1、一氧化碳中毒动物模型复制一氧化碳中毒动物模型复制和形态学技术实验和形态学技术实验 石石 蜡蜡 包包 埋埋 技技 术术 1 1、熟悉石蜡包埋技术基本过程、熟悉石蜡包埋技术基本过程 在显微镜下要观察人体组织，必须将组在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难以办到的。于观察，但直接切取柔软组织是难以办到的。石蜡包埋法是将石蜡包埋法是将“支持物质支持物质”-石蜡渗石蜡渗入组织内部，为此，必须先将组织中入组织内部，为此，必须先将组织中水水分除净，分除净，用用酒精酒精进行脱水进行脱水(70(70808090
2、%95%l0090%95%l00)。再用。再用二甲苯二甲苯置换出组织中的酒精，使其透置换出组织中的酒精，使其透明，然后放入融化的明，然后放入融化的石蜡石蜡中。将浸蜡的组织块中。将浸蜡的组织块置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬度，切片机便能将组织切成薄片度，切片机便能将组织切成薄片。操作步骤操作步骤 n1.1.取材取材 直接取材或灌注后取新鲜组织直接取材或灌注后取新鲜组织 （不超过（不超过6h6h），切成），切成3 35 52mm2mm小块。小块。n2.2.固定固定 保持细胞原有形态和结构，解决组织保持细胞原有形态和结构，解决组织 自溶问题。自溶问题
3、。10%10%中性甲醛、中性甲醛、4%4%多聚甲醛等。多聚甲醛等。n3.3.冲洗冲洗 自来水流水冲洗，自来水流水冲洗，目的：停止固定液目的：停止固定液 对组织的作用，去除固定液，以免影响染色对组织的作用，去除固定液，以免影响染色。4.4.脱水脱水 通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，脱水酒精的浓度由低浓度开始，逐级升高浓度。脱水酒精的浓度由低浓度开始，逐级升高浓度。60%(1h)70%(1h)80%60%(1h)70%(1h)80%酒精酒精(1h)(1h)90%(1h)95%(2h)100%(2h)90%(1h)95%(2h)100%(2h)注意注意:脱水的具体
4、时间视组织块脱水的具体时间视组织块 大小体积与厚度而定。大小体积与厚度而定。n5.5.透明透明 透明剂常有二甲苯、冬青油等等。透明剂常有二甲苯、冬青油等等。n6.6.浸蜡浸蜡 将透明组织移入已熔化的石蜡中，使熔将透明组织移入已熔化的石蜡中，使熔化的石蜡能浸透到组织中，然后包埋成组织蜡块。化的石蜡能浸透到组织中，然后包埋成组织蜡块。浸蜡过程在温箱中进行，温度不能超过浸蜡过程在温箱中进行，温度不能超过6060o oC C，温，温度过高或时间过长，组织容易收缩和脆变。度过高或时间过长，组织容易收缩和脆变。方法：方法：1/21/2石蜡石蜡石蜡石蜡II石蜡石蜡IIII石蜡石蜡IIIIII。n 7.7.包
5、埋包埋 将组织块和石蜡置于包埋框内，将组织块和石蜡置于包埋框内，冷却即成蜡块，组织获得了一定冷却即成蜡块，组织获得了一定 硬度和韧度，就可以切成微薄的硬度和韧度，就可以切成微薄的 切片。切片。8.8.切片切片 载玻片先用蛋白甘油处理；载玻片先用蛋白甘油处理；LeicaLeica切片机进行切片，厚切片机进行切片，厚5m5m；4545o oC C漂烘仪内进行展片。漂烘仪内进行展片。9.9.裱片裱片 将蜡片裱贴于载玻片上将蜡片裱贴于载玻片上 10.10.烤片烤片 将切片烤干待用将切片烤干待用 Nissl body 染色技术染色技术 1.1.熟悉熟悉Nissl body染色原理染色原理 2.2.掌握掌
6、握Nissl body染色操作方法染色操作方法n尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神经元合成蛋白质的部位。经元合成蛋白质的部位。n机体组织是无色的，必须经过染色，增加组织结构机体组织是无色的，必须经过染色，增加组织结构的对比度，便于在显微镜下观察鉴别。甲苯胺蓝为的对比度，便于在显微镜下观察鉴别。甲苯胺蓝为碱性染料，可将尼氏体染为紫蓝色。碱性染料，可将尼氏体染为紫蓝色。n尼氏体形态和数量的观察可作为判定神经元功能状尼氏体形态和数量的观察可作为判定神经元功能状态的一种标志。态的一种标志。材材 料料 1.染色液、酒精、二甲苯等；染色液、酒精、二甲苯
7、等；2.2.染色缸、镊子、滤纸等；染色缸、镊子、滤纸等；操作步骤操作步骤 1 1、脱蜡：石蜡切片常规脱蜡至水、脱蜡：石蜡切片常规脱蜡至水 二甲苯二甲苯2020分钟分钟 *2 2次次 100%100%酒精酒精1010分钟分钟 90%90%酒精酒精 1010分钟分钟 80%80%酒精酒精 1010分钟分钟 70%70%酒精酒精 1010分钟分钟 蒸馏水蒸馏水 5 5分钟分钟 2 2、染色：、染色：20203030分钟（分钟（60600 0C C温箱）温箱）染液配制染液配制:甲苯胺蓝甲苯胺蓝 0.50.5克克 50%50%酒精酒精 100100毫升毫升 染后蒸馏水洗染后蒸馏水洗 3 3、分色：、分色：95%95%酒精分色酒精分色 1-21-2，镜下控制，镜下控制 4 4、脱水：、脱水：100%100%酒精酒精 10 10 X 2 X 2 5 5、透明：二甲苯、透明：二甲苯 5 5 X 2 X 2 6 6、封片：用中性树胶进行封片、封片：用中性树胶进行封片 7 7、观察：、观察：结结 果果n 对照组 实验组
