1、糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展1958年，Allen报告，在离子交换层析上的的人血红蛋白可以分离出三个小组分，他们较HbA的负电荷更强，被命名为HbA1a,HbA1b,HbA1c。1969年Rahbar使用琼脂电泳，报告糖尿病患者的这些小血红蛋白组升高1970年代中期，弄清楚了是葡萄糖对血红蛋白HbA的非遗传修饰，产生了HbA1c1980年中期，GHb(糖化血红蛋白）检测被广泛应用，但当时结果可比性很差DCCT研究发表后，1996年起，美国正式启动了NGSP项目，推动糖化血红蛋白检测的标准化。2010年达
2、成了全球标准化共识糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展HbHbHbAHbA0 0HbAHbA1 1HbA1aHbA1aHbA1bHbA1bHbA1cHbA1cHbAHbA()HbAHbA2 2()HbFHbF()95%95%2%2%1-3.5%1-3.5%成人血红蛋白分三成人血红蛋白分三种，种，HbAHbA为主要成人为主要成人HbHb非糖化非糖化HbHb糖化糖化HbHb6-8%6-8%87-89%87-89%血红蛋白血红蛋白胎儿血红蛋白HbF在胎儿及出生6个月以内的新生儿体内为高浓度，6个月后基本降为成人水平1%1%1%1%4%-6%4%-6%HbA1a:链NH2端与其它糖成分结合的产物H
3、bA1b:HbA1c进一步代谢的产物HbA1c:链NH2端与葡萄糖结合的产物糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展1.葡萄糖与血红蛋白HbA发生糖化反应2.两步反应：先快速生成不稳定A1c,后缓慢生成稳定的A1c。3.血红蛋白HbA糖化后，负 电荷会增加糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展基于基于电电荷荷 离子交离子交换换高高压压液相色液相色谱谱法（法（HPLCHPLC）电电泳法泳法 毛毛细细管管电电泳泳基于基于结结构构 硼酸硼酸亲亲和和层层析法析法 酶酶法法 免疫法免疫法糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展HbA(2b b2)HbA1HbA0HbA1aHbA1bHbA1c非糖化成分
4、非糖化成分糖化成分糖化成分离子交换色谱和免疫法检测物离子交换色谱和免疫法检测物硼酸亲和色谱检测物硼酸亲和色谱检测物糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展A:患者红细胞裂解物被注入到带有负电荷的分析柱中B,C:因为与带负电荷树脂间的离子相互作用，带正电荷的血红蛋白分子的移动速度比带负电荷的慢D:因为HbA1c比HbA0所带负电荷强，所以首先被洗脱.E:离子交换HPLC方法能分离并鉴定其他种类Hb及一些血红蛋白变异体，在色谱图上将出现相应的分离峰Pathology Consultation on HbA1c Methods and Interferences,Am J Clin Pathol 2
5、014;141:5-16糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展厂家厂家仪器仪器Bio-RadVARIANT II Turbo HbA1c Kit-1.0/2.0VARIANT II HbA1c ProgramD-10 Hemoglobin A1c ProgramTosohG7G8GXArkray81608180上海惠中MQ2000MQ2000PT糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展厂家厂家仪器仪器深圳普门GH-900 HbA1c AnalyzerDrew ScientificDrew DS5Diastat江苏奥迪康AC660糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展Pathology Co
6、nsultation on HbA1c Methods and Interferences,Am J Clin Pathol 2014;141:5-16糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展MiniCAP Capillary 2 Capillary2 with Flex Piercing*(Capillary2 with Flex Piercing 为Capillary2 的升级版，只多了可采原始样本管，其他参数一致)with Flex with Flex 糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展Pathology Consultation on HbA1c Methods and Inte
7、rferences,Am J Clin Pathol 2014;141:5-16糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展厂家厂家仪器仪器PrimusHb9210PDQ PlusUltra2Bio-RadIn2itAlereAfinionNycoCard糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展Pathology Consultation on HbA1c Methods and Interferences,Am J Clin Pathol 2014;141:5-16糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展Pathology Consultation on
