1、第第11 11讲讲 免疫学检测技术免疫学检测技术 的基本原理的基本原理免疫学检测方法：免疫学检测方法：依据依据免疫学理论免疫学理论设计的设计的测定测定抗原、抗体、免疫细胞及细胞因子抗原、抗体、免疫细胞及细胞因子的的实验方法实验方法。一、基本原理一、基本原理 抗原与相应抗体特异性结合，并呈现抗原与相应抗体特异性结合，并呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，以此检测某种反应现象，如凝集或沉淀，以此检测抗原或抗体。抗原或抗体。第一节第一节 体外抗原抗体结合反应体外抗原抗体结合反应 的特点及其影响因素的特点及其影响因素抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点1.抗原抗体结合的特异性 抗原抗体结合除抗原抗体结合除
2、空间构型空间构型互补外，还以互补外，还以氢键氢键、静电引力静电引力、范、范德华力德华力和和疏水键疏水键等非共价方式等非共价方式结合，结合，一定条件下一定条件下复合物可复合物可解离解离成游离状态，成游离状态，且仍且仍保持原有性质保持原有性质。2.抗原抗体结合的可逆性 复合物复合物解离度解离度主要取决于特异性抗体主要取决于特异性抗体超变区超变区与相应与相应抗原表位抗原表位三维空间构型的三维空间构型的互补程度互补程度，互补程度越高，分子间距越小，作用力越大，互补程度越高，分子间距越小，作用力越大，两者结合越牢固，不易解离；反之，则容易两者结合越牢固，不易解离；反之，则容易发生解离。发生解离。3.抗原
3、抗体结合的比例与浓度 抗原与抗体结合抗原与抗体结合比例合适比例合适，则可形成，则可形成肉眼可见的肉眼可见的大结合物大结合物；反之形成肉眼；反之形成肉眼不可见不可见的的小结合物。小结合物。4.抗原抗体反应的阶段性 第二阶段：第二阶段：可见反应阶段。可见反应阶段。数分钟、数小时至数日，因素影响多。数分钟、数小时至数日，因素影响多。第一阶段：第一阶段：特异结合阶段。特异结合阶段。仅几秒到几分钟、尚无可见反应；仅几秒到几分钟、尚无可见反应；细菌、细胞等颗粒性抗原与相应的抗体，或表面包被抗原的颗粒状物质与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象。毒素、组织浸液以及血清中的蛋白等可溶性
4、抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物。显色显色 第二节第二节 免疫细胞的测定免疫细胞的测定 淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞，检测其数量和淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞，检测其数量和功能是了解机体免疫状态的重要手段。功能是了解机体免疫状态的重要手段。一一、淋巴细胞的分离、淋巴细胞的分离 常用常用ficoll（淋巴细胞分离液）密度梯度离心除去红淋巴细胞分离液）密度梯度离心除去红细胞、粒细胞而获得外周血单个核细胞（细胞、粒细胞而获得外周血单个核细胞（PBMC），），再再经吸附除去单核细胞而得到淋巴细胞。若要分离经吸附除去单核细胞而得到淋巴细胞。若要分离T细胞细胞，可用尼龙毛柱、抗，可用尼龙毛柱
5、、抗CD3单抗、单抗、E花结试验等分离。花结试验等分离。二、免疫细胞细胞的鉴定二、免疫细胞细胞的鉴定 根据细胞的某些标志，采用免疫荧光法、磁根据细胞的某些标志，采用免疫荧光法、磁珠分离法、流式细胞术等方法可确定细胞不同珠分离法、流式细胞术等方法可确定细胞不同类型和比例。类型和比例。（一）（一）T细胞功能测定细胞功能测定 1.T细胞增殖试验细胞增殖试验 植物血凝素（植物血凝素（PHA）、）、刀豆蛋白刀豆蛋白A（ConA）等丝裂原及抗等丝裂原及抗CD3单抗等能非特异性激活培单抗等能非特异性激活培养的养的T细胞，使其转化成淋巴母细胞的试验。细胞，使其转化成淋巴母细胞的试验。淋巴细胞功能测定淋巴细胞功
6、能测定 在该增殖过程中，细胞在该增殖过程中，细胞DNADNA、RNARNA、蛋白质的蛋白质的合成增加，细胞形态改变。也可检测特异性抗原合成增加，细胞形态改变。也可检测特异性抗原致敏的致敏的T T细胞。细胞。（1 1）氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法：该法灵）氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法：该法灵敏、可靠，应用广泛，但需特殊仪器（液体闪烁敏、可靠，应用广泛，但需特殊仪器（液体闪烁仪），易有放射性污染。仪），易有放射性污染。（2 2）MTTMTT法：该法操作简单，无放射性污染，法：该法操作简单，无放射性污染，但敏感性相对较差。但敏感性相对较差。淋巴细胞功能测定淋巴细胞功能测定2.细胞毒试验：细胞毒试验：Tc
