1、III.幾丁質及幾丁聚醣研究計畫 1.前言 (1)幾丁質、幾丁聚醣的生產製 造、檢測與應用整合型計畫 (2)二期計六年 (3)五十個子計畫 (4)國科會補助新台幣參仟肆佰萬2.研究成果(1)生產製造技術方面 a.原料儲存技術有關之研究成果 未處理之蝦殼廢棄物用酸液浸 泡，可以儲存在室溫十天以上 (陳榮輝，民88)。b.用化學法製備幾丁質、幾丁聚醣與幾 丁寡醣 *以回應曲面法探討由蝦殼廢棄物製備 幾丁質之最適條件及反應動力現象 (Chang and Tsai,1997;Chang et al.,1997)。大頭紅蝦殼 的最適製備條件分別為：-去碳酸鈣：常溫、約1.7N 的鹽酸、9 ml 酸液/g
2、 蝦殼粉 -去蛋白質：約75C、2.5N 的氫氧化 鈉溶液、流動良好的鹼液用量 -去乙醯反應：約107C、60%的氫氧 化鈉溶液 *以鹽酸水解幾丁質或幾丁聚醣製備 幾丁寡醣及運用HPLC分析寡醣之 方法(張克亮等，民89)。製備較高分子量 幾丁寡醣之最適化條件為：-60C、以高濃度酸液進行約一小 時的短時間作用 -幾丁聚醣經鹽酸水解後可得到較 多幾丁寡醣，但需約三小時之較 長時間*由魷魚加工廢棄物 軟骨部分製備幾丁質和幾丁聚醣之 方法，以及用氧化降解法製備幾丁 寡醣之方法(張克亮，民89;Chang et al.,2001)。臺灣二OO 三年國際科學展覽會作品名稱：利用奈米級的二氧化鈦 TiO
3、2在紫外光降解幾丁聚 醣的研究學 校：國立臺南第一高級中學-殷士閔 用二氧化鈦能在常溫下經紫外線催化，分解空氣中的水分子，產生自由基的特性，攻擊幾丁聚醣中碳與氧鍵結的部分，使chitin的分子量降解，並可利用氧化劑強度及反應時間的不同，降解出分子量不同的chitin。c.以蝦蟹殼廢棄物做為微生物碳源 生產酵素 以市售之廉價SCSP(shrimp and crab shell powder)為主要碳源，由 新竹南寮漁港土壤篩選到耐鹼性 之幾丁質酶生產菌 Pseudomonas aeruginosa K-187(Wang et al.,1995)。*廢棄蝦蟹殼粉、酸鹼處理過之蝦 蟹殼粉或酸鹼廢液亦
4、能被用來做 為生產幾丁質酶之主要碳源(Wang et al.,1997a;Wang and Hwang,1999)。*以酸/鹼處理過之蝦蟹殼粉比未處 理之蝦蟹殼粉更適於用來做為P.aeruginosa K-187 菌生產幾丁質 酶之主要碳源。-P.aeruginosa K-187 菌發酵蝦蟹殼 所得之發酵液裡，除了含有具抗細 菌效果之幾丁質酶之外，尚含對植 物病原黴菌具抗菌效果之其他成分。-為分子量66kDa 之高分子複合醣 類，命名為pafungin(Wang and Yieh,1999;Wang et al.,1999a,1999b)。*P.aeruginosa K-187菌所生產幾丁 質
5、酶可共價鍵結於AS-L (hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate)上(Wang and Chio,1997,1998a,1998b)：-AS-L能隨pH值變化而改變可溶 性的高分子聚合物。-酵素活性之固定化率可高達99%，活化能則由原先游離酵素之 9.9降為5.96 Kcal/g/mol -最適反應pH及溫度則分別移至pH 8及50C。-半衰期(4C)：游離酵素為9天，而 固定化之後則延長為13天。-經過十次批式之幾丁質水解反應 後，固定化幾丁質酶仍持有原有(反應前)活性之70%。-此菌所生產幾丁質酶經固定化後 ，仍有原先之抗菌(溶菌酶)