8、HbA1c Methods and Interferences,Am J Clin Pathol 2014;141:5-16糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展厂家厂家仪器仪器试剂盒试剂盒RocheCobas生化系列机型糖化血红蛋白检测试剂盒(免疫比浊法)Tina-quant系列试剂盒Hitachi生化系列机型开放或罗氏试剂Siemens Dimension等生化系列机型糖化血红蛋白测定试剂盒(免疫比浊法)ADVIA生化分析系统糖化血红蛋白A测定试剂盒(乳胶凝集法)DCA Vantage（POCT）糖化血红蛋白检测试剂盒(免疫乳胶凝集抑制法)BeckmanAU生化系列机型糖化血红蛋白检测试
9、剂盒(比色法)Beckman其他生化系列AbbottARCHITECT生化仪系列糖化血红蛋白测定试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法)Randox(朗道）血红蛋白A1c检测试剂盒(乳胶增强免疫比浊法)德国胡曼糖化血红蛋白(HbA1c)测定试剂盒JEOL Ltd（希森美康代理）糖化血红蛋白检测试剂盒(酶法)Sekisui（积水）Medical糖化血红蛋白检测试剂盒(酶法)Audit Diagnostics（北京欧迪代理）糖化血红蛋白测定试剂盒(直接法)国产厂商国产生化分析系统国产生化试剂糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展方法方法原理原理优势优势挑战挑战酶法使用特别作用于氨基酸末端糖化的缬氨酸的
10、酶检测HbA1c不受变异体的分析干扰不能发现血红蛋白变异体免疫法使用针对糖化的链氨基酸末端的抗体检测HbA1c在使用新一代的试剂盒时分析不受大多数常见变异体的干扰不能发现血红蛋白变异体，新一代的试剂盒依然会受到少见变异体的分析干扰硼酸亲和层析法糖化的血红蛋白被绑定在硼酸基团树脂时，非糖化的血红蛋白组分直接流出分析柱最小的Hb变异体分析干扰检测的是总糖化血红蛋白，而不是 HbA1c,不能发现血红蛋白变异体离子交换HPLC基于电荷分离血红蛋白组分能够发现常见的血红蛋白变异体 变异体被共洗脱时易被干扰 毛细管电泳法基于电荷分离血红蛋白组分能够发现血红蛋白变异体工作流程Pathology Consul
11、tation on HbA1c Methods and Interferences,Am J Clin Pathol 2014;141:5-16糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展在第59届美国糖尿病学会年会上，HbA1c监测的重大影响与胰岛素问世相提并论，并将前者作为血糖控制的金标准2014年ADA指南推荐：对于治疗达标（血糖控制稳定）的患者，每年应该至少进行两次HbA1c检测。对更改治疗方案或血糖控制未达标患者，应每年进行四次HbA1c检测在临床上，无论用什么方法反映血糖的变化，最终都要以HbA1c的变化作为最终评价一种药物或一个治疗方案在血糖控制上是否有效的指标Diabetes Ca
12、re Volume 37,Supplement 1,January 2014“中国糖化血红蛋白教育计划”教材糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展2010年ADA率先正式推荐HbA1c诊断DM,推荐原因之一就是在美国HbA1c已高度标准化2011年WHO推荐有条件的地方采用HbA1c 诊断糖尿病中国？糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展HbA1c临床应用推荐鉴于HbA1c检测在我国尚不普遍，检测方法的标准化程度不高，测定HbA1c的仪器和质量控制尚不能符合目前糖尿病的诊断的要求。本指南仍不推荐在我国采用HbA1c诊断糖尿病。但对于采用标准化检测方法，并有严格质量控制，正常参考值在4.0%
13、6.0%的医院，HbA1c6.5%可作为诊断糖尿病的参考。中华糖尿病杂志2014年7月第6卷第7期糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展实验室指标参与临床评估、作为诊断标准，除了检测指标固有的先天优势外，具有符合要求的准确性精密度（CV）正确度（Bias）糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展CV%6.0%A1C6.5%A1C7.0%A1C25.76-6.246.24-6.766.72-7.2835.64-6.366.11-6.896.58-7.4255.4-6.65.85 7.156.3 7.7不同室内CV对 A1C 分析的影响（95%的可信区间）正常人和病人无法区分血糖控制好坏无法区分
14、糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展Copyright 2010 American Association for Clinical Chemistry小小的偏倚将的偏倚将导导致很大人群的致很大人群的误诊误诊糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展日本标准化瑞典标准化中国标准化之路糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展HbA1cTotalGHBHbA1在DCCT和UKPDS结果发表之前，美国有800个试验室在做A1C检测，CAP实验调查显示在不同的实验室，用不同的检测方法得出的A1C结果存有巨大的差异。糖化血
