1、 血友病血友病A与凝血因子与凝血因子12 我国我国F产品概况与研发热点产品概况与研发热点3 血源性血源性F与重组与重组F的特点的特点一、血友病一、血友病A与凝血因子与凝血因子 血友病血友病A（hemophilia A，HA） 又称血友病甲，是一种X染色体连锁的凝血因子凝血因子量和分子结构异常量和分子结构异常引起的隐性遗传性出血性疾病，临床特点为“自发性”关节出血和深部位组织出血。一、血友病一、血友病A与凝血因子与凝血因子 凝血因子凝血因子（coagulation factor ，F ） F基因位于X 染色体长臂末端(Xq28)， 长为186kb，由26个外显子组成，其中第l4号外显子为3.1
2、kb，是目前发现的人类最大的外显子之一F mRNA长9kb，编码一条由2351氨基酸组成的前体多肽。 成熟蛋自由成熟蛋自由2332氨基酸组成氨基酸顺序分析表明，氨基酸组成氨基酸顺序分析表明，F 蛋白由蛋白由3个个A 结构域，一个结构域，一个B结构域及结构域及2个个C结构域组成；结构域组成； 从血浆中及从重组细胞培养上清中分离纯化得到的从血浆中及从重组细胞培养上清中分离纯化得到的F 是是由两条肽链所组成，由两条肽链所组成， 二条肽链间由二条肽链间由Ca2+连接；连接； 目前的研究表明，目前的研究表明，B结构域对结构域对F的凝血活性并非必需。的凝血活性并非必需。二、血源性二、血源性F与重组与重组F
3、的特点的特点 F在血浆中含量极微， 0.05-0.1g/ml；高纯度极低的血源性病毒传染风险重组F制品(rF)19641964年之前高/超纯度血浆源性F浓缩物中纯度血浆源性F浓缩物19641964年1970s1970s1970s1970s19841984年血浆冷沉淀新鲜冰冻血浆(FFP)未经病毒灭活凝血因子含量浓度低，不稳定输血副反应多，不方便携带采用病毒灭活输血副反应明显减少体积小，方便保存携带我国血友病患者病毒感染情况不容乐观 钟小红对中国血友病协作组的215名4-18岁各型血友病患者，其中119例患者进行了感染相关性病毒的检测；HBV、HCV和HIV的感染率分别为2.5%、10.1%和3
4、.4%61.周釥民等.中国预防医学杂志 2001年3月第2卷第1期；2.杨仁池. 中国实用内科杂志2008年10月第28卷第10期. 3.丁培芳等.血栓与止血学.2002;8(3).；4.李钦伟等. 山东医药2007年底47卷第16期5.张雪芹，张心声等. 中国艾滋病性病2012年10月第18卷第10期. ；6.钟小红.护理学杂志.2010;25(11):3-26病毒感染 80年代，在浙江省发现4例血友病患者因使用进口FVIII浓缩制剂而感染艾滋病1，为此中国政府禁止进口血制品 2007年，李钦伟等报道，224例输注冷沉淀或凝血因子VIII制剂的血友病A患者的抗HCV阳性率高达27.3%4 据
5、不完全统计, 我国血友病患者感染HIV已经超过190例2 丁培芳等对山东省19922000年确诊和治疗的162例血友病A患者的病毒感染情况进行调查分析，结果显示血友病A患者抗-HCV阳性率为20.73%3 张雪芹等报道的血友病A患者的抗HCV阳性率相比过去已经有了显著下降，但是其感染率仍显著高于无偿献血者，尤其是年龄在4077岁的患者，抗HCV感染率仍高达20.5%5血源性血源性F制剂存在的问题制剂存在的问题血源性血源性F制剂病毒感染的对策制剂病毒感染的对策 20世纪70年代末开始了供血者的病毒检测供血者的病毒检测以及血源性F的病毒祛除和灭活病毒祛除和灭活研究。 80年代推出了多种病毒灭活方法
6、： 干热法 有机溶剂/表面活性剂法（S/D法） S/D法法+干热法（干热法（SDH法）法） S/D法+纳米膜过滤法（SDN法）干热灭活： 采用80，72h加热灭活，该法能十分有效地灭活HIV坏人肝炎病毒，但对无脂包膜的耐热B19细小病毒无效如果采用高热处理，如 100，持续30min对无脂包膜病毒有良好的灭活效果有机溶剂/表面活性剂(S/D)灭活：在F浓缩物中加入有机溶剂(如磷酸三丁酯，氯仿等)和表面活性剂(如胆酸钠、吐温-80，Triton X-100等)以灭活病毒S/D灭活法条件温和、不需要特殊设备S/D的配伍作用能破坏病毒的脂包膜、从而灭活病毒、而对蛋白质的结构和功能几乎无影响该法对无脂