6、活性。-pafungin亦能被固定化於此種擔體 ，而且維持所具之抗菌活性。*P.aeruginosa K-187菌發酵蝦蟹殼廢 棄物所得之發酵液裡，尚具有能夠 用來進行蝦蟹殼去蛋白質之用的蛋 白質酶活性(Wang et al.,1999c)：*以固態培養方式進行去蛋白質時，對於蝦蟹殼粉及天然蝦殼之去蛋白 質率，分別為68%及82%(Wang et al.,1999c;Yang et al.,2000)。*以SCSP為碳源亦能培養出可發酵蝦 蟹殼廢棄物之數株細菌Bacillus spp.(Oh et al.,2000;Wang and Hwang,2001)。d.以微生物降解蝦殼生產幾丁質、幾丁
7、 聚醣及幾丁寡醣 *大頭紅蝦、龍蝦及紅蟳的殼以化學法 及生物法製取幾丁質 -大頭紅蝦之幾丁質純度最高，化學 法及生物法分別為94.8 及95.2%(乾 重，未脫色)。-化學法所得各幾丁質之5%氯化鋰/二 甲基乙醯胺(LiCl/DMAC)溶解度：i.大頭紅蝦為19.0%ii.紅蟳為18.7%iii.龍蝦為6.9%*用微生物可以水解蝦殼上的蛋白質 而得到幾丁質 雖然其純度(96%)略低於以強鹼處理 所得的幾丁質，但去聚合化及去乙 醯化較緩和，所得之幾丁質較適於 做生物醫材之原料。-以Pseudomonas maltophilia1-1 或 Candida parapsilosis CCRC 205
8、15發酵 去鈣後的蝦殼，可分離幾丁質(92 95%)，其廢液可做為微生物培養基及 有機液肥。但這二株菌不能水解魷魚鞘之蛋白質(經由酵素水解及電子 顯微鏡觀察，發現魷魚鞘外殼包裹一層膠原蛋白)。-自環境中分離出會產生幾丁質酶的細 菌，包括Pseudomonas maltophilia 1-1 、Cellulomonas flavigena NTOU 1、Aeromonas caviae D1 及Alteromonas haloplanktis K12。-P.maltophilia 1-1以0.38%(w/v)pH 8.39的 K2HPO4為基礎培養基發酵三天，將去鈣的蝦 殼中的蛋白質水解，而得到
9、幾丁質含量達 98%(乾重)的殘留物(陳幸臣與許嘉珍，民86)。-從土壤中分出一株Flavobacterium sp.能將幾 丁質的乙醯化程度由74%降低為64%。-以生物法製取未脫色的幾丁質(乾重98.3，乙 醯度為75.9%，分子量為3.8106)為原料，以 Amycolatopsis orientalis的部分純化幾丁質酶 加以水解以製取乙醯幾丁六糖，每毫升水溶 液可得1.49毫克的N-乙醯幾丁六糖(GlcNAc)6 ，即每克未脫色的大頭紅蝦幾丁質可獲得74 毫克的(GlcNAc)6。-C.flavigena 會產生N-乙醯葡糖胺酶及幾 丁二糖酶(Chen et al.,1997)。-A
10、.caviae會產生N-乙醯葡糖胺酶、幾丁 二糖酶及幾丁三糖酶，或利用分子生物 技術，以A.caviae 的重組幾丁質酶(Lin et al.,1997,1999)生產N-乙醯幾丁寡醣(一糖至 六糖)。-A.haloplanktis 會產生N-乙醯葡糖胺酶 及其他幾丁質酶。e.水溶性幾丁聚醣之製備技術 利用梅納反應或酵素轉醯基與果膠結合 製備水溶性幾丁聚醣(Chang et al.,1999)-幾丁聚醣可與葡萄糖等還原醣經梅納 反應可得46%至28%水溶性幾丁聚醣 ，溶解度在0.32 到1.0 g/dl之間 -亦可經由果膠酯酶之轉醯基反應與果 膠分子結合，可以改善幾丁聚醣之水 溶性(但產率、溶