15、红蛋白实验室检测方法和标准化新进展前提下采取的标准化，确保了试验成功！糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展PRLPRLPRLPRLNGSP实验室网络SRLSRLSRLSRLSRLSRLNGSPNGSP监监控网控网络络（月度）（月度）SRLSRLCPRLCPRL指导委员会执行核心SRLSRLSRLSRLSRLSRLSRLSRL糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展NGSPNGSP监监控控 网网络络（月度）（月度）厂商和实验室认证（I级和II级）校准品校准品1 1 新新鲜鲜血血(精密度与偏差精密度与偏差)认证认证
16、2 2 新新鲜鲜血血能力比能力比对测试对测试3 3 新新鲜鲜血血常规临床实验室糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展lNGSP要求：生产厂家有责任保证其它批号的试剂、校准品、质控品、（色谱柱）所测结果与认证结果保持一致l认证标准：逐步提高l认证有效期：1年lhttp:/www.ngsp.org/docs/methods.pdf糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展l由NGSP的二级参考实验室来对实验室进行认证工作l得到认证的实验室所测结果是可靠的l认证标准：逐步提高l认证有效期：1年lhttp:/www.ngsp.org/docs/labs.pdf糖
17、化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展38糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展CV)，要求逐年严格2007152008122009102010 82011 7 2012 7 2013/2014 6 www.ngsp.org/CAP/CAP09b.pdf,andMeeting minutes from NGSP/IFCC Manufacturers Forum,AACC Atlanta 2011糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展2013年调查显示3000多家CAP实验室间，A1C的检测结果已经有效的标准化 7.08.09.010.011.012.
18、013.014.015.016.017.018.019.020.021.0%GHB19932003Total GHBDCCTTargetHbA1HbA1c糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展n制备纯度标准物质n建立一个特异测定HbA1c的参考方法n建立国际参考实验室网络n完成了与指定比对方法的比较工作糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展谷氨酸内切酶HbA1c六肽HbA0六肽糖基化的链N末端的六肽片段非糖基化的链N末端的六肽片段糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展溶血液制备酶解HPLC串联毛细管电泳HPLC串联质谱高特异性和准确性的计量结果糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展IF
19、CC HbA1c Standardization糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展JDS/JSCC=0.927JDS/JSCC=0.927*IFCC+1.73IFCC+1.73 NGSP=0.915 NGSP=0.915*IFCC+2.15 IFCC+2.15Sweden=0.989 Sweden=0.989*IFCC+0.88 IFCC+0.88IFCC%HbA1cJDS%HbA1c2.03.64.35.66.47.68.69.610.811.6NGSP%HbA1c4681012糖化血红蛋白实验室检测方法和
20、标准化新进展改变HbA1c报告的数值范围的心理影响将对血糖控制产生影响Ragnar Hanas,Diabetes Care 2002,25:2110-2111糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展Ragnar Hanas,Diabetes Care 2002,25:2110-2111糖化血红蛋白的百分比数字表示患者实际数字.虚线表示糖化血红蛋白值基于参考水平变化的预期变化调整为较高的DCCT检测校准后，患者的HbA1c结果降低，说明血糖控制显著改善当调整回瑞典检测校准后，患者的HbA1c结果升高，血糖控制恶化糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化
21、血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展EQA（NCCL及各地临检中心）NGSP认证及国内一致性项目 参考系统建立及应用IFCC参考实验室网络糖化血红蛋白教育计划-CHEP糖化血红蛋白标准化计划-CHSP(CNSP)制定中国糖化血红蛋白相关行业标准糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展 Bio-Rad公司 EQAS糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展认证类型认证类型#样品比对样品比对偏差标准偏差标准监测（是监测（是/否）否）监测方案监测方案厂商（Manufacturer）4