7、膜的病毒灭活效果不佳 目前公认的、比较有效的病毒灭活方法有干热灭活、有机溶剂/表面活性剂(S/D)处理法等，WFH最新发布的注册认可在全球上市的优良制剂，所采用的病毒灭活工艺大多结合了干热灭活和S/D两种方法。1.张献清,等.药学进展.1997;21(1):26-19.2. http:/www.raas- 1985年我国明令禁止进口国外血源性F制剂； 1997年全面禁止未经病毒灭活处理的血液制品的应用； 2002年要求血源性F制剂的制备工艺必须要有2种以上病毒祛除/灭活方法。血源性血源性F制剂工艺制剂工艺凝胶过滤法离子交换层析法亲和层析低温乙醇法甘氨酸沉淀法PEG分段沉淀法PEG-甘氨酸分段沉
8、淀法酸沉淀法冷沉淀工艺冷沉淀工艺纯化工艺纯化工艺病毒灭活病毒灭活干热法S/D法SDH法SDN法层析(ToyopearI DEAE 650(M)洗涤洗脱超滤半成品配制除菌分装冻干干热灭活(100，30min)成品新鲜人冰冻血浆65岁的老年人中没有足够的临床使用数据，用时需谨慎和个体化使用贮存条件贮存条件Text百因止任捷拜科奇保存条件：2-8下保存，禁止冷冻25以下环境存放3个月 三种产品均是在2-8下保存，禁止冷冻。1.拜科奇注射用重组人凝血因子VIII说明书2.百因止注射用重组人凝血因子VIII说明书3.任捷注射用重组人凝血因子VIII说明书药代动力学特征药代动力学特征-拜科奇拜科奇参数平均
9、值(范围)AUC (IUh/dL)1320T1/2(hr)10.7(7.8-15.3)CL(mg/hrkg)4.1体内回收率(IU/dL/IU/kg)1.9(1.25-2.76) 儿童的拜科奇药代动力学参数参数初始PK平均值(SD)24周PK平均值(SD)Cmax (IU/dL)114.9520.19109.4220.09AUC (IUh/dL)1588.05344.321487.08381.73T1/2(hr)13.741.8214.604.38体内回收率(IU/dL/IU/kg)2.200.342.110.37拜科奇说明书在北美20例严重血友病A PTPs患者(12岁到22岁之间)中进行，
10、单剂量给与KOGENATE，50IU/kg，24周后，对相同患者，给予相同剂量的拜科奇，继续治疗24周药代动力学特征药代动力学特征-百因止百因止 100例10岁的中重度血友病A患者(因子VIII2%)药代动力学结果参数均值标准差(SD)中位数Cmax (IU/dL)12026119AUC (IUh/dL)15275281549T1/2(hr)11.83.111.1CL(dL/hrkg)0.0370.0300.033MRT(h)15.24.814.1 53例6岁以下中重度血友病A患者药代动力学结果参数均值Cmax (IU/dL)93AUC (IUh/dL)1195T1/2(hr)9.7CL(dL
11、/hrkg)0.044MRT(h)12.2百因止说明书药代动力学特征药代动力学特征-任捷任捷参数首次访视时的参数均数 SD第6个月时的参数均数 SDCmax (IU/mL)1.080.221.240.42AUC (IUh/mL)13.55.615.07.5T1/2(hr)11.25.011.86.2CL(mL/hr/kg)4.512.234.041.87K值(IU/dl)/(IU/kg)2.150.442.470.84体内活性恢复(%)1032111640 既往接受过治疗的甲型血友病患者基线和6个月随访的药代参数AUC,药时曲线下面积，从零趋近于无穷大；Cmax ：峰浓度K值：活性恢复增量；