11、解度均較低)。*以酵素法製備低分子量水溶性幾丁 聚醣 -幾丁聚醣(去乙醯度65%及80%)醋 酸鹽溶液可利用商業蛋白酵素快 速水解 i.粗胃蛋白酵素水解幾丁聚醣之最 終產物主要為分子量30000左右 之低分子量幾丁聚醣 ii.枯草菌血纖維蛋白酵素水解幾丁 聚醣之最終產物則為幾丁寡醣 -兩種酵素水解幾丁聚醣之最適條件 i.pH為24 ii.粗胃蛋白酵素之最適溫度為70 至 80C iii.粗枯草桿菌血纖維蛋白酵素之最 適溫度為30 至40C -兩種商品蛋白酵素經系列步驟純化可得 到幾丁聚醣酵素 i.枯草蛋白酶粗酵素製品可應用於降解 幾丁聚醣，製備幾丁寡醣，所製備幾 丁寡醣之組成為幾丁二醣至四醣以
12、及 若干較高聚合度之幾丁寡醣(廖玉滿等，民 89)。ii.市售鳳梨莖蛋白酶粗酵素製品可應用 於降解幾丁聚醣，製備不同低分子量 幾丁聚醣(平均分子量108至2.1KDa)。*以物理及物化方法製備水溶性幾丁聚醣 (陳榮輝等，民87)-以各種物理及物化方法包括五種方法 ，處理可得水溶性幾丁聚醣：i.剪力 ii.超音波 iii.剪力超音波合併 iv.熱與尿素 v.熱/尿素與超音波 -用物理及物化方法製備水溶性幾丁聚 醣之特性 i.可以控制去乙醯程度、分子量(Chen et al.,1996a,1996c,1996d,1998a)ii.分子量可高達900 kDa iii.操作簡單 iv.不必使用強酸強鹼
13、、有機溶劑，收 率高 v.可以此等方法得到幾丁寡醣 -水溶性的幾丁聚醣之特性 i.流體行為屬非牛頓流體-假塑性流體 ii.聚電解質性質在離子強度恆定為0.05 M iii.溶液之pH 由 4.0 增加到6.5，其表面 黏度會隨pH值的增加而下降 iv.表面黏度也會隨溶液之離子強度由 0增加至0.1M 氯化鈉而急速下降(3)分析測定技術方面 a.去乙醯程度測定 *改良Niola 等人(1993)之液相層析法(游 士弘，民88)-將離子交換層析管柱改為C8管柱 -可使管柱購置成本降低至原來之1/4 -較易操作及維護 -將水解方法改為真空水解法，可減 少層析時所產生之雜峰 *改良目前IR法之缺點(游
14、士弘，民88)-測定A1655/A3450之比值 -與NMR(nuclear magnetic resonance)所得之N-乙醯化程度 之值相關係數高(r=0.9913)-適用於低乙醯化程度之幾丁質產 品*建立以超臨界流體層析測定之新方 法(游士弘，民88)-樣品經酸水解 -添加丁酸做為內標準品 -利用超臨界流體層析定量水解液 中之乙酸 -計算求得去乙醯程度*超臨界流體層析 藉二氧化碳超臨界流體層析法 (Supercritical fluid chromato-graphy,SFC)，將小劑量待測 樣品引進適當之層析管柱進行 分析，樣品中的非芳香烴、單 環芳香烴及多環芳香烴經分離 後，經火焰
15、離子化偵測器檢測 出信號面積百分比，再推算出 各成分之質量百分比。*臨界點：當氣態與液態密度相同的點*超臨界：物質受壓力和溫度的影響而有三相 (phase)變化，所承受的溫度和壓力分別 超過臨界壓力(critical press,PC)和臨界 溫度(critical temperature,TC)(即超過兩 者之臨界點)時，則以超臨界流體 (supercritical fluid)型式存在 b.建立測定幾丁質類產品純度之方法(游士 弘，民88)利用上述測定去乙醯程度之樣品，配 合元素分析，可計算出樣品之純度 c.幾丁寡醣分離、增加偵測靈敏度之方 法(陳福智，民88)*建立以NH2及C18 分析
