1、4.3 特殊变异菌的筛选方法：特殊变异菌的筛选方法：以以温度敏感突变温度敏感突变为例：为例：筛选方法筛选方法：用途用途：常用于提高代谢物产量：常用于提高代谢物产量原因：原因：是由于某一酶蛋白结构是由于某一酶蛋白结构改变后，在高温下活力丧失改变后，在高温下活力丧失重要性：重要性：如果此酶为蛋白质、如果此酶为蛋白质、核酸合成途径中所需的酶，核酸合成途径中所需的酶，则此变异株在高温下的表型则此变异株在高温下的表型就是营养缺陷型。就是营养缺陷型。4.3.1条件抗性突变型的筛选条件抗性突变型的筛选举例：举例：u由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌2256，经诱变处理，经诱变处理得到温
2、度敏感变异株得到温度敏感变异株Ts88:u30培养时能正常生长培养时能正常生长u40是死亡，但能在富含生物素的培养基中积累谷是死亡，但能在富含生物素的培养基中积累谷氨酸（而野生型却受生物素的反馈抑制）。氨酸（而野生型却受生物素的反馈抑制）。u在富含生物素的培养基中进行发酵时：在富含生物素的培养基中进行发酵时：u先在先在30（允许条件）中进行培养以得到大量菌细胞，（允许条件）中进行培养以得到大量菌细胞，适当时间后提高温度（适当时间后提高温度（40，非允许条件），即能获，非允许条件），即能获得谷氨酸的过量生产。得谷氨酸的过量生产。方法：梯度平板法（方法：梯度平板法（gradient plate）4
3、.3.2抗药性突变株的筛选抗药性突变株的筛选抗药性突变株的应用：抗药性突变株的应用：u作为菌株的遗传标记作为菌株的遗传标记u作为生产菌种（结构类似物抗性变异株）作为生产菌种（结构类似物抗性变异株）4.3.3抗生素抗性变异株的筛选：抗生素抗性变异株的筛选：与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体：与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体：营养缺陷型营养缺陷型：经诱变产生的一些合成能力出现缺陷，而必经诱变产生的一些合成能力出现缺陷，而必须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长的变异菌须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长的变异菌株。株。如：如：lys-，bio-野生型野生型：自然界分离到的任何微生物，在其发
4、生营养缺陷自然界分离到的任何微生物，在其发生营养缺陷突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。如：如：lys+;bio+;原养型原养型：指营养缺陷型突变菌株回复突变或重组后产生的指营养缺陷型突变菌株回复突变或重组后产生的菌株，与野生型的表型相同。菌株，与野生型的表型相同。4.3.4 营养缺陷型营养缺陷型(auxotroph)的筛选的筛选与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基基本培养基基本培养基（MM）-：凡是能凡是能满足野生型菌株满足野生型菌株营养要求营养要求的的最低成分的最低成分的合成培养基合成培养基。完全培养基完全培养
5、基（CM）+：满足一切：满足一切营养缺陷营养缺陷型型菌菌株株生长的天然或半生长的天然或半合成合成培养基。培养基。补充培养基补充培养基（SM）x：在：在MM中有针对性地加中有针对性地加入一或几种营养成分以满足相应入一或几种营养成分以满足相应营养缺陷营养缺陷型型菌株菌株生长的生长的合成合成培养基。培养基。营养缺陷型诱变筛选步骤及方法营养缺陷型诱变筛选步骤及方法auxo的鉴定的鉴定 诱变处理诱变处理auxo的浓缩的浓缩auxo的检出的检出缺陷缺陷型型的浓缩：的浓缩：抗生素法抗生素法原理：原理：青霉素、制霉青霉素、制霉菌素等抗生素作用于生菌素等抗生素作用于生长着的微生物细胞，对长着的微生物细胞，对休止
6、态细胞无作用。休止态细胞无作用。方法：将菌培养在含抗方法：将菌培养在含抗生素的生素的MM基中基中菌丝过滤法菌丝过滤法u适用于：适用于：丝状（放线菌、丝状（放线菌、霉菌）霉菌）u原理：原理：基本培养基上只有基本培养基上只有发育成菌丝；发育成菌丝；auxo孢子可孢子可通过滤膜，野生型菌丝不通过滤膜，野生型菌丝不能通过。能通过。逐个检出法：逐个检出法：缺陷缺陷型型的检出：的检出：影印平板培养法影印平板培养法夹层培养法夹层培养法生长谱法生长谱法 方法简便；方法简便；回变和污染不影响回变和污染不影响 结果结果 测定物质可为粉末测定物质可为粉末 或纸片或纸片 缺陷型缺陷型的鉴定的鉴定：测定一般应分两阶段：
7、测定一般应分两阶段：第一阶段：测定是哪类物质的缺陷第一阶段：测定是哪类物质的缺陷型；型；第二节段：根据第一阶段确定的范第二节段：根据第一阶段确定的范围，进一步确定是哪种具体化合物围，进一步确定是哪种具体化合物的的缺陷缺陷型；型；组合营养物法：组合营养物法：步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：a.将多种营养因子编组；将多种营养因子编组；b.将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养；将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养；c.结果分析；结果分析；如：如：一组：一组：1 2 3 4 5 二组：二组：2 6 7 8 9 三组：三组：3 7 10 11 12 四组：四组
8、：4 8 11 14 五组：五组：5 9 12 14 15营养因子分组编排时注意；营养因子分组编排时注意；1）每组内无重复的营）每组内无重复的营 养因子养因子 2）每组中应包含只出）每组中应包含只出 现一次的因子现一次的因子 3）每组中其他因子应）每组中其他因子应 分别出现二次分别出现二次 一组：一组：1 2 3 4 5 二组：二组：2 6 7 8 9 三组：三组：3 7 10 11 12 四组：四组：4 8 11 14 五组：五组：5 9 12 14 15组合补充培养基法：组合补充培养基法：将待测的菌点种到各种补充培养基上，逐个分析各菌的将待测的菌点种到各种补充培养基上，逐个分析各菌的缺陷缺陷类型，或快速分离出所需类型，或快速分离出所需缺陷缺陷类型的菌株。类型的菌株。ABFEDCHG缺陷型缺陷型的应用的应用 作为菌株的遗传标记：进行基因工程、诱变作为菌株的遗传标记：进行基因工程、诱变育种、育种、研究代谢过程时用作亲本标记；研究代谢过程时用作亲本标记；作为生产菌种：作为生产菌种：aa、核苷酸等生产菌种；、核苷酸等生产菌种；作为作为aa、维生素、碱基的测定菌株。、维生素、碱基的测定菌株。