12、T1/2：血浆清除率半衰期；CL：清除率 SD：标准差 任捷说明书 7例接受过治疗的1216岁患者的药代动力学与成人的相似参数均数 SDCmax (IU/mL)1.090.21AUC (IUh/mL)11.55.2T1/2(hr)8.032.44CL(mL/hr/kg)5.232.36K值(IU/dl)/(IU/kg)2.180.41体内活性恢复(%)112232009年拜耳与中华慈善总会共同启动了年拜耳与中华慈善总会共同启动了“拜科奇儿童血友病患者援助项目拜科奇儿童血友病患者援助项目”援助模式为援助模式为拜耳公司拜耳公司捐赠拜科奇药品捐赠拜科奇药品中华慈善总会中华慈善总会50%医疗保险或其它
13、医疗保险或其它50%拜科奇治疗疗拜科奇治疗疗程程3 个月个月项目截至目前在全国共设了项目截至目前在全国共设了35个发药点，在个发药点，在121家医院家医院151名注册医生的帮助下，援助共计名注册医生的帮助下，援助共计1500人，累计援助人，累计援助金额金额1.19亿元。亿元。患者患者自费自费中华慈善总会中华慈善总会各地慈善总会各地慈善总会根据患者购买拜科奇药品票据给根据患者购买拜科奇药品票据给予予10%10%的资金援助，每年援助资的资金援助，每年援助资金设有上限：金设有上限：未成年人：未成年人：1500015000元元/ /年年成年人：成年人：2000020000元元/ /年年根据根据患者困难
14、程度及经济患者困难程度及经济负担状况，负担状况，给予不等金额给予不等金额的资金援助的资金援助。医保报销大部分用药费用医保报销大部分用药费用2015年拜耳与中华慈善总会共同启动了年拜耳与中华慈善总会共同启动了“拜科奇拜科奇co-pay援助项目援助项目”现有拜科奇救助项目现有拜科奇救助项目实现全人群覆盖实现全人群覆盖项目名称项目名称援助形式援助形式援助对象援助对象援助周期援助周期援助援助人数人数适用地区适用地区援助药品模式援助药品模式药药 品品2-18周岁儿童患者周岁儿童患者3 3个月个月为一疗程为一疗程有限制有限制医保报销比医保报销比例例70%70%援助资金模式援助资金模式资资 金金全部患者全部
15、患者1212个月个月无限制无限制医保报销比医保报销比例例70%70%长效重组长效重组F的研发的研发 长效VIII因子是目前血友病A治疗药物研发的焦点之一，有可能增加采用预防治疗的患者数量，提高患者的依从性，改善患者预后1 聚乙二醇化是正在开发的延长FVIII半衰期的最常见技术1. http:/www.wfh.org/en/abd/prophylaxis/current-issues-in-prophylaxis2. 1. Mei, et al. Blood. 2010;116(2):270-279 3. 2. Yoshioka, et al. Chem Cent J. 2011;5:25聚乙二
16、醇化(PEG化)是长链、化学活化的PEG分子共价连接至治疗药物2 PEG化可提高治疗效果和/或耐受性通过3 减少肾的清除和蛋白水解机制(因此增加半衰期) 降低免疫原性组织受体PEG化蛋白天然蛋白抗体 蛋白酶聚乙二醇肾小球滤过研发中的聚乙二醇化rFVIII产品产品重组蛋白修饰细胞系 生产商研究状态BAY 94-9027BDD-rFVIII (Ser743-Gln1638)特定位点聚乙二醇化1 (PEG 60 kDa branched)BHKBayer 目前已完成期临床试验 /期临床试验正在进行中3BAX 855FL-rFVIII随机聚乙二醇化2(PEG 20 kDa)CHOBaxter 刚完成临
17、床前研究 正在进行期临床试验4BDD=B区结构缺失; BHK=幼仓鼠肾细胞; CHO=中国仓鼠卵巢; FL=全长 1.Coyle, et al. J Thromb Haemost. 2014;12:488-4962.Turecek, et al. Hmostaseologie. 2012; 32 (Suppl 1):S29S383.Coyle TE,et al.J Thromb Haemost.2014 Apr;12(4):488-96.4.P. L.Turecek,et al.Haostaseologie.2012; 32 (Suppl 1):S29S38.BAY 949027半衰期显著延长
