1、第十五章第十五章甾体激素类药物甾体激素类药物的分析的分析第1页，共44页。基本结构：环戊烷并多氢菲基本结构：环戊烷并多氢菲C20C21ABCD12345678910111213141516171819一、基本结构及分类一、基本结构及分类第2页，共44页。分类：分类：甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素第3页，共44页。二、结构与性质二、结构与性质 1.肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应C17 醇酮基醇酮基还还 原原 性性第4页，共4
2、4页。2.雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基、与羰基试剂反应试剂反应 C17 羟基羟基可成酯可成酯第5页，共44页。3.孕激素孕激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应C17 甲酮基甲酮基与亚硝基铁氰与亚硝基铁氰化纳反应化纳反应C17 乙酰氧基乙酰氧基C17 乙炔基乙炔基水解鉴定乙酸水解鉴定乙酸与硝酸银沉淀与硝酸银沉淀第6页，共44页。4.雌激素雌激素主要活性基团主要活性基团性性 质质A环为环为3OH 苯环苯环UV、与重氮苯、与重氮苯磺酸盐反应磺酸盐反应C17 乙炔基乙炔基与与Ag
3、NO3反应反应C17 羟基羟基可成酯可成酯第7页，共44页。二、鉴别试验二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应（一）与强酸的呈色反应甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl（母核（母核）第8页，共44页。与硫酸显色反应与硫酸显色反应 显显 色色 荧光荧光 加水稀加水稀泼尼松龙泼尼松龙 深红深红 絮状絮状灰灰泼尼松泼尼松 橙橙 黄黄蓝绿蓝绿炔雌醚炔雌醚 橙红橙红 黄绿黄绿 红色红色 炔雌醇炔雌醇 橙红橙红 黄绿黄绿 絮状絮状玫玫红红醋酸可的松醋酸可的松 黄或微黄或微 褪色并澄褪色并澄 带橙带橙 清清第9页，共44页。(二二)官能团的反应官能团的反应肾上腺皮肾上腺
4、皮质激素药质激素药物物呈色呈色四氮唑盐四氮唑盐费林试液费林试液多伦试液多伦试液OH1 C17 醇酮基醇酮基还原性还原性A.呈色反应呈色反应第10页，共44页。肾上肾上腺皮腺皮质激质激素药素药物物Cu2O橙红色橙红色碱性碱性酒石酸铜酒石酸铜B.沉淀反应沉淀反应Ag黑色黑色氨制硝酸银氨制硝酸银第11页，共44页。甾体类激甾体类激素药物素药物黄色的腙黄色的腙羰基试剂羰基试剂2.C3酮基和酮基和C20酮基酮基常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼第12页，共44页。黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色亚硝基铁亚硝基铁 氰化纳氰化纳其他甾体其他甾体淡橙色淡橙
5、色不显色不显色3.甲甲酮基呈色反应酮基呈色反应第13页，共44页。雌激素雌激素类药物类药物红色偶红色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸4.酚羟基酚羟基第14页，共44页。含炔基含炔基的甾体的甾体激素激素白色银盐沉淀白色银盐沉淀硝酸银硝酸银5.乙炔基乙炔基RCCHAgNO3RCCAg第15页，共44页。有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl6.有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 蓝色配合物蓝色配合物 第16页，共44页。-3-酮酮 240nm苯环苯环 280nmOCCC CCCCCC （三）（三）UV法法第17页，共44页。（四）（四）IR法
6、法第18页，共44页。（五）（五）TLC法法 主要用于甾体激素类药物主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别制剂的鉴别第19页，共44页。（六）（六）HPLC法法 主要用于甾体激素类药物制剂主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）醋酸氟轻松软膏）第20页，共44页。三、三、杂质检查杂质检查（一）有关物质检查（一）有关物质检查 定义定义 与标示药物结构不同的甾与标示药物结构不同的甾体化合物都称为体化合物都称为“有关物质有关物质”第21页，共44页。（1）TLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法）判定方法：判定方法：v 规定杂质斑点数目规定