16、管柱分離，半 製備型管柱分離幾丁寡醣之方法 *建立以氯化甲苯醯(benzyl chloride)做 衍生化以增加幾丁寡醣偵測靈敏度之 方法 (4)應用技術方面 a.在化工上之研究成果 *陰離子型自由基物質可以快速將幾丁 聚醣分子鏈裂解 -在70C下，只要1.08克的過硫酸鉀 就可以在五分鐘內，將幾丁聚醣醋 酸水溶液的黏度降低至原先的1/5 (Hsu et al.,2001；董崇民等，民89a)。-幾丁聚醣可以做為陽離子型界面活 性劑，大幅增進乳化聚合反應速率 ，同時本身也參與了聚合體的合成 (Don et al.,2001)。*藉由不同種類的起始劑合成出不同 結構的幾丁聚醣共聚合體(徐世昌等，
17、民88；董崇民等，民89b；董崇民等，民89c)-若是利用熱分解型起始劑，如過 硫酸鉀，可以得到嵌段共聚合體 -若是利用氧化還原型起始劑，如 過渡金屬鈰離子，則可以得到接 枝共聚合體 *評估聚合體的生物分解性、生物相容 性、血液適合性、金屬螯合性及吸水 性等性質(以幾丁聚醣果膠複合顆粒 (composite particles)為例)-蛋白質釋放量在pH 1.4之環境下很微 量，但在pH 7.4下24小時會釋放出大 部分之蛋白質 -可用在結腸(colon)釋放生物活性物質 *探討幾丁聚醣在薄膜製備及蛋白質成 分控制釋放藥物載體上之應用 可應用在可食性膜及製藥業開發新產 品(Chang et a
18、l.,1999b;Chang and Lin,2000)b.在農業應用之研究成果 *Cellulomonas flavigena 之幾丁質酶能 抑制植物病原黴菌的生長(特別是立枯 黴菌)，因不影響土壤中的自然細菌相 ，可做為植物有害真菌類的生物抑制 劑。*pafungin藉由造成黴菌菌絲膨脹，而對 植物病原性黴菌Fusarium oxysporum 及其他多株病原性黴菌具有抑制生長 之效果(Wang et al.,1999a)*能夠有效防止青枯病之發生 *能發酵蝦蟹殼廢棄物，生產植物病原真 菌抗菌劑之數株細菌Bacillus spp.亦有抗 菌、抗蟲害及促進作物生長之效果(Wang et al
19、.,2001)。*蕪菁種子以幾丁聚醣處理後種植於田間 ，其根部所含幾丁質酶活性增加，以防 衛性酵素活性之增加可能有助於抵抗入 侵之病原菌。*將型幾丁質製成酸溶性與水溶性幾 丁聚醣，用於養殖污水的處理 -對魚病原菌的影響，添加量在50 ppm 以上者，抑菌能力與去乙醯度成正比 -水溶性幾丁聚醣的抑菌作用與酸溶性 者類似，不過其澄清效果更高 -不會提高COD與BOD、無魚腥味等優 點(因不使用醋酸為溶劑)-水溶性者較酸溶性者更適合於水質處 理(陳詠文與李錦楓，民87)。c.在幾丁質酵素之研究成果 *枯草菌粗酵素所含幾丁聚醣酶 (chitosanase)與其他微生物幾丁聚醣酶性質比 較，具有較低之最
20、適pH及活化 能，催化反應速率快，所以甚具 應用潛力。*鳳梨莖蛋白酶粗酵素(stem bromelain)-為一兼具蛋白酶及幾丁質酶活性之 幾丁聚醣酶，可應用在：i.在食品工業上可做為肉類嫩化劑 及啤酒製造之澄清劑 ii.快速降解幾丁聚醣(chitosan)而可 應用於低分子量幾丁聚醣及幾丁 寡糖(chitooligosaccharides)之製造 -降解幾丁聚醣之原因乃因含有幾丁 聚醣酶(chitosanase)之作用而非蛋 白酶之作用 -可水解乙二醇幾丁質，然水解幾丁 聚醣活性大於水解幾丁質活性，對 30-90%去乙醯度幾丁聚醣具有最 大之水解速率。*豬胃幾丁聚醣酶(Chang et al