18、 期临床试验结果： BAY94-9027与rFVIII-FS相比t1/2延长，约为19小时，重复给药8周后t1/2变化不大(多达16ED) ，单次或多次给药后Cmax和AUC呈剂量依赖性Coyle TE,et al.J Thromb Haemost.2014 Apr;12(4):488-96.剂量(IU /kg)t (h)Cmax(IU/dL)AUC(IU/h/dL)CL(dL/h/ kg)Vss(dL/kg)组1 (n = 7)rFVIII-FS* 2512.9 (8.418.7) 69.6 (40.891.3) 1109 (5802136) 0.023 (0.0120.043) 0.42
19、(0.310.66)BAY 94-9027,单剂量2518.2 (13.728.1) 63.7 (53.280.3) 1577 (12852825) 0.016 (0.0090.020) 0.43 (0.350.50)BAY 94-9027,每周2次(16 次)25 18.6 (12.130.0) 79.8 (62.092.9) 2036 (14523314) 0.012 (0.0080.017) 0.33 (0.300.40)组2(n = 7)rFVIII-FS5013.0 (10.215.9) 228.6 (171376) 2502 (17364891) 0.020 (0.0100.029
20、) 0.36 (0.230.51)BAY 94-9027,单剂量6018.5 (15.123.4) 172.0 (125245) 4329 (30878578) 0.014 (0.0070.019) 0.38 (0.250.45)BAY 94-9027,每周1次(9次)6019.5 (15.025.6) 184.7 (139243) 4723 (33067589) 0.013 (0.0080.018) 0.34 (0.260.41)BAY 949027安全性良好 BAY949027期临床研究期间安全性良好Coyle TE,et al.J Thromb Haemost.2014 Apr;12(4
21、):488-96.安全性 无治疗相关不良反 仅一例严重不良反应：骨盆肌肉出血 耐受性良好，无抑制物产生 III 期研究研究显示：BAY 94-9027的安全性和耐受性良好 受试者接受了长达36周的BAY 94-9027治疗BAY 94-9027治疗安全性和耐受性良好报告了两例与药物相关的超敏反应病例未报告其他严重的药物相关不良事件证实未产生因子VIII抑制物199220002000200320082013NovoEight turoctocog alpha，该药是诺和诺德第三代重组FVIII，利用了最新的基因重组及蛋白纯化技术，用于A型血友病患者出血事件的预防和治疗。 NovoEight已在I
22、II期Guardian项目中进行了评价，这是迄今为止在A型血友病患者中开展的最大的临床预注册试验项目，涉及超过200例A型血友病患者。 III期临床试验包括既往接受过治疗的重度A型血友病成人及儿童患者，研究结果证明了turoctocog-alpha对出血事件的预防及治疗疗效，同时患者体内未产生抑制剂。Obizur 成分：成分：重组F，猪序列，用于获得性血友病A（AHA）的治疗。AHA是一种极罕见、可能危及生命的急性出血性疾病；由于循环血中存在抗人F自身抗体而使得重组或血源人F产品输注无效。Obizur因为不受抗人F抗体的影响而起到预防和治疗出血的作用。 FDA批准日期：批准日期：2014年年10月月23日日 生产公司：生产公司：Baxter Healthcare Corporation结语结语F研究方向：研究方向： 重组和血源F生产工艺研究 重组和血源凝血因子的分子差异及其药理药效学的影响的研究 目前的研究结果尚有诸多未能解开的疑问，特别是如何减少重组制品的免疫原性以及增强它们的疗效、安全性和使用方便性方面。