7、杂质斑点数目v 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色第22页，共44页。（2）HPLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法）判定方法：判定方法：v 规定杂质峰数目规定杂质峰数目v 规定杂质峰面积规定杂质峰面积第23页，共44页。（二）（二）游离磷酸的检查游离磷酸的检查地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法对照品法第24页，共44页。（三）（三）有机溶剂残留量的检查有机溶剂残留量的检查 甲醇和丙酮甲醇和丙酮甲醇甲醇 0.3%丙酮丙酮 0.5%GC法法第25页，共44页。（一）（一）HPLC法法USP、BP、J
8、P均采用均采用RPHPLC（大多内标法）（大多内标法）特点特点 用样量少，灵敏度高，分离效用样量少，灵敏度高，分离效 果好，测定速度快果好，测定速度快例：黄体酮的含量测定：例：黄体酮的含量测定：ODS柱；柱；甲醇甲醇-水（水（65：35）；）；254nm内标：己烯雌酚内标：己烯雌酚（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）对利用结构特征设计的比色法有干扰）四、含量测定四、含量测定第26页，共44页。（二）（二）UV法法-3-酮酮 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化
9、激素孕激素孕激素 苯环苯环 280nm（）雌激素雌激素第27页，共44页。（三）比色法（三）比色法弱、非分弱、非分光光度活光光度活性药物性药物强分光强分光光度活光度活性药物性药物化学反应化学反应第28页，共44页。肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类C17-醇酮基醇酮基强还原性强还原性1.原理原理有有色色甲甲瓒瓒四四氮氮唑唑盐盐醇醇酮酮基基 COH-还原还原四氮唑比色法四氮唑比色法第29页，共44页。制备对照液 制备供试液加入四氮唑盐有色产物484nmAX CXAR标示量（%）=AXAR V标示量100%2、方法：以醋酸地塞米松为例第30页，共44页。3.讨论讨论（1）基团对反应速度的影响基团对反
10、应速度的影响C11=O C11OHC21OH C21-酯酯第31页，共44页。（2）溶剂、水分的影响溶剂、水分的影响含水量含水量5%含水含水10%A10%含水含水30%几无反应几无反应 无醛无水乙醇无醛无水乙醇醛醛 A 无水乙醇无水乙醇第32页，共44页。（3）O2与光线的影响与光线的影响反应过程反应过程反应产物反应产物怕光怕光避光、快速避光、快速O2影响影响颜色强颜色强度和稳度和稳定性定性隔绝空气、隔绝空气、快速、充快速、充N2第33页，共44页。（4）碱的种类及加入顺序）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳以氢氧化
11、四甲基铵的结果最佳碱碱试试液液四四氮氮唑唑盐盐皮皮质质激激素素溶溶液液加入顺序：加入顺序：第34页，共44页。（5）温度与时间温度与时间t甲瓒分解甲瓒分解ChP 25 4045第35页，共44页。肾上腺皮质激素、肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素C3酮基酮基1.原理原理异烟腙（黄）酮基异烟肼3CHCl（缩合）（缩合）异烟肼比色法异烟肼比色法第36页，共44页。2.测定方法测定方法第37页，共44页。3.讨论讨论反应速度反应速度（1）C3=O C17=O、C20=O C11=O 不反应不反应反应专属性反应专属性 C3酮基酮基第38页，共44页。（2）溶剂
12、的选择）溶剂的选择异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇甲醇、乙醇无水甲醇无水甲醇无水乙醇无水乙醇第39页，共44页。原理原理max=515雌激素雌激素Kober反应比色法反应比色法桃红雌激素乙醇42SOH第40页，共44页。1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构、熟悉本类药物的分类，掌握其结构 特征与分析方法的关系特征与分析方法的关系2、熟悉某些官能团的呈色反应，了解、熟悉某些官能团的呈色反应，了解其他鉴别方法其他鉴别方法3、掌握本类药物中其他甾体的检查方、掌握本类药物中其他甾体的检查方 法，了解其他特殊杂质的检查法，了解其他特殊杂质的检查第十章第十章 复习内容复习内容第41页，共44页。4、掌握四
13、氮唑比色法、异烟肼比色法、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法 的原理、方法及测定条件。了解的原理、方法及测定条件。了解 UV法、法、Kober反应比色法及反应比色法及HPLC 法在其含量测定中的应用法在其含量测定中的应用第42页，共44页。.Kober反应是指雌激素类药物与反应是指雌激素类药物与_共共热呈色。热呈色。()A.硫酸甲醇硫酸甲醇 B.硫酸乙醇硫酸乙醇 C.硫酸甲醛硫酸甲醛 D.硫酸醋酐硫酸醋酐第43页，共44页。用四氮唑比色法测定皮质激素类用四氮唑比色法测定皮质激素类药物，是利用药物，是利用C17 醇酮基的何种性醇酮基的何种性质质 A氧化性氧化性 B还原性还原性 C可加成性可加成性 D酸性酸性 E碱性碱性第44页，共44页。