7、、NK细胞对靶细胞有直接杀伤作用细胞对靶细胞有直接杀伤作用，可根据待检效应细胞的性质，选用相应的靶，可根据待检效应细胞的性质，选用相应的靶细胞。细胞。（1）51Cr释放法：用释放法：用51Cr标记靶细胞，标记靶细胞，记数记数仪测定释放的仪测定释放的51C活性。活性。（2）MTT法：其原理与增殖试验相同，但甲法：其原理与增殖试验相同，但甲 生成量与靶细胞溶解破坏水平呈负相关。生成量与靶细胞溶解破坏水平呈负相关。（3）乳酸脱氢酶释放法：细胞受损致膜通透性）乳酸脱氢酶释放法：细胞受损致膜通透性改变，乳酸脱氢酶释放到培养液中。改变，乳酸脱氢酶释放到培养液中。3 细胞因子检测：细胞因子检测：CK的检测有
8、助于了解其在免疫调的检测有助于了解其在免疫调节中的作用，鉴定分离的淋巴细胞，监测节中的作用，鉴定分离的淋巴细胞，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。常用的检某些疾病状态的细胞免疫功能。常用的检测方法有以下三种：测方法有以下三种：（1）ELISA法：法：（2）生物活性测定法：生物活性测定法：（3）聚合酶链反应（）聚合酶链反应（PCR）：）：淋巴细胞功能测定淋巴细胞功能测定 4 皮肤实验皮肤实验 正常机体对某种抗原产生细胞免疫后，用正常机体对某种抗原产生细胞免疫后，用相同抗原做皮肤试验时出现以局部红肿为特征相同抗原做皮肤试验时出现以局部红肿为特征的的DTH。细胞免疫正常时出现阳性反应，细细胞免疫正常时
9、出现阳性反应，细胞免疫低下则呈阴性反应。胞免疫低下则呈阴性反应。该方法简便，可帮助诊断某些病原微生物该方法简便，可帮助诊断某些病原微生物感染（如结核杆菌、麻风杆菌等）及免疫缺陷感染（如结核杆菌、麻风杆菌等）及免疫缺陷病等。病等。淋巴细胞功能测定淋巴细胞功能测定（二）（二）B细胞功能测定细胞功能测定 B细胞介导体液免疫，检查细胞介导体液免疫，检查B细胞细胞的数量与功能是确定体液免疫是否正常的的数量与功能是确定体液免疫是否正常的重要手段。重要手段。1 B细胞增殖试验细胞增殖试验2 抗体形成细胞的测定：吸附有特异性抗抗体形成细胞的测定：吸附有特异性抗原的原的SRBC与抗体形成细胞分泌的与抗体形成细胞
10、分泌的Ig特特异性结合后活化补体，溶解异性结合后活化补体，溶解SRBC。又称又称溶血空斑试验。溶血空斑试验。第第12 12讲讲 免疫学防治免疫学防治 “国防建设国防建设”学习要求：学习要求：1.掌握人工主动免疫与人工被动免疫的概念；掌握死疫苗和活疫苗概念以及特性；2.熟悉疫苗的基本要求。免疫学防治免疫学防治：应用应用免疫学理论免疫学理论预预防防和和治疗治疗疾病，包括疾病，包括免疫预防免疫预防和和免疫治疗免疫治疗。1.1.定义：定义：为为预防、控制预防、控制传染病的发生和流行，传染病的发生和流行，用于用于人体预防接种人体预防接种的的生物制品生物制品。包括疫苗、菌苗和类毒素。包括疫苗、菌苗和类毒素
11、。2.2.基本要求基本要求：安全安全实用实用有效有效对绝大多数人群有保护性作用，对绝大多数人群有保护性作用，使用后群体抗感染能力强，使用后群体抗感染能力强，理想的疫苗：同时诱导细胞和体理想的疫苗：同时诱导细胞和体液免疫，维持时间长。液免疫，维持时间长。接种程序简单，无严重不良反应，接种程序简单，无严重不良反应，便于运输和储存，价格低。便于运输和储存，价格低。活疫苗要求遗传性状稳定，活疫苗要求遗传性状稳定，无返祖、致癌和致畸作用，无返祖、致癌和致畸作用，无热原性和过敏原。无热原性和过敏原。抗感染抗感染抗肿瘤抗肿瘤计划生育计划生育防止免疫病理损伤防止免疫病理损伤3.3.疫苗应用疫苗应用疫苗疫苗死疫
12、苗）与减毒活疫死疫苗）与减毒活疫苗苗活疫苗活疫苗：人工的方法使病原体减毒减毒或从自然界筛选病原体无毒株无毒株或微毒株微毒株所制成的活的活的微生物制剂。也称减毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。死疫苗死疫苗：选用免疫原性强免疫原性强的病原微生物，经人工大量培养，经理化方法将其杀死杀死后制成的疫苗。无毒力无毒力，但仍保持其免疫原性免疫原性。伤寒、百日咳、钩端螺旋体、斑疹伤寒、乙型脑炎等疫苗死疫苗与活疫苗特点的比较含义：含义：细菌外毒素经0.30.4%甲醛处理。特点：特点：失去毒性而仍保留其免疫原性。亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。食用转基因植物以预防接种已初步成功。含义：含义：细菌外毒素经0.30.4%甲醛处理。特点：特点：失去毒性而仍保留其免疫原性。主动免疫治疗主动免疫治疗被动免疫治疗被动免疫治疗刺激或增强机体免疫系统，使刺激或增强机体免疫系统，使机体自身产生抵抗疾病的能力机体自身产生抵抗疾病的能力输注免疫效应细胞或分子，输注免疫效应细胞或分子，发挥治疗疾病的作用发挥治疗疾病的作用又称又称 过继免疫疗法过继免疫疗法特异性免疫疗法特异性免疫疗法非特异性免疫疗法非特异性免疫疗法主动主动被动被动主动主动被动被动瘤苗瘤苗抗体、抗体、TILTIL佐剂（卡介苗）佐剂（卡介苗）LAKLAK、细胞因子细胞因子