21、.,1998,1999a,2000；廖玉滿等，民89)-豬胃蛋白酶粗酵素製品(pepsin from porcine stomach mucosa)可快 速降解幾丁聚醣 -可應用於製備低分子量幾丁聚醣 以親和層析技術除去胃蛋白酶可獲得幾丁聚醣酶，首度證實動物消化道含有幾丁聚醣酶 d.水溶性幾丁聚醣的應用 利用機械力量破壞幾丁聚醣的結晶 區，可以製備不同分子量、不同去 乙醯度的水溶性幾丁聚醣，以便應 用在食品(Chen and Chang,2001)、化妝品(Chen and Heh,1999,2000a,2000b)、醫療藥品。以化妝品的應用成果為例 *取代傳統添加劑 以不同克數、不同分子量之
22、水溶性 幾丁聚醣取代 -濕潤面膜之成膜劑 保濕效果則隨著水溶性幾丁聚醣 分子量增加而增加，濕潤面膜之 成膜時間較短 -活力滋養霜之界面活性劑 i.不同分子量之水溶性幾丁聚醣對活力滋養 霜之維生素E 釋放速率則無明顯差異 ii.使用含微脂粒之活力滋潤霜不會有紅腫現 象產生。塗抹後四十分鐘皮膚pH值回升至 正常的pH值範圍 iii.含微脂粒活力滋潤霜較不含微脂粒活力滋 潤霜對皮膚保水性之效果明顯來得好，塗抹後四週對皮膚之彈性值皆有增加之 情形 -防曬乳液之增稠劑及螯合劑的效果 防曬乳液之SPF值可達16 以上SPF(Sun Protection Factor)防晒指數，是皮膚抵擋紫外線的時間倍數：
23、一般黃种人的皮膚平均能抵擋陽光15分鐘而不被灼傷，若使用SPF15的防紫外線用品，便有約225分鐘的防晒時間(但指數與屏擋紫外線的能力並不成正比)*敏感性測試之結果 -三種產品皆無紅腫現象產生 -隨著水溶性幾丁聚醣濃度的增加 ，三種產品之表面黏度亦明顯上 升。-添加水溶性幾丁聚醣在多重乳化 W/O/W 型乳液於：i.內部相或外部相中，所製得之乳液對皮膚 有持久性之保溼效果 ii.外部相時，塗抹後、前四十分鐘之保溼效 果與水溶性幾丁聚醣之分子量成正比 iii.內部相或外部相中，皮膚pH值下降較控制 組(添加三仙膠)輕微 (推測是因為水溶性幾丁聚醣之胺基在酸性 溶液中質子化，減少游離之氫離子、使乳
24、 液之pH 值上升，所以皮膚pH 值下降較小)-添加水溶性幾丁聚醣之微脂粒增加 W/O/W型乳化液安定性(Chen et al.,2001a)-添加水溶性幾丁聚醣可以增加 W/O/W型多重乳化之形成率，且 形成率隨所添加之水溶性幾丁聚醣 之分子量成正比 e.在食品加工上的應用成果 *殼幾丁聚醣之抗菌活性隨去乙醯度增 加而增大 -95%去乙醯度幾丁聚醣對常見十二株 病原菌及腐敗菌之MIC(minimal inhibitory concentration)為50-200 ppm -生魚片若先浸泡於去乙醯度95%幾丁 聚醣溶液一小時，取出，置於冰箱貯 存，貯存期限可增加至少三天以上 (Tsai et
25、 al.,2001;Tsai and Su,1999a)*幾丁聚醣對細菌抑菌能力 -與菌株革蘭氏反應無關 -與菌體表面陰電性有關(Tsai and Su,1999b)-菌齡、作用溫度及pH值，以及環 境中鹽種類及含量，均影響其抑 菌能力 -尤其鹽類可能因與幾丁聚醣形成 錯合物而降低其對菌體之作用效 果(Tsai and Su,1999a)*幾丁聚醣對E.coli 之抑菌作用機制 可能是由於幾丁聚醣上帶正電荷之 -NH3+與陰電性菌體表面結合，進 而導致菌體表面穿孔，細胞內容物 ，如蛋白質及葡萄糖等流出死亡(Tsai et al.,1997)，間接驗証幾丁聚醣之抗菌 機制。*合成磺酸幾丁聚醣(s
