1、甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析The analysis of Steroid Hormon Drugs.第一节概述第一节概述甾体激素是一类具有甾体结构的激素类药物甾体激素是一类具有甾体结构的激素类药物维持生命维持生命调节性功能调节性功能免疫调节免疫调节皮肤病治疗皮肤病治疗生育控制生育控制.第一节概述第一节概述一、母一、母 核核ABCD1234567891011121314151617环戊烷骈多氢菲环戊烷骈多氢菲.环上双键的表示方法：环上双键的表示方法：454 14251,4 565105 5(10)用用“”表示表示 双键的位置双键的位置:双键位置双键位置.环上取代基构型表示方法环上取
2、代基构型表示方法 构型：构型：取代基指向环平面的前面 用实线表示“”构型：构型：取代基指向环平面的背面 用虚线表示“”.二、分类二、分类 肾上腺皮质激素 性激素 雄性激素 雌性激素 雌激素 孕激素 按生理作用分为：按生理作用分为：.1 1肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素CCH2OHOOHO1718192021皮质酮的衍生物皮质酮的衍生物 CCH2OHOO去氧皮质酮去氧皮质酮.结构特点结构特点 含有含有2121个个C C A A环：环：4 4-3-3-酮结构（酮结构（,-不饱和酮）不饱和酮）1717位：位：-醇酮基，有还原性。醇酮基，有还原性。其它：其它：1 18 8位、位、1 19 9位位-甲基，
3、甲基，11 11位羟基、羰基等位羟基、羰基等 人工合成品：人工合成品：1 1、2 2位间有双键，位间有双键，6 6 位，位，9 9 位引入卤位引入卤 素，素，1616 位或位或1616 位引入甲基，位引入甲基，1616 位引入羟基等。位引入羟基等。CCH2OHOOHO1718192021ABCD1234567891011121314151617.代表药物代表药物CCH2OHOOOOH可的松可的松CCH2OHOOOHHO氢化可的松氢化可的松.代表药物代表药物地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠曲安奈德曲安奈德.CCH2OHOOOHHOCH3F人工合成药物人工合成药物 地塞米松地塞米松泼尼松泼尼松9 9位
4、位-F F1616位位-CHCH3 31 1、2 2位双键位双键1 1、2 2位双键位双键CCH2OHOOOHO.供分析官能团供分析官能团A A环的环的 4 4-3-3-酮酮1717位的位的-醇酮基醇酮基 1111位羟基或羰基受立体效应影响，无利用价值位羟基或羰基受立体效应影响，无利用价值.2 2雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素OOH171819睾丸素的衍生物睾丸素的衍生物.结构特点结构特点 供分析官能团：供分析官能团：A环4-3-酮 含有含有1919个个C C A A环的环的 4 4-3-3-酮酮 1717位羟基、甲基、酯位羟基、甲基、酯.OOHCH3代表药物代表药物OOCOC2
5、H5甲基睾丸素甲基睾丸素 丙酸睾丸素丙酸睾丸素.蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸诺苯丙酸诺龙龙OOCOCH2CH2睾丸素结构修饰睾丸素结构修饰.3 3孕激素孕激素COOC H31718192021黄体酮黄体酮COOCH3OCOCH3CH3安宫黄体酮安宫黄体酮.结构特点结构特点 供分析官能团供分析官能团 A环的4-3-酮 17位上的甲酮基。含有含有2121个个C CA A环的环的 4 4-3-3-酮酮1717位甲酮基位甲酮基.代表药物代表药物米非司酮米非司酮.4雌激素雌激素O HHO1718OHHOCCHH OO雌二醇雌二醇炔雌醇炔雌醇衍生物衍生物-雌酮.结构特点结构特点 供分析官能团：供分析官能
6、团：A A环的酚羟基及环的酚羟基及1717位的羟基位的羟基含有含有1818个个C(C(1010位无甲基位无甲基)A A环：苯环，环：苯环，3 3位上有酚羟基；位上有酚羟基；1717位：羟基、乙炔基位：羟基、乙炔基.口服避孕药口服避孕药OCOHCHOCOHCHA A环有环有 4 4-3-3-酮结构；酮结构；有的第有的第1717位有羟基和乙炔基；第位有羟基和乙炔基；第1010位无甲基。位无甲基。炔诺酮炔诺酮异炔诺酮异炔诺酮炔诺孕酮炔诺孕酮.小结小结甾体激素甾体激素碳原子数碳原子数A环环17位取代基位取代基肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素21 4-3-酮酮-醇酮基醇酮基雄性激素雄性激素19 4-3-酮酮
