蛋白，只存在于结核分枝杆区相同的操纵子编码的蛋白，只存在于结核分枝杆菌群菌群( (包括人型、牛型和非洲型分枝杆菌包括人型、牛型和非洲型分枝杆菌) )及其它几种致病性分枝杆菌及其它几种致病性分枝杆菌( (如堪如堪萨斯分枝杆菌，萨斯分枝杆菌，Szulgai Szulgai 分枝杆菌，海分枝杆菌分枝杆菌，海分枝杆菌) )中，是中，是T
4、 T 细胞的靶抗原，细胞的靶抗原，能诱导皮肤迟发型超敏反应并刺激外周血单核细胞产生能诱导皮肤迟发型超敏反应并刺激外周血单核细胞产生- -干扰素。干扰素。 T_SPOT.TBT_SPOT.TB检测方法检测方法 T-SPOTT-SPOT检测过程：收集检测过程：收集1 1* *106106外周血单个核外周血单个核细胞，平均分为细胞，平均分为4 4份，每份细胞数为份，每份细胞数为2.52.5* *105105，分别，分别加入空白对照、抗原加入空白对照、抗原A A（ESAT-6ESAT-6）、抗原、抗原B B（CFP-CFP-1010）、阳性对照孔中。然后使用、阳性对照孔中。然后使用ELISPOT EL
5、ISPOT 法，并分法，并分别记录每个孔中斑点形成细胞数目（别记录每个孔中斑点形成细胞数目（SFCsSFCs）。）。T_SPOT.TBT_SPOT.TB检测方法检测方法 当空白对照当空白对照5 SFCs5 SFCs时，只要（时，只要（A-A-空白）空白）或者（或者（B-B-空白）空白）6 6 SFCsSFCs考虑为阳性，存考虑为阳性，存在结核感染。在结核感染。当空白对照当空白对照6 SFCs6 SFCs时，要求时，要求A A或或B B孔细胞孔细胞数大于空白两倍才考数大于空白两倍才考虑阳性。虑阳性。T_SPOT.TBT_SPOT.TB结果判读结果判读 注：部分化验单回报结果为注：部分化验单回报结
6、果为A A、B B实验孔出现斑点形成细胞数目（实验孔出现斑点形成细胞数目（SFCsSFCs）减去空白对）减去空白对照后乘以照后乘以4 4，因此化验单上界值为，因此化验单上界值为6 SFCs6 SFCs* *4=244=24。只要只要A A或者或者B B值值2424则考虑存在结核感染，则考虑存在结核感染，ABAB值之和大于值之和大于500-600500-600考虑活动性结核可考虑活动性结核可能。能。T_SPOT.TBT_SPOT.TB结果的判读结果的判读 01 02 无反应性：表明样本中可能不存在针对结无反应性：表明样本中可能不存在针对结核杆菌特异的效应核杆菌特异的效应T T细胞细胞 有反应性：
7、表明样本中存在针对结核杆菌有反应性：表明样本中存在针对结核杆菌特异的效应特异的效应T T细胞细胞T_SPOT.TB T_SPOT.TB 阳性阳性l 活动性结核病：活动性结核病：结核中毒症状，影像学检查支持结核病诊断，临床排除其他疾病结核中毒症状，影像学检查支持结核病诊断，临床排除其他疾病l 结核感染状态：结核感染状态：结核中毒症状，无影像学等临床检查证据，临床排除其他疾病，试验性结核中毒症状，无影像学等临床检查证据，临床排除其他疾病，试验性抗结核治疗有效抗结核治疗有效l 既往结核感染：无结核中毒症状，影像学显示病灶存在（钙化或陈旧性病灶），存在结既往结核感染：无结核中毒症状，影像学显示病灶存在
8、（钙化或陈旧性病灶），存在结核病史核病史l 潜伏性结核感染：无潜伏性结核感染：无结核中毒症状，无影像学等临床检查证据，根据发展为活动性结核结核中毒症状，无影像学等临床检查证据，根据发展为活动性结核病风险程度决定是否进行预防性抗结核治疗病风险程度决定是否进行预防性抗结核治疗l 非结核分枝杆菌感染：非结核分枝杆菌感染：4 4种环境分枝杆菌的感染（海、堪萨斯、苏尔加、戈登分枝杆菌）种环境分枝杆菌的感染（海、堪萨斯、苏尔加、戈登分枝杆菌）l 结核菌素试验结核菌素试验TSTTST所致所致T-SPOTT-SPOT假阳性：需同时检测假阳性：需同时检测T-SPOTT-SPOT和和TSTTST时，时，T-SPO