26、ulfonated chitosan,SC)及磺酸苯幾丁聚醣(sulfobenzyl chitosan,SBC)對十二株常見食品病原菌及腐敗菌 均有良好的抑菌作用(Chen et al.,1999b,1999c)。-此衍生物取代程度會影響產品溶解度與 抗菌活性 -硫含量在2.5%至5.3%時，抑菌能力最 好，且水溶解度高 -應用在牡蠣保鮮上，可延長其在4C保 存期限至少七天以上(Tsai et al.,1997;Chen et al.,1998a,1999b,1999c)*混合型水溶幾丁寡醣 利用市售較廉價工業級酵素，包括 纖維素酶(cellulase)、脂肪酶(lipase)、半纖維素酶(h
27、emicellulase)及果膠 酶(pectinase)，製備抗菌性水溶幾丁 寡醣 -所得寡醣中聚合度(DP)5 者之百 分比為42.6%-此幾丁寡醣混合物具有很強抗菌活 性，其活性為幾丁聚醣之200-300 倍(依菌種而異)-將此寡醣應用在4C貯存的生乳，可抑制或降低病菌與腐敗菌生長 -生乳在4C經十二天貯存，菌數仍 維持在105 cfu/ml 以下(Tsai et al.,2000)*在煉製品(阿拉斯加鱈魚漿)的應用 -添加水溶性幾丁聚醣及酸溶性幾 丁聚醣皆有提高煉製品的膠強度 及曲折度之效果 -以水溶性幾丁聚醣的效果最好 -添加幾丁質者效果較差，尤其對 曲折度，會導致成品更易折裂 f.
28、幾丁寡醣做健康食品的成分之評估 *膳食幾丁聚醣對大白鼠脂質代謝與 糖代謝之影響 -幾丁聚糖會降低餐後三酸甘油脂 濃度，並降低VLDL及改變其組 成，提升HDL之濃度 i.幾丁聚醣會減少飲食脂質的吸收，增加糞便脂質的排泄。ii.大白鼠短時間(2-3週)攝取幾丁聚 醣後會降低血漿總膽固醇50%左 右，LDL-VLDL-膽固醇的濃度降 低，且沒有明顯的副作用，顯示 膳食幾丁聚醣有降低血脂質，改 善脂質代謝的功能(Chiang and Chen,1999a,1999b)。iii.大白鼠長時間(8-10週)攝食幾丁聚 醣後血漿總膽固醇濃度不但不會 下降(江孟燦與陳敏俐，民88)，而且會造成 大、小腸長度
29、的增加，盲腸pH值 的上升，糞便黏液素酶(muncinase)及-醛醣酸酶(-glucuronidase)活性的改變，顯示長時間攝食幾 丁聚醣會影響腸道生理。-利用Stroptozotocin 所引起的糖尿病大白 鼠為實驗動物 i.攝食幾丁聚醣對罹患糖尿病且併發高脂 血症的大白鼠，有明顯降低血漿總膽固 醇濃度的效果。ii.幾丁聚醣雖然不會影響糖尿病大白鼠 的血糖濃度及耐糖能力，但是幾丁聚 醣會明顯降低肝醣的含量。iii.幾丁聚醣具有降低第二類型糖尿病合 併高膽固醇血症之糖尿病病人血漿總 膽固醇及LDL-膽固醇濃度(Tai et al.,2000)iv.雖然幾丁聚醣會明顯降低正常大 白鼠的血漿果
30、醣胺(Fructosamine)濃度(Chiang and Chen,1999a,1999b)，但是對糖 尿病大白鼠卻沒有明顯的影響。v.不同黏度、相同去乙醯度之幾丁 聚醣對血膽固醇濃度沒有明顯的 影響，但黏度較高之幾丁聚醣會 有較低的肝臟游離及酯化型膽固 醇含量(Chiang et al.,2000)。-幾丁質、幾丁聚醣與肝機能 i.幾丁質對血漿及肝臟脂質沒有明顯的影響 ii.幾丁聚醣降低血漿中肝功能指標鹼性磷酸酶 (alkaline phosphatase,ALP)之活性 iii.幾丁聚醣會增加肝內抗氧化酵素活性及脂 質過氧化物濃度，促進肝臟脂質過氧化作 用 iv.幾丁聚醣會減少肝臟脂質的