7、-OH-CH3孕激素孕激素21 4-3-酮酮甲酮基甲酮基雌激素雌激素18苯环苯环C3-酚酚OH-OH-CCH.第二节鉴别试验第二节鉴别试验一、化学鉴别法一、化学鉴别法黄褐色醋酸可的松42SOCon.H 1 1母核呈色反应母核呈色反应 能与能与H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl等呈色等呈色 最常用的是最常用的是H2SO4。.2 2官能团官能团 C C H 2 O H O 氧化剂 C C O O H O H H 水和醛 -醇酮基（强还原性，与氧化剂作用）醇酮基（强还原性，与氧化剂作用）肾上腺皮质激素类药物特征反应肾上腺皮质激素类药物特征反应.水和醛斐林试剂肾上腺皮质激素红色OCu2水和醛氨
8、制肾上腺皮质激素AgTSAgNO3水和醛甲臢肾上腺皮质激素有色BTor TTCTTCTTC：氯化三苯四氮唑（又叫红四氮唑氯化三苯四氮唑（又叫红四氮唑RTRT）BTBT：蓝四氮唑蓝四氮唑用于肾上腺皮质激素类药物鉴别和含量测定。用于肾上腺皮质激素类药物鉴别和含量测定。2 2官能团官能团.3 3位、位、2020位羰基可与羰基试剂反应位羰基可与羰基试剂反应 羰基试剂羰基试剂:羟胺、羟胺、2,4-2,4-二硝基苯肼、异烟肼、苯肼、氨基脲二硝基苯肼、异烟肼、苯肼、氨基脲OOHCH3NCONHN H2OHCH3CONHNN+_H2O 羰基羰基.甲酮基甲酮基C OOCH3蓝紫色亚硝基铁氰化钠NO)CN(FeN
9、a52孕激素特征反应孕激素特征反应第第1717位的甲酮基和亚硝基铁氰化钠作用，位的甲酮基和亚硝基铁氰化钠作用，形成蓝紫色的络合物。形成蓝紫色的络合物。.乙炔基乙炔基OHHOC CHOHHOC CAgAgNO3(White).三、薄层色谱法三、薄层色谱法四、红外光谱法四、红外光谱法 中国药典收载甾体激素类药物均有红外中国药典收载甾体激素类药物均有红外光谱图光谱图第二节鉴别试验第二节鉴别试验二、物理常数测定二、物理常数测定.六、六、HPLC法法五、五、UV法法 第二节鉴别试验第二节鉴别试验.一、有关物质一、有关物质第三节杂质检查第三节杂质检查 TLC（多采用自身稀释对照法，已经介绍）（多采用自身稀
10、释对照法，已经介绍）HPLC（可与含量测定同时进行）（可与含量测定同时进行）（合成起始物、中间体、副产物、降解产物）（合成起始物、中间体、副产物、降解产物）.与对照品比较钼蓝磷钼酸钼酸盐磷酸盐 730nmOnH)4P(MoOH43max2103HHPOH第三节杂质检查第三节杂质检查二、游离磷酸二、游离磷酸原理：原理：.三、雌酮三、雌酮:Zimmermann 反应反应四、甲醇和丙酮四、甲醇和丙酮:HPLC五、硒五、硒:（氧瓶燃烧、二氨基萘比色法方（氧瓶燃烧、二氨基萘比色法方 法已介绍）法已介绍）第三节杂质检查第三节杂质检查.第四节含量测定第四节含量测定一、一、UV1 1原理原理 “C=C-C=C
11、”、“C=C-C=O”有紫外吸收 4-3-酮结构，酮结构，max在在240nm A环为苯环，环为苯环，max在在280nm.2 2讨论讨论 适用于原料药适用于原料药 样品中样品中“其它甾体其它甾体”不合格时，不适用。不合格时，不适用。需进行分离后再测定需进行分离后再测定 .二、四氮唑比色法二、四氮唑比色法 1 1四氮唑盐的种类：四氮唑盐的种类：（1 1）红四氮唑：（）红四氮唑：（缩写缩写TTC 或或RT）2,3,5三苯基氯化四氮唑三苯基氯化四氮唑 （2,3,5triphenyltetrazoliumchloride）（2）蓝四氮唑：缩写）蓝四氮唑：缩写BT(Blue tetrazolium)3
12、,3-二甲氧苯基二甲氧苯基-双双-4,4-（3,5-二苯基）氯化四氮唑二苯基）氯化四氮唑3,3-dianisole-bis4,4-(3,5-diphenyl)triphenyltetrazoliumchloride .2 2原理原理水和醛甲臢肾上腺皮质激素有色BTor TTCCCH2OHOOHO1718192021.3 3、测定法测定法AnmmlAnmmlmlmlmlmlmlml测定供试品溶液测定对照品溶液氢氧化四甲基铵氯化四氮唑无水乙醇氢氧化四甲基铵氯化四氮唑无水乙醇48514851129129ATTC法BBT法.4 4、讨论讨论结构结构溶剂和水分溶剂和水分碱种类和加入顺序碱种类和加入顺序空