22、040样本中有37个结果在6%否I级认证实验室（Level I lab）4040样本中有38个结果在6%是10个样本（季度）II级认证实验室（Level II Lab）4040样本中有37个结果在6%否NGSP实验室网络开展针对全球临床实验室的认证国内与2005年开始与NGSP的联系截至2014年6月，全球NGSP认证实验室共有147家，其中中国NGSP认证实验室共有28家http:/www.ngsp.org/critsumm.asp糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖
23、化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展项目发起人：项目发起人：纪立农教授纪立农教授宁宁 光教授光教授陈文祥主任陈文祥主任主办单位：主办单位：中华医学会科普部中华医学会科普部协办单位：协办单位：中国医院协会临床检中国医院协会临床检验管理专业委员会验管理专业委员会 “中国糖化血红蛋白教育计划中国糖化血红蛋白教育计划”是国家科技支撑计是国家科技支撑计划项目划项目“公众健康普及技术筛选与评价研究公众健康普及技术筛选与评价研究”的分课的分课题题“常见多发病防治技术要点筛选和普及研究常见多发病防治技术要点筛选和普及研究”中的中的重要部分重要部分糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测
24、方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展1 糖化血红蛋白实验室检测指南 中国糖尿病杂志2013年8月第21卷第8期糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展注意：没有直接的证据显示其它的检测指标与糖尿病长期并发症风险有关(例如：总糖化血红蛋白、果糖胺或糖化血清蛋白)糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展(需在NGSP认证的方法下使用)糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血
25、红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展Radder JK et al.Neth J Med 2005 Jul-Aug,63(7):256-259.Partida Hernndez G et al.Ginecol Obstet Mex 2000 Oct,68:420-424.糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展Kutter D et al.Clin Lab 2006,52(9-10):477-481.Daae LN et al.Clin
26、Chem 1999 Apr,45(4):569.Wang Y et al.Clin Chem 2007,53(7):1394-1395.糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展130天=7.6%*“Impact of Hemoglobin Variants on HbA1c;Interpretation:Do we assume too much?”MLO in July 2012*David B,Sacks;AACC Webinar April 10th 2012.糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展对于患有贫血和血红蛋白异常疾病的患者，HbA1c结果是不可靠的。可用血糖、糖化血清白蛋白
27、或糖化血清蛋白来评价血糖的控制。HbA1c测定所采用的方法应可以溯源到DCCT中曾使用过的HbA1c检测方法。糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展有贫血的血红蛋白病，妊娠，进展迅速的1型糖尿病，长期服用某些药物，尿毒症等影响因素，多可通过临床病史和其他生化检测发现如何发现近2/3的无临床症状的血红蛋白病-变异体？糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展2013临临床指南床指南2013实验实验室指南室指南启示启示HbA1c的临床使用1)评价长期血糖控制的金指标，治疗之初每3
28、月1次，达到治疗目标可每6个月1次。2)暂不推荐用于诊断和筛查3)对于采用标准化检测方法，并有严格质量控制，正常参考值在4.0%6.0%的医院，HbA1c6.5%可作为诊断糖尿病的参考。伯乐HbA1c可做为诊断糖尿病的参考HbA1c不适用情况（干扰因素）1)对于患有贫血和血红蛋白异常疾病的患者，HbA1c结果是不可靠的。2)可用血糖、糖化血清白蛋白或糖化血清蛋白来评价血糖的控制。知晓HbA1c检测的干扰因素伯乐HPLC可以分辨血红蛋白异常疾病患者HbA1c检测系统的选择1)标准化的检测方法，2)溯源到DCCT使用过的方法，3)HbA1c正常值为4%6%应选用测定结果可溯源IFCC参考方法的分析系统，如获得，NGSP认证伯乐HbA1c是可靠的分析系统,DCCT唯一供应商质量控制严格质量控制规范化使用分析系统伯乐第三方质控品及软件室间质量评价严格质量控制参加室间质量评价（能力验证）计划伯乐糖化EQAS糖化血红蛋白实验室检测方法和标准化新进展