9、TT-SPOT的血样最好的血样最好在在TSTTST实验前或者实验后实验前或者实验后3 3天内采取天内采取T_SPOT.TB T_SPOT.TB 阴性阴性l因感染阶段不同引起的假阴性结果因感染阶段不同引起的假阴性结果，如标本是在细胞免疫发生前获取的，如标本是在细胞免疫发生前获取的l少数少数免疫系统功能不全免疫系统功能不全的情况，多见于严重免疫缺陷的病人的情况，多见于严重免疫缺陷的病人l 以及其它免疫学、实验非正常操作的差异以及其它免疫学、实验非正常操作的差异l 高龄、超重、检测前病程超过高龄、超重、检测前病程超过6 6个月肺结核患者出现个月肺结核患者出现T-SPOT.TBT-SPOT.TB的假阴
10、性独立的假阴性独立危险因素危险因素患者体内未检测到结核分枝杆菌特异性效应患者体内未检测到结核分枝杆菌特异性效应T T细胞。假阴性细胞。假阴性常见于：常见于：T_SPOT.TB T_SPOT.TB 特点特点l 既往结核病史或影像学提示陈旧性肺结核、有结核密切接触史既往结核病史或影像学提示陈旧性肺结核、有结核密切接触史或高潜伏性结核感染率可使其诊断活动性结核病的特异性降低。或高潜伏性结核感染率可使其诊断活动性结核病的特异性降低。l 只与外周血中结核特异性抗原刺激产生的效应只与外周血中结核特异性抗原刺激产生的效应T T细胞有关，与感细胞有关，与感染部位无关。染部位无关。l 受年龄、机体免疫状态、受年
11、龄、机体免疫状态、HIVHIV感染、营养不良等影响较小。感染、营养不良等影响较小。l 抗结核治疗后效应抗结核治疗后效应T T细胞消失，可使斑点数减少或使结果呈阴性。细胞消失，可使斑点数减少或使结果呈阴性。l 与是否排菌无关。与是否排菌无关。我院我院T_SPOT.TBT_SPOT.TB试验结果试验结果 l 结核病中的敏感性为结核病中的敏感性为83.2%,83.2%,特异性为特异性为81.6%,81.6%,阳性预测值为阳性预测值为64.5%,64.5%,阴阴性预测值为性预测值为92.3%92.3%。l 肺外结核组的阳性率低于肺结核，结核性胸腔积液患者，抽取积肺外结核组的阳性率低于肺结核，结核性胸腔
12、积液患者，抽取积液行液行T-SPOT TBT-SPOT TB，其，其阳性率高于血标本。阳性率高于血标本。l 结核患者中结核患者中, ,免疫抑制状态与糖尿病对免疫抑制状态与糖尿病对T-SPOTT-SPOT结果无明显影响。结果无明显影响。 （回顾性分析（回顾性分析11811181例例20102010年年1111月至月至20122012年年5 5月在浙医一院行月在浙医一院行T-SPOTT-SPOT试验的患者资料）试验的患者资料）预防性抗结核治疗预防性抗结核治疗对以下高危人群进行筛查，若对以下高危人群进行筛查，若T-SPOTT-SPOT阳性，则应予以预防性抗结核治疗：阳性，则应予以预防性抗结核治疗：l
13、 近期有活动性结核患者接触史近期有活动性结核患者接触史l 胸片提示存在陈旧性结核病灶者胸片提示存在陈旧性结核病灶者l HIVHIV感染者感染者l 拟行器官移植者拟行器官移植者l 接受免疫抑制剂治疗者（包括每天使用泼尼松接受免疫抑制剂治疗者（包括每天使用泼尼松15mg15mg超过超过1 1个月者）个月者）l 矽肺患者矽肺患者l 透析治疗患者透析治疗患者 03预防性抗结核治疗方案预防性抗结核治疗方案 01 6 6个月个月INHINH：5mg/kg5mg/kg（300mg/d300mg/d）QD QD 或或15mg/kg15mg/kg（900mg/d900mg/d）BIW BIW 3TNH-RPT 3TNH-RPT：异烟肼：异烟肼15mg/kg15mg/kg（900mg/d900mg/d）+ +利利福喷丁福喷丁10mg/kg10mg/kg（900mg/d900mg/d）QIW (QIW (需要需要DOTDOT） 02 9 9个月个月INHINH：5mg/kg5mg/kg（300mg/d300mg/d）QD QD 或或15mg/kg15mg/kg（900mg/d900mg/d）BIW BIW 长期应用异烟肼患者可予以服用维生素长期应用异烟肼患者可予以服用维生素B6B6预防周围神经炎，同时应预防周围神经炎，同时应注意监测肝功能注意监测肝功能