13、气中氧和光线空气中氧和光线反应温度和时间反应温度和时间反应速度反应速度呈色强度和稳定性呈色强度和稳定性.（1）官能团位置的影响）官能团位置的影响a C11：11位酮基反应速度快于11位羟基 可的松氢化可的松CCH2OHOOOOHCCH2OHOOOHHO可的松氢化可的松.b C21：-羟基（C21-OH）21-OH酯化后较母体羟基反应速度慢 即游离体酯类如：可的松醋酸可的松 简单酯复杂酯，醋酸酯磷酸酯琥珀酸酯三甲基醋酸酯（1）官能团位置的影响）官能团位置的影响.（2）溶剂和水分的影响）溶剂和水分的影响a 常用无水乙醇常用无水乙醇 含水量含水量 5%，对结果无影响，对结果无影响 含水量为含水量为1
14、0%，吸收度约降低，吸收度约降低10%含水量为含水量为30%，反应完全受到抑制，反应完全受到抑制b 醇中不能含有醛类醇中不能含有醛类 醛有还原性，使吸收度醛有还原性，使吸收度 用无醛醇用无醛醇.（3）碱的种类和加入顺序）碱的种类和加入顺序采用氢氧化四甲基铵效果较好采用氢氧化四甲基铵效果较好加入顺序加入顺序 先加先加TTC或或BT，后加，后加(CH3)4N+OH-原因：皮质激素与原因：皮质激素与(CH3)4N+OH-长时间接长时间接触，有部分分解。触，有部分分解。.（4）氧及光线的影响）氧及光线的影响 对光敏感，在暗处显色。对光敏感，在暗处显色。TTC法形成的甲臢对空气中氧敏感，使法形成的甲臢对
15、空气中氧敏感，使颜色强度颜色强度，稳定性稳定性。BP规定：规定：加入试剂后，要往容器中充加入试剂后，要往容器中充N2，以置换，以置换反应容器中的空气。反应容器中的空气。.（5）温度与时间）温度与时间 一般室温或30 Ch.P:25，暗处反应，暗处反应40-45min.三、异烟肼法三、异烟肼法OOHCH3NCONHN H2OHCH3CONHNN+_H2O1原理原理 C3-酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收，可用于定量。有最大吸收，可用于定量。.2、反
16、应条件反应条件（1）溶剂：）溶剂：无水乙醇，无水甲醇无水乙醇，无水甲醇（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度 常用常用HCl HCl：异烟肼：异烟肼=2M:1M时，获最大吸收度。时，获最大吸收度。.（3）水分、温度、光线和氧的影响）水分、温度、光线和氧的影响H2OA温度温度反应速度反应速度具塞玻璃容器中，光线和氧影响不大具塞玻璃容器中，光线和氧影响不大.3、反应的专属性反应的专属性在该反应条件下，对在该反应条件下，对4-3-酮具有一定的专属性酮具有一定的专属性 C20酮基反应慢，酮基反应慢，C17酮基反应慢；酮基反应慢；C11酮基不反应酮基不反应 4-3-酮：室温下，
17、酮：室温下，30反应完全。反应完全。.四四 koberkober反应及铁反应及铁-酚试剂比色法酚试剂比色法nm51542nm46542maxmaxSOHor -SOH荧光性红色稀释稀水黄色乙醇雌激素类药物1、Kober反应：原理：雌激素与硫酸-乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后，重新加热发生颜色改变，在515nm附近有最大吸收的反应。（雌激素特征反应）.Kober反应缺点反应缺点 （1）条件较难控制，易出双色黄+红 （2）重现性较差：呈色强度和稳定性受试剂浓度、组成、反 应时间和温度的影响。甾体激素提取物中其他物质及制剂中稳定 剂、赋形剂、溶剂对测定有干扰。.五、五、HPLC法法 广泛用于此类药
18、物原料和制剂的含量测定广泛用于此类药物原料和制剂的含量测定 一般为内标法一般为内标法.四氮唑比色法可用于下列哪个药物的含量测定（）A、可的松 B、睾丸素 C、雌二醇 D、炔雌醇 E、黄体酮 A.Kober反应用于定量测定的药物为（）A、口服避孕药 B、雌激素 C、雄性激素 D、皮质激素 E、孕激素 B.氢化可的松因保管不当，C17-醇酮基有部分被分解，欲测定未被分解的氢化可的松的含量应采用（）A、三氯化铁比色法 B、紫外分光光度法 C、异烟肼比色法 D、四氮唑比色法 E、酸性染料比色法 D.多选题在酸性溶液中能与异烟肼试剂反应产生黄色化合物的甾体激素有（）A、黄体酮 B、睾丸素 C、炔雌醇 D、可的松 E、地塞米松 ABDE.