31、堆積，特別是 膽固醇酯及三酸甘油酯的堆積 v.幾丁聚醣會影響肝臟醣類代謝酵素六碳醣激 酶(hexokinase)，降低血液果糖胺濃度 vi.攝取過多的幾丁聚醣(7%)會造成脂肪動員，並降低生長。*膳食幾丁聚醣對大白鼠生理影響之 研究成果 -腸內菌 i.腸內病菌Clostridium perfringens 對幾丁聚醣敏感，易被殺死 ii.乳桿菌(Lactobacillus)，則隨菌 種不同敏感性不同 iii.雙叉桿菌(Bifidobacterium)則普 遍對幾丁聚醣有抗性 -動物餵食試驗顯示動物攝食去乙醯 度50%、75%與95%幾丁聚醣 i.並未顯著影響其腸內菌相 ii.此乃腸道pH 值偏
32、微鹼性，降低 幾丁聚醣之抗菌性及以粉末狀幾 丁聚醣攝食，分子未展開而降低 抗菌活性(Tsai and Hwang,2001a,2001b)-負面結果 i.幾丁寡醣並不影響動物腸壁組織，但 攝食幾丁寡醣之動物體重明顯低於控 制組 ii.觀察飼養動物盲腸(ceca)中內容物的菌 相，發現一機緣性病原菌Bacteroides fragilis(占全部菌相分布的30%)iii.因此以幾丁寡醣或乙醯幾丁寡醣為健 康食品的成分，在臨床上尚需小心 (Chen and Chen,1999b)。g.幾丁質類產品之食用安全性及降解 重金屬銅毒害之作用 *幾丁質類產品之食用安全限量為:-幾丁質10%-低去乙醯度幾丁
33、聚醣5%-高去乙醯度幾丁聚醣2.5%-葡萄糖胺1.0%。*10%之低去乙醯度幾丁聚醣經老鼠長期食後，其血液中之血比容和血紅素會下降，血漿鐵之 濃度亦會下降 *5%以上之高去乙醯度幾丁聚醣則除血比容、血紅素和血漿鐵會下降外，肝腎功能指標亦會 受影響而上升 *葡萄糖胺則1.0%以上時，會使老鼠之血漿鐵 和肌酸酐(creatinine)下降 *低去乙醯度之幾丁聚醣稍具有舒解銅毒性之作 用，但高去乙醯度之幾丁聚醣則不具紓解毒銅 毒性之作用，反而會增加銅之毒性作用(Hwang et al.,1999)。h.在醫藥之之研究成果 *幾丁聚醣對外科傷口癒合之初期 反應具明顯之止血效果：凝血為傷口癒合之最初期反
34、應，幾丁聚醣藉由血小板之作用促進 傷口癒合。*幾丁聚醣對動物口腔外科傷口癒合之長 期影響：-拔牙傷口內部之幾丁聚醣顆粒對骨代 謝有刺激作用，形成骨代謝速率增加 -傷口骨缺損之邊緣呈現高度之骨骼轉 換現象 -有明顯之造骨細胞及新骨生成 -但因為幾丁聚醣顆粒之吸收較慢，故 而使傷口內部之癒合有些影響 i.其他研究成果 *可以操控幾丁聚醣分子的鏈柔軟度，進而製 備不同孔洞大小的薄膜、微膠囊，以應用於 純化、分離、組織培養、生物技術(Chen and Hua,1996a,1996b,1996c;Chen et al.,1996c,Chen and Tsaih,1997;Chen,1999)。*N-醯化改善幾丁聚醣薄膜物化特性以應用於 純化、分離、生醫技術上(Chen and Hua,1996b;Chen et al.,1998b)。*不同分子量、不同去乙醯程度之水溶性高分 子量幾丁聚醣在可增加載體如微脂(liposome)安定性上之應用(Chen et al.,2001a)。
